GB-T 4789.35-2003.pdf
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1、G B / T 4 7 8 9 . 3 5 -2 0 0 3 前言 本标准对 G B / T 1 6 3 4 7 -1 9 9 6 ( 乳酸菌饮料中乳酸菌微生物学检验 进行修订 本标准与G B / T 1 6 3 4 7 -1 9 9 6 相比主要修改如下: 按照G B / T 1 . 1 -2 0 0 。 对标准文本的格式和文字进行修改。 修改和规范原标准方法中的“ 设备和材料” 。 本标准自实施之日 起, G B / T 1 6 3 4 7 -1 9 9 6 同时废止。 本标准的附录 A是规范性附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 南京市卫生防疫站、 广东省食
2、品卫生监督检验所、 上海市食品卫生监督检验所、 中 国疾病预防控制中心营养与食品安全所 本标准主要起草人: 陈晓蔚、 刘敏、 杨明、 朱曼丹、 瞿明娟、 周蓓君、 杨宝兰、 李志刚 原标准于1 9 9 6 年首次发布, G B / T 4 7 8 9 . 3 5 -2 0 0 3 代替G B / T 1 6 3 4 7 -1 9 9 6 , G B / T 4 7 8 9 . 3 5 -2 0 0 3 食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验 乳酸菌饮料中乳酸菌检验 1 范 围 本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。 本标准适用于以鲜乳、 乳粉或辅以大豆等为原料, 经乳酸菌发酵加工制成的
3、具有相应风味的活性乳 酸菌饮料。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 GB / T 4 7 8 9 . GB / T 4 7 8 9 . 食品卫生微生物学检验方法总则 食品卫生微生物学检验方法染色法、 培养基和试剂 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 .1 乳酸菌l a c t i c a c i d b a c t e r i
4、 a 一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸, 需氧和兼性厌氧, 多数无动力, 过氧化氢酶阴性, 革兰氏阳性的 无芽胞杆菌和球菌。 3 . 2 乳酸菌菌落总数 l a c t i c a c i d a e r o b i c b a c t e r i a 检样在一定条件下培养后, 所得 1 m L ( g ) 检样中所含乳酸菌菌落的总数。 4 设备和材料 4 . 1 冰箱 : 0 一4 C。 4 , 2 恒温培养箱: 3 6 士I C e 4 . 3 恒温水浴锅: 4 6 0C11 C 4 . 4 显微镜: l o x一l o o x。 4 . 5 均质器或灭菌乳钵。 4 . 6 架盘药物天平:
5、。 g -5 0 0 4 . 7 锥形瓶: 5 0 0 mL , 4 . 8 广口瓶: 5 0 0 ml - , 4 . 9 灭菌吸管: 1 mL ( 具。 . 0 1 4 . 1 0 灭菌平皿: 直径 9 0 m m, 4 . 1 1 灭菌刀、 剪、 镊子。 9 , 精确至0 . 5 9 。 m L刻度) , 1 0 m L ( 具0 . 1 m l刻度) 。 5 培养基和试荆 5 . 1 改 良 T J A培养基( 改 良番茄汁琼脂培养基) G B / T 4 7 8 9 . 3 5 -2 0 0 3 5 . 2 改良MC培养基( Mo d i f i e d C h a l me r s
6、 培养基) 。 5 . 3 0 . 1 %美蓝牛乳培养基 5 . 4 6 . 5 %氯化钠肉汤。 5 . 5 p H 9 . 6 葡萄糖肉汤。 5 . 6 4 0 %胆汁肉汤。 5 . 7 淀粉水解培养基: 见第 A . 7 章。 5 . 8 精氨酸水解培养基: 见第 A . 8 章。 5 . 9 七叶昔培养基: 见第 A. 1 0 章。 5 . 1 0 革兰氏染色液: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 规定。 5 . 1 1 3 %过氧化氢溶液: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8规定。 5 . 1 2 蛋白陈水、 靛基质试剂: 按 G B / T 4 7 8 9
7、. 2 8规定。 5 . 1 3 明胶培养基: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8规定 5 . 1 4 硝酸盐培养基、 硝酸盐试剂: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 规定。 5 . 1 5 0 . 8 5 %灭菌生理盐水。 6 乳酸菌菌落总数的测定 6 . 1 检验程序 孚 L 酸菌菌落总数检验程序见图 6 . 2 操作步骤 6 . 2 . 1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样 2 5 ml . ( g ) 放人含有2 2 5 m 工灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内 作成 1, 1 0的均匀稀释液。 6 . 2 . 2 用 1 mL灭菌吸管吸取 1 , 1 0 稀释液 I
8、mL , 沿管壁徐徐注入含有灭菌生理盐水的试管内( 注意吸 管尖端不要触及管内稀释液) , 振摇试管, 混合均匀。 6 . 2 . 3 另取 1 mL灭菌吸管, 按上述操作顺序, 作1 0 倍递增稀释液, 如此每递增一次, 即换用 1 支1 mL 灭菌吸管。 6 . 2 . 4 选择2 个3 个以上适宜稀释度, 分别在作 1 0 倍递增稀释的同时, 即以吸取该稀释度的吸管移 1 mL稀释液于灭菌平皿内, 每个稀释度作两个平皿 27 6 G B / T4 7 8 9 . 3 5 一2 0 0 3 6 . 2 . 5 稀释液移人平皿后, 应及时将冷至50的乳酸菌计数培养基( 改良TJA或改良MC
9、) 注人平皿 约 15 mL , 并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾人加有 l m L稀释液检样用的灭菌生 理盐水的灭菌平皿内作空白对照, 以上整个操作自培养物加人培养皿开始至接种结果须在 20 m in内 完成。 6 . 2 . 6 待琼脂凝固后, 翻转平板, 置 36士1 温箱内培养 7 2h 士3h , 观察乳酸菌菌落特征( 见表 1 ) , 选取菌落数在 30一3 00 之间的平板进行计数。计算后, 随机挑取五个菌落数进行革兰氏染色, 显微镜检 查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性, 过氧化氢酶阴性, 无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实 为乳酸菌菌落计算出该皿内的乳酸菌数
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