GB-4789.30-1994.pdf
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1、中华 人民共和 国国家标准 食品卫生微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n o f f o o d h y g i e n e E x a mi n a t i o n o f L i s t e ri a m o a o c y t o g e n e s G B 4 7 8 9 . 3 0 -9 4 1 主肠内容与适用范围 本标准规定了单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法。 本标准适用于食品和食物中毒样品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。 2 引用标准 G B 4 7 8 9 . 2 8 食品
2、卫生微生物学检验 染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 温箱 3 0和 2 5。 3 . 2 天平。 3 . 3 5 0 0 m L三角瓶。 3 . 4 接种环。 3 . 5 接种针。 3 . 6 载玻片。 3 . 7 盖玻片。 3 . 8 显微镜或相差显微镜。 3 . , 平皿。 3 . 1 0 试管。 3 . 1 1 均质器。 3 . 1 2 无菌注射器。 3 . 1 3 吸管: 1 m L , 1 0 m L . 3 . 1 4 单核细胞增生李斯特氏菌标准株。 3 . 1 5 马红球菌。 4 培养垂和试荆 含。 . 6 %酵母浸膏的胰酪大豆肉汤( T S B - Y E )
3、 含 。 . 6 0 0 酵母浸膏的胰酪大豆琼脂( T S A - Y E ) E B增菌液: 见附录 A3 , L B增菌液( L B , , L B , ) : 见附录 A4 , 三糖铁( T S I ) 琼脂 , G B 4 7 8 9 . 2 8中 4 . 2 6 , 4 . 2 7 : 见附录A 1 : 见附录A 2 妇424.34.445 中华人民共和国卫生部 1 9 9 4 一 0 3 - 1 8 批准1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施 G B 4 7 8 9 . 3 0 -9 4 4 . 6 S I M 动力培养基: 见附录A5 . 4 . 7 血琼脂: G B 4
4、7 8 9 . 2 8 中4 . 6 . 4 . 8 改0的Mc B r i d e ( MMA) 35 脂: 见附录A5 , 4 . 9 硝酸盐培养基: G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 1 7 . 4 . 1 0 缓冲葡萄 糖蛋白 陈水( M R和V P 试验用) : G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 4 . 4 . 1 1 糖发酵培养基: G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 2 . 4 . 1 2 过氧化氢酶试验: G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 3 8 , 4 . 1 3 盐酸a y 咤黄( A c r i f l a v i n e H
5、 C l ) ( S i g m a ) . 4 . 1 4 蔡q酮酸钠盐( N a l a d i x i c a c i d ) ( S i g m a ) . 5 检验程序 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序如下 : 增菌 分离培养 纯培养 确证试验 3 2 7 G B 4 7 8 9 . 3 0 -9 4 6 操作步骤 6 . 1 样品的收集及处理 无菌采取样品2 5 g ( m L ) 放灭菌均质器中加2 2 5 m L E B 和L B增菌液中, 充分搅拌成均质。 如不能 及时检验, 可暂存4冰箱。 62 增菌培养 E B增菌液放3 0 士1 培养4 8 h -7 d , L B ,
6、增菌液2 2 5 m L放3 0 士1 0C, 培养2 4 h , 取出0 . 1 m l , 加 入1 0 m L L B : 增菌液中二次增菌。 6 . 3 分离培养 将E B增菌液和L B : 二次增菌液分离于选择培养基MMA琼脂平板上, 培养3 0 土1 4 8 h , 挑选可 疑菌落, 用白炽灯4 5 。 角斜光照射平板, 李斯特氏菌的菌落为灰蓝或蓝色, 小的圆形的菌落。 6 . 4 选5 个以上的上述可疑菌落接种三糖铁( T S I ) 琼脂和S I M动力培养基, 培养于2 5 士1 , 观察是 否有动力, 且成伞状或月芽状生长。一般观察2 -7 d , 阳性者可做下一步鉴定。
7、6 . 5 纯培养 将上述有动力、 形成伞状者并在三糖铁琼脂培基上层、 下层的产酸而不产硫化氢的可疑培养物接种 于胰酪陈大豆琼脂培养基( T S A - Y E ) 上, 做纯培养供做以下鉴定。 6 . 6 染色镜检 将上述可疑纯培养物做革兰氏 染色并做湿片检查; 李斯特氏 菌为革兰氏阳 性小杆菌, 大小为。4 - 0 . 5 W m X O . 5 -2 . 0 P m ; 用生理盐水制成菌悬液, 在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出现轻微旋转或翻 滚样的运动。 6 . 了 生化特性 将上述可疑菌做进一步的生化试验, 单核细胞增生李斯特氏菌的主要生化特性及有关菌的区别见 表 1 . 表 1 单
8、核细胞增生李斯特氏菌生化性状与有关菌的区别 菌种溶血反应 硝酸盐还原尿素酶MR - V P甘露醉鼠 李糖木糖七叶昔 单核细胞增生李斯特氏菌 ( L . m a n o c y t o g e n e s ) +/ + 绵羊李斯特氏菌 ( L . i v a n o v i i ) +/ + 英诺克李斯特氏菌 ( L. i n n o . . .) 十/ + 威尔斯李斯特氏菌 ( L. me l s h i me r i ) 十 / + 西尔李斯特氏菌 ( L. me l i g e r i ) +/ + 格氏李斯特氏菌 ( L. g r a y i ) +/ + 默氏李斯特氏菌 + / + (
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