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1、I C S 月 4 4 6 5 . 0 2 0 . 3 0 暑昌 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 0 一1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 实验动物微生物学检测方法( 3 L a b o r a t o r y a n i ma l -Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n me t h o d s 2 0 0 1 一 0 8 一 2 9发 布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1实施 中华人民共和匡 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 周 GB/ T 1
2、4 9 2 6 . 5 01 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 目录 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 0 -2 0 0 1 实验动物酶联免疫吸附试验 1 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 1 -2 0 0 1 实验动物免疫酶试验. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1 实验动物
3、免疫荧光试验. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 3 -2 0 0 1 实验动物 血凝试验 二 二 ” 二 二 二 . . 1 2 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 实验动物血凝抑制试验 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 实验动物免疫酶组织化学法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 G s / T 1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 前言 本标准规定了免疫酶组织化学法所用试剂、 器材和操作步骤等。 本标准由中华人民共和国科学技术部提
5、出并归口。 本标准起草单位: 中国实验动物学会。 本标准主要起草人: 贺争鸣。 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 实验动物免疫酶组织化学法 GB/ I 1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 La b o r a t o r y a n i ma l -I mmu n o h i s t o c h e mi s t r y( I H) 范围 本标准规定了免疫酶组织化学法( I H) 所用试剂、 器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒抗原的检测。 原理 用已知的特异性抗体与标本中待测抗原反应, 如待测抗原是特异性抗体的相应抗原则形成抗原抗 体复合物。此抗原抗体复合物仍
6、保持其抗原活性, 可与相应的第二抗体酶结合物结合, 遇酶底物产生颜 色反应。在普通显微镜下, 根据颜色的反应判定结果。 主要试剂与器材 3 . ,试剂 3 . 1 . 1 抗病毒单克隆抗体或抗血清。 3 . 1 . 2 羊或兔抗小鼠、 大鼠、 地鼠、 豚鼠、 兔、 犬、 猴 I g G抗体标记辣根过氧化物酶。 3 . 1 . 3 P B S (. 0 1 mo l / L, p H7 . 6 ) 氯化钠8 . 5 g 磷酸二氢钠( N a H 2 P 0 , 2 H 2 0 ) 0 . 2 0 g 磷酸二氢钠( N a H 2 P O a 1 2 H 2 0 ) 3 . 1 2 g 蒸馏水加至
7、1 0 0 0 m L 3 . 1 . 4 底物溶液 3 , 3 一 二胺基联苯胺盐酸盐( D AB ) 4 0 mg P B S 1 0 0 mL 丙酮5 mL 3 %过氧化氢。 . 1 m L 3 . 2 器材 3 . 2 . , 石蜡切片机或冰冻切片机。 3 . 2 . 2 载玻片及盖玻片。 3 . 2 . 3 普通显微镜。 操作步骤 4 门冰冻切片风干后用丙酮固定 1 0 - 1 5 m i n , 石蜡切片, 常规脱蜡至 P B S ( 切片应用白胶或铬矾明胶 做粘合剂, 以防脱片) 。 4 . 2 去内源酶 用 。 . 3 %过氧化氢甲醇溶液或 1 %盐酸酒精 3 7 C 作用 3
8、 0 mi n a 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 1 一 0 8 - 2 9 批准2 0 0 2 - 0 5 - 0 1 实施 2 0 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 4 . 6 4 . 7 4 . 8 4 . 9 4 . 1 0 胰蛋白酶消化 需要时用胰蛋白酶消化处理, 以便充分暴露抗原。 漂洗 P B S洗 3次, 每次 5 m i n . 封闭 5 %小牛血清或 1: 1 0 稀释的正常马血清, 3 7 C湿盒中作用 3 0 m i n , 加适当稀释的已知单抗或抗血清, 3 7 C 湿盒中作用 1 h或 3 0 m i n后 4 过
9、夜。 漂洗同4 . 4 0 加适当稀释的第二抗体酶结合物, 3 7 0C 湿盒作用 1 h , 漂洗同4 . 4 , 底物显色 新鲜配制的 D A B溶液显色 5 1 0 mi n后漂洗。 衬染 苏木素或甲基绿衬染细胞核或细胞质。 常规脱水、 透明、 封片、 显微镜观察。 结果判定 对照片本底清晰, 背景无非特异着染, 被检物呈黄至徐褐色着染, 即可判为阳性。 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档, 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件, 请发站内 信和我联系!我一定帮你解决! 提供优质文档, 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件, 请发站内 信和我联系!我一定帮你解决! 本人有各种国内外标准 20 余万个, 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准,全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址:豆丁下载网址: http:/
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