GB-T 4789.9-2003.pdf
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1、G B / T 4 7 8 9 . 9 -2 0 0 3 前言 本标准对G B / T 4 7 8 9 . 9 -1 9 9 4 ( 食品卫生微生物学检验 空肠弯曲菌检验 进行修订。 本标准与G B / T 4 7 8 9 . 9 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按G B / T 1 . 1 -2 0 0 0 对标准文本的格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 本标准自 实施之日 起, G B / T 4 7 8 9 . 9 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 中国进出口商品检验技术研究所、 中国疾病预防控制中
2、心营养与食品安全所。 本标准主要起草人: 孟洪德、 冉陆、 付萍、 姚景会。 本标准于1 9 8 4 年首次发布, 1 9 9 4 年第一次修订, 本次为第二次修订。 G B / T 4 7 8 9 . 9 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 空肠弯曲菌检验 范围 本标准规定了空肠弯曲菌的检验方法。 本标准适用于各类食品和食物中毒样品中空肠弯曲菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版
3、本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱: 0 0 C - 4 C , 3 . 2 恒温培养箱: 4 2 士1 0, 3 6 士1 -, 2 5 士1 C, 3 . 3 恒温水浴锅: 3 7 士1 C , 3 . 4 显微镜: l o x一l o o x。 3 . 5 相差显微镜。 3 . 6 离心机: 3 0 0 0 r / m i n , 3 . 7 均质器或灭菌乳钵。 3 . 8 厌氧罐: 带有双相压力表。 3 . 9 液氮罐。 3 .
4、 1 0 气袋。 3 . 1 1 灭菌厚壁毛细管。 3 . 1 2 灭菌培养皿: 直径9 0 m m, 3 . 1 3 灭菌锥形瓶: 5 0 0 mL , 3 . 1 4 灭菌刀、 剪子、 镊子等, 4 培养基和试剂 4 . 1 蛋白陈水: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 3 规定。 4 . 2 C a r y - B l a i r 氏运送培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 5 2 规定。 4 . 3 改良C a m p - B A P培养基: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0
5、 0 3中4 . 5 3 规定。 4 . 4 S k i r r o w氏培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 5 4 规定。 4 . 5 氧化酶试剂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 8 规定。 4 . 6 3 写过氧化氢液: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 2 0 规定。 4 . 7 1 %甘氨酸培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 5 6 规定。 4 . 8 3 0 b e g 禁吮酸圆形滤纸片。 4 . 9
6、三搪铁培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 6 规定。 4 . 1 0 革兰氏染色液: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中2 . 2 规定。 G B / T 4 7 8 9 . 9 -2 0 0 3 4 . 1 1 T T C琼脂: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 5 5 规定。 4 . 1 2 马尿酸钠培养基: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中3 . 9 规定 4 . 1 3 三氯化铁: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2
7、 0 0 3 中3 . 9 规定。 4 . 1 4 快速硫化氢( H , S ) 试验琼脂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 4 . 1 5 D NA酶甲基绿琼脂: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 5 1 中4 . 5 。 规定。 规定 。 5 检验程序 空肠弯曲菌检验程序见图 1 , 植样 改良。 u n 1 . s a e 布氏杆菌培养荃 氧.尸|- 擂门leseseseseseses卫.eeeeJ神| 徽奋一劝力式睦r味 朝一反- 直接相差俄粗 爪试珍 硫化纽试验 伟甘氨酸试验 血清分型 报告 图 1 6 操作步骤
8、 6 . 1 样品的采集及处理 食物样品采集后应尽快进行检验。如果样品必须运送和保存, 应使用 C a r y - B l a i r 半固体培养基。 弯曲菌的存活时间取决于温度, 在2 5 情况下, 其存活时间不到2 4 h 或更短, 因此样品在原始分离前需 6 2 G B / T 4 7 8 9 . 9 -2 0 0 3 放冰箱或冷处保存。 6 . 2 微份妞条件的制备 最佳微需氧条件是氧气为5 %、 二氧化碳为1 0 %, 氮气为8 5 %0 6 . 2 . 1 带有双相压力计( 可表示正负压的) 厌氧罐: 在装皿密封后, 先抽去罐内空气至负压7 . 3 X 1 0 “ P a ( 5
9、5 0 m m H g ) 处, 输人上述三种混合气体使罐内压力恢复于零; 再将罐内气体抽至负压7 . 3 X1 0 0 P a ( 5 5 0 m m H g ) 同样输人上述气体至零, 即可放置沮箱培养。 6 . 2 . 2 气袋法: 操作时只使用气体发生剂而不加催化剂。 6 . 2 . 3 双平板法: 取两块平板, 一块平板接种已知的兼性厌氧菌( 如变形杆菌) , 另一块平板接种样品, 去掉皿盖, 将含琼脂的两只皿相对合齐并用胶布粘封, 放人密封不漏气的罐内( 或袋内) 进行培养。由于 兼性厌氧菌生长的代谢作用, 可使小环境中的氧气浓度下降和二氧化碳浓度上升。 6 . 2 . 4 蜡烛缸
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