GB-T 4789.12-2003.pdf
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1、G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -2 0 0 3 前言 本标准对G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验肉 毒梭菌及肉 毒毒素检验 进行修订 本标准与G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按照G B / T 1 . 1 -2 0 0 0 对标准文本格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 本标准自实施之日 起, G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -1 9 9 4同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 卫生部兰州生物制品研究所、 中国疾
2、病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准主要起草人: 王成怀、 冉陆、 付萍、 姚景会。 本标准于1 9 8 4 年首次发布, 1 9 9 4 年第一次修订, 本次为第二次修订 G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 1 范 围 本标准规定了肉毒梭菌及肉毒毒素的检验方法。 本标准适用于各类食品和食物中毒样品中肉毒梭菌及肉毒毒素的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成
3、协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱: 0 0C- - 4 0C。 3 . 2 恒温培养箱: 3 0 士1 C, 3 5 士1 0 C, 3 6 士1 0C , 3 . 3 离心机: 3 0 0 0 r / m i n , 3 . 4 显微镜 : l o x-1 0 0 X, 3 . 5 相差显微镜。 3 . 6 均质器或灭菌乳钵。 3 . 7 架盘药物天平: 。 g -5 0 0 g , 精
4、确至。 . 5 g , 3 . 8 厌氧培养装置: 常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式。 3 . 9 灭菌吸管: 1 m1 ( 具0 . 0 1 m L刻度) , 1 0 m L ( 具0 . 1 m L刻度) 。 3 . 1 0 灭菌平皿: 直径 9 0 m m, 3 . 1 1 灭菌锥形瓶: 5 0 0 mL , 3 . 1 2 灭菌注射器: 1 mL , 3 . 1 3 小 白鼠. 1 2 g -1 5 g o 4 培养基和试荆 4 . 2 4 . 3 4 . 4 4 . 5 4 . 6 厄肉培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 6 7 ,
5、 卵黄琼脂培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 6 8 , 明胶磷酸盐缓冲液: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 2 3 , 肉毒分型抗毒诊断血清。 胰酶: 活力1 , 2 5 0 , 革兰氏染色液: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中2 . 2 , 5 检验程序 肉毒梭菌及肉毒毒素检验程序见图1 e G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -2 0 0 3 图 1 注 1 : 报告( 一)检样含有某型肉毒毒素。 注2 : 报告( 二) : 检样含有某型肉毒梭菌。 注3 : 报告(
6、 三) : 由 样品分离的菌株为某型肉毒梭菌。 如上所示, 检样经均质处理后及时接种培养, 进行增菌、 产毒, 同时进行毒素检测试验。毒素检测试 验结果可证明检样中有无肉毒毒素以及有何型肉毒毒素存在。 对增菌产毒培养物, 一方面做一般的生长特性观察, 同时检测肉毒毒素的产生情况。所得结果可证 明检样中有无肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌存在。 为其他特殊目的而欲获纯菌株, 可用增菌产毒培养物进行分离培养, 对所得纯菌株进行形态、 培养 特性等观察及毒素检测, 其结果可证明所得纯菌为何型肉毒梭菌。 6 操作步骤 6 . 1 肉毒毒素检测 液状检样可直接离心, 固体或半流动检样须加适量( 例如等量、 倍
7、量或5 倍量、 1 0 倍量) 明胶磷酸盐 缓冲液, 浸泡、 研碎, 然后离心, 取上清液进行检测。 另取一部分上清液, 调p H 6 . 2 , 每9 份加1 0 %胰酶( 活力1 , 2 5 0 ) 水溶液1 份, 混匀, 不断轻轻搅动, 3 7 0C 作用6 0 m i n , 进行检测。 86 G B / T 4 7 8 9 . 1 2 -2 0 0 3 肉毒毒素检测以小白鼠腹腔注射法为标准方法。 6 . 1 . 1 检出试验: 取上述离心上清液及其胰酶激活处理液分别注射小白鼠三只, 每只 0 . 5 m L , 观察 4d 。 注射液中 若有肉毒毒素存在, 小白鼠一般多在注射后2 4
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