GBT 19915.8-2005.pdf
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1、I C S 0 7 . 1 0 0 . 3 0 C 5 3 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 9 9 1 5 . 8 -2 0 0 5 猪链球菌 2 型毒力因子荧光 P C R 检测方法 P r o t o c o l o f r e a l - t i m e P C R a s s a y f o r v i r u l e n c e f a c t o r s o f S t r e p t o c o c c u s s u i s t y p e 2 2 0 0 5 - 0 9 - 2 7 发布 2 0 0 5 - 1 1 - 0 1 实施 中华人民共
2、和国国家质量监督检验检疫总局 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布 GB / T 1 9 9 1 5 . 8 -2 0 0 5 前言 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由国家标准化管理委员会提出。 本标准由全国动物防疫标准化管理委员会归口。 本标准由中国检验检疫科学研究院和江苏出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人: 林祥梅、 吴绍强、 韩雪清、 贾广乐、 刘建、 梅琳、 陈国强、 张敬友、 姜众、 唐泰山。 本标准为首次发布。 G B/ T 1 9 9 1 5 . 8 -2 0 0 5 猪链球菌Z型毒力因子荧光P C R 检测方法 范围 本标准规定了猪链球菌 2
3、型毒力因子 MR P和E F检测的荧光 P C R操作方法。 本标准适用于检测生猪拭子、 增菌培养物、 疑似病料及猪组织样品中猪链球菌2型菌株的致病力。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2 . 1 毒力因子v i r u l e n c e f a c t o r 猪链球菌 2型菌株的致病力与其毒力因子直接相关。猪链球菌 2型的毒力因子有溶菌酶释放蛋白 ( MR P ) , 胞外因子( E F ) , 溶血素、 英膜多搪以及 4 4 k D a 蛋白、 I g G结合蛋白、 纤毛粘着素等。其中, 溶菌 酶释放蛋白( MR P ) 和胞外因子( E F ) 是最主要的两个毒力因子,
4、 可作为判定菌株毒力的指标。一般认 为表型 MR P + E F十为强致病株, MR P + E F一为弱致病株, MR P - E F一为非致病株, 未 发现 MRP -E F+表型 。 3缩略语 本标准采用下列缩略语 : 荧光 P C R M R P EF Ct 值 F A M TAM RA 荧光聚合酶链反应 溶菌酶释放蛋白 胞外 因子 荧光信号到达设定的闽值所经历的循环数 6 - 狡基荧光素 四 甲基罗丹明 4 实验材料与仪器 4 . 1 实验试荆 实验试剂包括: 猪链球菌 2 型毒力因子荧光 P C R检测引物、 探针、 阳性对照及常规 P C R反应试剂; 商品化的组织基因组 D N
5、A提取试剂盒, 具体提取操作参照说明书进行。 4 . 2仪器 所用仪器包括: 荧光 P C R仪; 高速冷冻离心机; 台式离心机; 旋涡混匀器; 冰箱( 2 0C - 8 和一2 0 两种) ; 微量可调移液器( 。 . 1 p L -2 K L , 2 K L -2 0 1s L , 2 0 ii L -2 0 0 p L , 1 0 0 Ei L -1 0 0 0 p L 等规格) 和 相应配套的吸头。 GB / T 1 9 9 1 5 . 8 -2 0 0 5 操作方法 5 . 1方法概要 荧光 P C R方法是一种快速、 灵敏、 特异的检测病原体的方法。本研究选择猪链球菌 2型的 MR
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