GB-T 4789.6-2003.pdf
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1、G B / T 4 7 8 9 . 6 -2 0 0 3 前言 本标准对G B / T 4 7 8 9 . 6 -1 9 9 4 ( 食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验 进行修订。 本标准与G B / T 4 7 8 9 . 6 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按照G B / T 1 . 1 -2 0 0 0 对标准文本的格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 本标准自 实施之日 起, G B / T 4 7 8 9 . 6 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。、 本标准起草单位: 江西省卫生防疫站、 中国 疾病预防 控制
2、中 心营养与 食品 安全所。 本标准主要起草人: 何晓青、 冉陆、 付萍、 姚景会。 本标准于1 9 8 4 年首次发布, 1 9 9 4 年第一次修订, 本次为第二次修订。 G B / T 4 7 8 9 . 6 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验 1 范 围 本标准规定了食品中致泻大肠埃希氏菌的检验方法。 本标准适用于食品和食物中毒样品中致泻大肠埃希氏菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方
3、研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱: 0 0C - 4 0C。 3 . 2 恒温培养箱: 3 6 士1 C, 4 2 0C, 3 . 3 恒温水浴锅: 1 0 0 0C , 6 5 一6 8 C, 5 0 0 C。 3 . 4 显微镜: l o x一l o o x。 3 . 5 离心机: 3 0 0 0 r / m i n , 3 . 6 酶标仪。 3 . 7 均质器或灭菌乳钵。 3 . 8 架盘药物天平
4、: 0 g -5 0 0 g , 精确至 0 . 5 g , 3 . 9 细菌浓度比浊管: Ma c F a r l a n d 3 号。 3 . 1 0 灭菌广口瓶: 5 0 0 mL , 3 . 1 1 灭菌锥形瓶: 5 0 0 mL , 2 5 0 mL , 3 . 1 2 灭菌吸管: 1 m L ( 具0 . 0 1 m l , 刻度) , 5 m L ( 具。 . 1 m l , 刻度) 。 3 . 1 3 灭菌培养皿: 直径 9 0 mm, 3 . 1 4 灭菌试管: 1 0 m mX7 5 m m, l 6 m mX1 6 0 mm, 3 . 1 5 注射器: 0 . 2 5 m
5、 l , , 连接内径为1 m m塑料小管一段。 3 . 1 6 灭菌的刀子、 剪子、 镊子等。 3 . 1 7 小白鼠: 1日一4日龄。 3 . 1 8 硝酸纤维素滤膜1 5 0 m m x 5 0 m m, 向. 4 5 p m , IA 用时切成两张, 每张7 5 m m X 5 0 m m , 用铅笔划 格, 每格6 mmX6 m m, 每行 1 0 格, 分 s 行。灭菌备用。 G B / T 4 7 8 9 . 6 -2 0 0 3 4 培养基和试剂 4 . 1 乳糖胆盐发酵管: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 9 规定。 4 . 2 营养
6、肉汤: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 8 规定. 4 . 3 肠道菌增菌肉汤: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 1 8 规定。 4 . 4 麦康凯琼脂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 4 规定。 4 . 5 伊红美蓝琼脂( E MB ) : 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 5 规定。 4 . 6 三糖铁琼脂( T S I ) : 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 2 6 , 4
7、 . 2 7 规定。 4 . 7 克氏双糖铁琼脂( K I ) : 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 8 , 4 . 2 9 规定。 4 . 8 糖发酵管( 乳糖、 鼠李糖、 木搪和甘露醇) : 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 2 规定。 4 . 9 赖氨酸脱梭酶试验培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 2 规定。 4 . 1 0 尿素琼脂( p H 7 . 2 ) : 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 5 规定。
8、4 . 1 1 氛化钾( K C N) 培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 6 规定。 4 . 1 2 蛋白 脉水、 靛基质试剂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 3 规定。 4 . 1 3 半固体琼脂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 3 0 规定。 4 . 1 4 Ho n d a 氏产毒肉汤: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 3 4 规定。 4 . 1 5 E l e k氏培养基: 按G B / T 4 7
9、8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 3 5 规定。 4 . 1 6 氧化酶试剂: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 8 规定。 4 . 1 7 革兰氏染色液: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中2 . 2 规定。 4 . 1 8 致病性大肠埃希氏菌诊断血清、 侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清、 产肠毒素大肠埃希氏菌诊断血 清、 出血性大肠埃希氏菌诊断血清。 4 . 1 9 产肠毒素大肠埃希氏菌L T和S T酶标诊断试剂盒。 4 . 2 0 产肠毒素 L T和S T大肠埃希氏菌标准菌株。 4 . 2 1 抗工 一
10、T抗毒素。 4 . 2 2 多粘菌素B纸片: 3 0 0 1 U, 0 1 6 m m, 4 . 2 3 0 . 1 % 硫柳汞溶液。 4 . 2 4 2 %伊文思蓝溶液 5 检验程序 致泻大肠埃希氏菌检验程序见图 1 , G B / T 4 7 8 9 . 6 -2 0 0 3 检样 侧大肠菌群MP N2 2 5 mL 污染严重的检样匀液 2 5 g + 营养肉 汤 3 6 C t 1 I C6卜 乳精发醉阳性 的发醉管 肠道菌增菌 肉汤 黔 3 6 士1 C 1 1 8h- 2 4h 乳糖发醉或不发醉的菌落3 个一5 个, 级化醉一, 革兰氏阴性杆菌 T S I , 靛基质、 p H 7
11、. 2 尿素、 K C N ,翰氨酸、动力 T S I 底层+ , H , S - . K C N - .尿素- 非如左述的 各种反应结果 血清学试验 E TE C+ E P E C +或 E T E C+ ( 01 5 7 ) ETEC+ 非如左述的 各种结果 肠毒贵+ 栩氮酸一 ,艘基质+ 动力 一( 0 1 2 4 动力+ / 一 ) 肠道致病性大肠埃希氏菌 或 肠道出血性大肠埃希氏菌 产肠毒素大 肠埃希氏菌 肠道授袭性 大肠埃希氏菌 非致泻大 肠埃希氏菌 非大肠 埃希氏菌 报告 图 I 43 G B / T 4 7 8 9 . 6 -2 0 0 3 6 操作步葬 6 . 1 增菌 样品
12、采集后应尽快检验。除了易腐食品在检验之前预冷藏外, 一般不冷藏。以无菌操作取检样 2 5 g ( m L ) , 加在2 2 5 m L 营养肉汤中, 以均质器打碎1 m i n 或用乳钵加灭菌砂磨碎。 取出适量, 接种乳 搪胆盐培养基, 以测定大肠菌群M P N , 其余的移人 5 0 0 m L广口 瓶内, 于3 6 士1 C培养6 h 。挑取 1 环, 接种于1 管3 0 m L肠道菌增菌肉汤内, 于4 2 培养1 8 h , 6 . 2 分离 将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板; 污染严重 的检样, 可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板,
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