GB-T 4789.32-2002.pdf
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1、I C S 0 7 . 1 0 0 . 3 0 C 5 3 r 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 4 7 8 9 . 3 2 -2 0 0 2 食品卫生微生物学检验 大肠菌群的快速检测 Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n f o r f o o d h y g i e n e r a p i d d e t e c t i o n o f c o l i f o r m b a c t e r i a 2 0 0 2 一 0 6 一 1 3发布2 0 0 2 一 1 0 一 0 1实施 中华人民共和国
2、国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发布 GB/ T 4 7 8 9 . 3 2 -2 0 0 2 目次 前言 ” “ . ,. I 引言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 。 ” 1 3 术语和定义 , ,. “ ” “ ,. ,. , ” 1 4 原理 ” , ” 1 5 试剂和培养基 ,. 1 6 设备和器材 2 7 检验程序 , ” 3 8 样品的制备 3 9 大肠菌 群的MP N计数 二3 1 0 大肠菌群的菌落计数 , ” 4 附录A( 规范性附录) 大肠菌群最可能数( MP N) 检索表 5 G s / T 4 7 8 9 - 3 2 -2 0 0 2 前 言
3、本标准规定了食品中大肠菌群的快速检验方法。本标准规定使用的培养基 MU G a l 肉汤中的4 一 甲 基伞形 酮 - (3 - D 一 半乳 糖昔与 美国 联邦 法规4 0 , 第1 4 1 节, 2 1 款( C o d e o f F e d e r a l R e g u l a t i o n s 4 0 , P a r t 1 4 1 . 2 1 ) 规定的检验大肠菌群所用的M I 琼脂的主要成分( 4 一 甲 基伞形酮一 件 D 一 半乳糖昔) 是同一物质。 本标准关于大肠菌群的菌落计数 , 参考了 I S O 4 8 3 2 c 1 9 9 1 ( EA微生物学大肠菌群菌落计数
4、法 通则 ( Mi c r o b i o l o g y -G e n e r a l g u i d a n c e f o r t h e e n u m e r a t i o n o f c o l if o r m s - c o l o n y c o u n t t e c h n i q u e ) , 本标准中的附录A是规范性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准主要起草单位: 镇江出人境检验检疫局、 中国标准化协会、 镇江质量技术监督局。 本标准主要起草人: 甄宏太、 李平、 张秀春A 继福。 G a / T 4 7 8 9 . 3 2 -2 0 0
5、 2 引言 大肠菌群系指一群能发醉乳糖、 产酸或醛, 并产生 各 半乳糖昔酶需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽 抱杆菌。该菌主要来源于人畜粪便, 故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量, 推断食品中有否 污染肠道致病菌的可能。如果大肠菌群存在于食品中, 表明未作有效的消毒处理、 加工后保存条件不良 或消毒后又受到污染。快速检验这些细菌, 有助于食品的卫生管理, 维护消费者的食用安全。 GB/ T 4 7 8 9 . 3 2 -2 0 0 2 食品卫生微生物学检验 大肠菌群 的快速检测 范围 本标准规定了食品中大肠菌群的快速检验和计数方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的快速检验和计数。 规范性引
6、用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日 期的引用文件, 其随后所有的 修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B 4 7 8 9 . 3 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定 GB 4 7 8 9 . 2 8 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 I S O 4 8 3 2 : 1 9 9 1 ( E ) 微生物学 大肠菌群菌落计数法通 则 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3 . 1 大肠菌群c o l i
7、f o r m b a c t e r i a 大肠菌群是革兰氏阴性、 无芽抱、 氧化酶阴性的杆状细菌, 为需氧和兼性厌氧, 可在有胆盐( 或具有 其他抑制生长的表面活性剂) 存在的情况下生长, 通常可在 3 6 士2 发酵乳糖并产酸和醛。具有件半 乳糖昔酶。 在本标准设定的条件下, 大肠菌群为能分解R - 半乳糖昔、 使培养基发出荧光或生成紫色( 或红 色) 菌落的一群革兰氏阴性无芽抱杆菌。 4原 理 4 . 1 最可能数( MP N) 法 大肠菌群可产生 各半乳糖昔酶, 分解液体培养基中的酶底物4 一 甲基伞形酮一 各D 一 半乳糖普( 以 下简称MUG a D, 使4 一 甲基伞形酮游离
8、, 因而, 在波长 3 6 6 n m的紫外光灯照射下呈现蓝色荧光。 4 . 2平板 法 大肠菌群可产生 件半乳糖昔酶, 分解培养基中的酶底物茜素一 份D - 半乳糖昔( 以下简称 Al i z - g a l ) , 使茜素游离并与固体培养基中的铝、 钾、 铁、 钱离子结合形成紫色( 或红色) 的 鳌合物, 使菌落呈现 相应 的颜色 。 试荆和培 养墓 5 . 1 磷酸盐缓冲液 按G B 4 7 8 9 . 2 8 -1 9 9 4 中3 . 2 2 规定进行制备。 5 . 2生理盐水 5 . 2 . 1 成分 氯化钠8 . 5 g G s/ T 4 7 8 9 . 3 2 -2 0 0 2
9、 蒸馏水1 0 0 0 m L 5 . 2 . 2制法 将抓化钠溶于蒸馏水, 1 2 1 C 蒸汽灭菌1 5 m i n , 5 . 3 MUGa l肉汤 5 . 3 . 1 成分 胰蛋白 陈或胰酪脉2 0 . 0 g 抓化钠5 . 0 g 无水磷酸氢二钾2 . 7 5 g 无水磷酸二氢钾2 . 7 5 g 月桂基硫酸钠。 . 1 g M U G . I ( 纯度不低于9 9 %) 0 . 0 8 g 蒸馏水1 0 0 0 mL 5 . 3 . 2制法 将各成分加热溶于蒸馏水中, 以1 5 % 2 0 肠氢氧化钠溶液调整p H值, 分装于2 0 m m X 1 5 0 m m试 管, 每管 9
10、 m L, 1 1 6 “C蒸汽灭菌 1 0 mi n , 最终 p H值 7 . 0 -7 . 2 。 待培养基冷却后, 以无菌手续于每管培养 液内加人0 . 1 mL经无菌水稀释的5 0 0 p g / mL头抱磺徒液或于 1 0 0 0 mL灭菌培养液内加 1 mL经无菌 水稀释的5 m g / m L 头抱磺吮液并以无菌操作分装试管。 注: 双料 MU Ga l 肉汤除燕馏水外, 其他成分加倍。 5 . 4 A l i z - g a l 琼脂 5 . 4 . 1 成分 胰蛋白脉或胰酪陈2 0 . 0 g 抓化钠5 . 0 g 无水磷酸氢二钾2 . 7 5 g 无水 磷酸二氢钾2 .
11、7 5 g 月 桂基硫酸钠。 . 1 g A l iz - g a l ( 纯度不低于9 7 写)0 . 0 5 g 异丙基硫代半乳糖昔。 . 0 3 g 硫酸 铝钾0 . 5 g 柠檬酸铁钱0 . 5 g 琼脂1 5 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 mL 5 . 4 . 2制法 将各成分放人蒸馏水中, 加热使溶化, 以1 5 % 2 0 % N a O H调整p H值, 分装烧瓶, 1 1 6 0C 燕汽灭菌 1 0 mi n , 最终p H值 7 . 0 -7 . 2 , 6 设 备和器材 培养箱: 3 7 士1 0C。 冷藏箱: 0 士4 C。 天平: 感量0 . 0 1 g 均质器或
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