GBT 14701-2002.pdf
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1、i c s 6 5 - 1 2 0 B 4 6 石日 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 c B / T 1 4 7 0 1 -2 0 0 2 代替( ; B / T 1 4 7 0 1 -1 9 9 3 饲料中维生素 B : 的测定 D e t e r mi n a t i o n o f v i t a mi n B 2 i n f e e d s 2 0 0 2 一 1 0 一 3 1 发布2 0 0 3 一 0 4 一 0 1实施 中华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 GB / T 1 4 7 0 1 -2 0 0 2 月 U胃 本标准修订了G
2、 B/ T 1 4 7 0 1 -1 9 9 3 饲料中维生素B : 的测定 , 修订后的方法具有适用范围广、 检测 限低、 高效、 快捷、 准确的特点 本标准参考了美国“ 化学分析协会” 第六十七期发表的 复合预混料中抗坏血酸、 烟酸胺、 毗哆醇、 硫 胺素及核黄素的液相色谱分析方法 和美国公职分析化学家协会( 1 9 9 。版) 食物和维生素制品中的核 黄素荧光测定法 而制定。 本标准与 G B / T 1 4 7 0 1 -1 9 9 3的主要技术差异: 标准规定了两种方法, 方法 1 为荧光分光光度法, 保留GB / T 1 4 7 0 1 -1 9 9 3的全部内容, 在范围中补充了
3、复合预混合饲料, 将重复性允许差“ 相对相差” 改 为“ 相对偏差” ; 方法 2为高效液相色谱法, 确定了试样的提取条件、 色谱条件及重复性要求, 并确定 了 该 法适用于维生素B : 含量大于1 0 m g / k g 的复合预混合饲料及维生素预混合饲料。 本标准规定了荧光分光光度法为仲裁法。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位: 国家饲料质量监督检验中心( 北京) 本标准主要起草人: 李兰、 陈必芳。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: G B / T 1 4 7 0 1 -1 9 9 3 . GB/ T 1 4 7 0 1 -2 0 0 2 饲料 中维
4、生素 B 2 的测定 范 围 本标准规定了用荧光分光光度仪和高效液相色谱仪测定饲料中维生素B : 含量的两种方法。 本标准规定的方法 1 适用于饲料原料、 配合饲料、 浓缩饲料、 复合预混合饲料、 维生素预混合饲料中 的维生素 B , 的测定。待测液中维生素B z 检测浓度为 。 . 0 5 p g / mL -0 . 2 p g / mLo 本标准规定的方法 2 适用于维生素 B : 含量大于 1 0 mg / k g的复合预混合饲料、 维生素预混合饲料 中维生素 B, 的测定 。 2规范性 引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件, 其随后所有的
5、 修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B / T 1 4 6 9 9 . 1 饲料采样方法 方法 1 : 荧光分光光度法( 仲裁法) 1 1 原理 维生素 B( 即核黄素C, Ha o N, Oa ) 在 4 4 0 n m紫外光激发下产生绿色荧光, 在一定浓度范围内其荧 光强度与核黄素含量成正比。 用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质, 由还原前后荧光强度之差与内 标荧光强度的比值计
6、算样品核黄素的含量。 3 . 2 试剂和溶液 除非另有说明, 所用试剂均为分析纯的试剂, 水为蒸馏水, 符合 G B / T 6 6 8 2中3 级用水或相当纯度 的水 。 3 . 2 . 1 氢氧化钠溶液, c ( N a O H ) =0 . 0 5 m o l / L . 3 . 2 . 2 氢氧化钠溶液, c ( N a O H ) 一1 . 0 m o l / L o 3 . 2 . 3 盐酸溶液, c ( H C I ) =0 . 1 m o l / L , 3 . 2 . 4 盐酸溶液, c ( H C l ) =1 . 0 m o l / L o 3 . 2 . 5 连二亚硫酸
7、钠( N a 2 S z 0 , ) ( 保险粉) , 防止吸潮。 3 . 2 . 6 高锰酸钾溶液, 4 0 g / Lo I2 . 了冰 乙酸 。 3 . 2 . 8 冰乙酸溶液, c ( C H , C O OH) =0 . 0 2 mo l / L: 将 1 . 8 ml冰乙酸用水稀释至 1 0 0 0 mL o 3 . 2 . 9 过氧化氢溶液, 1 0 0 m L / I , 现用现配。 3 . 2 - 1 0 维生素B : 标准溶液: 3 . 2 - 1 0 . 1 维生素 B : 储备液 工: 核黄素纯品( 中国药典参照标准) 于五氧化二磷干燥器中干燥 2 4 h , 溶 解于
8、冰乙酸溶液( 3 - 2 - 8 ) 中, 在蒸气浴上恒速搅动直至溶解, 冷却后稀释至 5 0 0 m L。盛人棕色瓶滴加甲 苯覆盖, 冰箱4C 保存, 保存期 6 个月。该溶液含 0 . 1 m g / m工维生素 B i e 3 . 2 . 1 0 . 2 维生素B : 贮备液 ll: 取维生素 B贮备液 ( 3 - 2 . 1 0 . 1 ) 1 0 m L用冰乙酸溶液( 3 - 2 - 8 ) 稀释至 1 0 0 mL, 盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖, 冰箱 4 C保存, 保存期 3 个月, 该溶液中含 1 0 p g / mL维生素B i o I GB/ T 1 4 7 0 1 -2 0
9、 0 2 3 . 2 - 1 0 . 3 维生素B : 标准工作液: 取维生素 B , 贮备液 1 ( 3 . 2 . 1 0 . 2 ) 1 0 m l, 用水稀释至 1 0 0 mL , 现用 现配。 该溶液中 含1 p g / m l 一 维生素B , o 3 . 2 门1 荧光素标准溶液: 3 . 2 . 1 1 . 1 荧光素贮备液: 称取荧光素 。 . 0 5 0 g , 用水稀释至 1 0 0 0 m L, 盛于棕色瓶中冰箱 4 C 保存。该 溶液中含 5 0 p g / mL荧光素。 3 . 2 . 1 1 . 2 荧光素标准工作液: 取 1 ml荧光素贮备液( 3 . 2 .
10、 1 1 . 1 ) , 用水定容至 1 0 0 0 M I, 盛人棕色瓶 中, 低温保存。该溶液每毫升中含 。 . 0 5 p g 荧光素 3 . 2 - 1 2 嗅甲酚绿p H指示剂 取澳甲酚绿 0 . 1 g , 加氢氧化钠溶液( 3 - 2 . 1 ) 2 . 8 m l _ 使之溶解, 再加水稀释至 2 0 0 ml 。变色范围 p H3 . 6 一5 . 2 . 3 . 3 仪器、 设备 3 . 3 . 1 荧光分光光度计。 3 . 3 . 2 分析天平: 感量0 . 。 0 0 1 g 3 . 3 . 3 电热恒温水浴。 3 . 3 . 4 具塞玻璃刻度试管, 1 5 m L.
11、3 . 4 试样的制备 按 GB / T 1 4 6 9 9 . 1采样, 选取具有代表性的样 品至少 5 0 0 g , 四分法缩减至 1 0 0 g , 磨碎, 通过 0 . 2 8 mm孔筛, 混匀, 装人密闭容器中, 避光低温保存备用。 I5 分析步骤 注意: 全部操作避光进行。 15 . 1 称样 原料、 配合饲料、 浓缩饲料、 复合预混合饲料称取 Ig -2 g , 精确至 0 . 0 0 1 g ; 维生素预混合饲料称取 0 . 2 5 g -0 . 5 0 g , 精确至 0 . 0 0 0 1 g , 将试样置于 1 0 0 ml 、 容量瓶中。 3 . 5 . 2 试样溶液
12、的制备 向盛试样的容量瓶中加 6 5 m L盐酸溶液( 3 . 2 . 3 ) , 于沸水浴中加热 3 0 min( 或于 1 2 1 C-1 2 3 0C 1 5 k g 高压釜中加热 3 0 mi n ) , 开始加热5 mi n -1 0 mi n时常摇动容量瓶, 以防试样结块。 冷却至室温后, 用氢氧化钠溶液( 3 - 2 - 2 ) 调节p H至6 . 。 一冬5 , 然后立即 加稀盐酸溶液( 3 . 2 . 4 ) 使p H值约为4 . 5 ( 嗅甲 酚绿指标剂变为草绿色) 。用水稀释至刻度。通过中速无灰滤纸过滤, 弃去最初 5 ml , 一 1 0 m l-溶液, 收 集滤液于
13、1 0 0 mL锥形瓶中。取整份清液, 滴加稀盐酸检查蛋白质, 如有沉淀生成, 继续加氢氧化钠溶 液, 剧烈振摇, 使之沉淀完全对高含量样品, 取整份的澄清液, 用水稀释至一定体积使维生素 B : 约为 0 . 1 p g / mL . 15 . 3 杂质氧化 于a , b , c 三支 1 5 m L刻度试管( 3 - 3 . 4 ) 中各吸入试样溶液( 3 . 5 . 2 ) 1 0 ml - , 同时做平行, 向试管a中 加人1 mL 蒸馏水, 向试管 b中加人 1 m工 _ 维生素 B工作液( 3 - 2 - 1 0 - 3 ) 。然后各加入冰乙酸( 3 . 2 . 7 ) 1 ml
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