GBT 17494-1998.pdf
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1、G B / T 1 7 4 9 4 -1 9 9 8 前言 马传染性贫血病( 简称马传贫, 下同) 的流行, 曾给我国养马业造成巨大的经济损失。经过多年的防 制, 在全国范围内取得显著成效, 已达到控制标准。 为消灭马传贫, 提供一个先进有效、 特异敏感、 反应快 速、 操作方便、 易于推广的检测方法, 是十分必要的。为此制定马传染性贫血病间 接E L I S A技术规程。 马传贫间接E L I S A技术自1 9 8 3 年建立以来, 已在全国主要养马省区推广应用十余年之久, 在马传 贫防制工作中发挥了重要作用。 特别是研制的试剂实现了标准化、 商品化, 并以低耗优质的产品质量, 为 该方法
2、推广应用奠定了基础, 在这方面我们已走在世界前列。 本标准的附录A、 附录B , 附录C都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由中华人民共和国农业部畜牧兽医司归口。 本标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所负责起草。 本标准起草人: 戴玉坤。 中华 人 民共 和 国 国 家标 准 马传染性贫血病间接E L I S A技术规程 G B / f 1 7 4 9 4 -1 9 9 8 R u l e s o f i n d i r e c t E L I S A t e c h n i q u e f o r e q u i n e i n f e c t i o u s a n
3、 e mi a d i s e a s e 1 范围 本标准规定了马传染性贫血病间接E L I S A技术规程的测定原理、 仪器设备、 试剂、 配制溶液、 操作 步骤、 结果判定。 本标准适用于检测马血清中的马传贫疫毒抗体。可用于生产和经营马匹者对未注射马传贫疫苗马 匹的检疫, 马传贫病马的定性; 也可用于对注射马传贫疫苗马匹的免疫状态进行测定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文, 通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时, 所示版本均 为有效。 所有标准都会被修订, 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 N Y 1 2 7 -1 9 8 7 马传贫酶联免疫吸附试
4、验( E L I S A间接法) 抗原、 酶标记抗体制造及检验试行规 程 3 测定原理 用特制的马传贫病毒抗原( N Y 1 2 7 ) , 包被聚苯乙 烯微量板孔, 使免疫反应在固相载体上进行。 当被 检血清中有马传贫病毒抗体存在时, 则与孔壁上的抗原形成抗原一 抗体复合物, 再与酶标记的抗体( 抗马 免疫球蛋白) 反应, 最后通过测定酶作用底物催化后的产物, 进行定性、 定量抗体测定。 4 仪器设备 吸管: 1 m L , 5 m L , 1 0 m L ; 量桶: 5 0 m L , 1 0 0 m L , 1 0 0 0 m L ; 烧杯: 5 0 m L , 1 0 0 m L ;
5、玻璃滴 管: 每 滴体积约2 0 - 3 0 p L ; 血清稀释板: 2 。 孔板每孔容积为1 m L ; 定量加液器: 1 m L分装定量; 微量吸液器: 5 0 p L , 1 0 0 p L ; 分 析天平: 感量。 . 0 0 1 g ; 托盘夭平: 感量。 . 0 1 g ; 水浴锅 ; 酶标测试仪。 5 试荆 除特别注明外, 所用试剂皆为分析纯。 国家质f技术监督局1 9 9 8 一 0 8 一 3 1 批准1 9 9 9 一 0 1 一 0 1 实施 G B / r 1 7 4 9 4 -1 9 9 8 磷酸氢二钠; 磷酸二氢钠; 氯化钠; 柠檬酸; 磷苯二胺( 化学纯) ;
6、过氧化氢( 浓度 3 0 %) ; 吐温- 2 0 ( T w e e n - 2 0 ) ; 白明胶( G e l a t i n w h i t e ) ( E . Me r c k ) ; 健康牛血清( 无污染) ; 浓硫酸( 纯度 9 5 %-9 8 %) ; 酶标记抗体( 冻干品, 活性和特异性应符合N Y 1 2 7 , 见附录A ) ; 马传贫病毒抗原包被板( 活性和特异性应符合N Y 1 2 7 , 见附录B ) ; 阴性及阳性对照血清( 冻干品, 活性和特异应符合N Y 1 2 7 ) . 6 配制溶液 6 . 1 磷酸盐缓冲液( 0 . 0 2 m o l / L p H
7、7 . 2 P B S ) 6 . 1 . 1 0 . 2 m o l / L 磷酸氢二钠溶液: 称取磷酸氢二钠( N a i H P O , 1 2 H z O ) 7 1 . 6 4 g , 先加适量的去离子 水加热溶解, 最后定容至1 0 0 0 m L , 混匀。 6 . 1 . 2 0 . 2 m o l / L磷酸二氢钠溶液: 称取磷酸二氢钠( N a H , P O , “ 2 H , O ) 3 1 . 2 1 g , 先加适量的去离子水 加热溶解, 最后定容至1 0 0 0 m L , 混匀。 6 . 1 . 3 量取 。 . 2 m o l / L磷酸氢二钠溶液 3 6 0
8、 m L , 0 . 2 m o l / L磷酸二氢钠溶液 1 4 0 m L , 称取氯化钠 3 8 g , 混在一起, 用去离子水溶解稀至5 0 0 0 ml-, 6 . 2 洗液( 0 . 0 2 m o l / L p H 7 . 2 P B S - 0 . 0 5 % 吐9- 2 0 ) 量取0 . 0 2 m o l / L p H 7 . 2 P B S 1 0 0 0 m L , 加入0 . 5 m L 吐温- 2 0 , 混匀。 6 . 3 血清及酶标记抗体稀释液( 0 . 0 2 m o l / L p H 7 . 2 P B S - 0 . 0 5 %吐温- 2 0 -
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