HG-T-3645-1999.pdf
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1、H C / T 3 6 4 5 一 1 9 9 9 前言 本标准的制定. 可改变我国生产企业胶乳及干胶制品中可水抽提蛋白质含量无试验方法的现状, 为 提高我国企业胶乳制品的测量水平及我国胶乳制品出口创汇打下坚实的基础。 本标准由中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出。 本标准由全国橡标委胶乳制品分技术委员会归口。 本标准主要起草单位: 化工部株洲橡胶塑料工业研究设计院。 本标准主要起草人: 汤胜修、 盛腊云、 李枚辉。 中华人民共和国化工行业标准 天然橡胶手套中水抽提蛋白质 测定方法L o w r y 法 H G / T 3 6 4 5 一 1 9 9 9 Me t h o d f o r
2、t h e d e t e r mi n a t i o n o f a q u e o u s e x t r a c t a b l e p rot e i n i n n a t u r a l r u b b e r g l o v e s u s i n g t h e L o w r y m e t h o d .告: 使用本标准的人应该熟悉通常的实脸室操作。本标准不愈味.提出所有的安全问瓜, 只涉及与本 标准有关的安全问肠。位用者有资任谊立适当的安全和健康规范. 并保证遵守目家的任何规定。本标 准要求由具有实验室操作技能的并达到相当水平的分析工作者在装备了适当设备的实验室里进行。
3、 范围 本标准提供了一个测定天然橡胶手套中水溶性蛋白质含量的方法。 本标准也适合于其他橡胶制品中水溶性蛋白质含量的测定。 2 原理 水溶性蛋白质可从缓冲溶液中抽提出来, 然后沉淀提纯, 把蛋白质从有可能干扰沉淀的水溶性物质 中分离; 再溶解提纯出来的蛋白质, 用L o w r y 方法进行比色, 测定蛋白质含量。 3 定义 本标准采用下列定义。 3 . 1 浓缩因子 F C o n c e n t r a t i o n f a c t o r 被用来沉淀的蛋白质提抽液与用来再溶解蛋白质沉淀的溶液的体积比。例如: 将4 m l蛋白质提抽 液进行沉淀, 然后用 1 ml . 溶液再溶解沉淀, 则
4、浓缩因子F等于4 0 3 . 2 L o w r y 对本标准来说, “ L o w r y “ 这个词用来表示原L o w r y 分析法的任何改进形式。 3 . 3 蛋白质 p r o t e i n 本标准中提及的蛋白质是来自天然乳胶及其制品中的水溶性蛋白质和多肚。 4 仪器、 设备 4 . 1 离心机: 性能至少为1 0 0 0 o xg . 离心管: 容量为5 0 m !和 l O ml , 对蛋白质吸附力小的聚丙烯管。 4 . 2 分光光度计和比色皿。 4 . 3 旋涡混合器。 4 . 4 微量移液管、 容量瓶 4 . 5 聚丙烯管: 容量为5 0 m l 一 和1 0 m l ,
5、 对蛋白质吸附力小的聚丙烯管。 -一-一 . 一一 -一一一一 国家石油和化学工业局 1 9 9 9 - 0 8 - 1 2 批准 2 0 0 0 - 1 0 - 0 1 实施 HG / T 3 6 4 5 一 1 9 9 9 5 试荆 5 . 1 所用水均为重蒸馏水. 所用试剂均为分析纯或相当纯度的试剂。 5 . 2 抽提试剂: 0 . 0 2 m o l / L , p H=7 . 4 的磷酸盐缓冲溶液。 5 . 3 改进的L o w r y 蛋白质试验试剂。 5 . 3 . 1 试剂A: 将 1 0 份试剂C和。 . 2 份试剂D混匀, 检验的当天配制。 5 . 3 . 2试剂 B :
6、稀释的福林试剂( 7 . 2 份福林试剂十2 . 8 份水) 。 5 . 3 . 3 试剂C : 6 g 碳酸钠溶解在l o o ml 一 水中。 5 . 3 . 4 试剂D : 1 . 5 g 硫酸铜和3 g 柠檬酸钠溶解在 l o o m l水中。 5 . 3 . 5 氢氧化钠溶液: c ( N a OH) =0 . 2 m o l / l . , 5 . 3 . 6 脱氧胆酸钠( D O C ) , o . 1 5 %( 质量/ 体积) , o . 1 5 g 脱氧胆酸钠溶解在l o o m l水中。 5 . 3 . 7 三抓乙酸( T C A ) : 7 2 ( 质量/ 体积) , 7
7、 2 g 三抓乙酸溶解在1 0 0 m L水中。 5 . 3 . 8 确钨酸( P T A ) : 7 2 写( 质量/ 体积) , 7 2 g 礴钨酸溶解在1 0 0 m L 水中 5 . 3 . 9 蛋白质母液: 制备一个浓度为1 m g / m L的牛血清白蛋白 标准蛋白质溶液, 冷藏下, 溶液能贮存 4 8 h , 温度为一1 8 C 时, 可贮存2 个月; 融化时, 要求用水浴加热到4 5 并保退 1 5 m i n . 注: 冷藏时间为录计时间.为进免反复的冷冻和融化 建议将蛋白质母液分几份贮存, 每份足够制备一条标准曲 线. 或在试验步骤中足够使用。 6 测定步. 6 . 1 蛋
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