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1、I C S 月 4 4 6 5 . 0 2 0 . 3 0 暑昌 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 0 一1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 实验动物微生物学检测方法( 3 L a b o r a t o r y a n i ma l -Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n me t h o d s 2 0 0 1 一 0 8 一 2 9发 布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1实施 中华人民共和匡 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 周 GB/ T 1
2、4 9 2 6 . 5 01 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 目录 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 0 -2 0 0 1 实验动物酶联免疫吸附试验 1 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 1 -2 0 0 1 实验动物免疫酶试验. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1 实验动物
3、免疫荧光试验. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 3 -2 0 0 1 实验动物 血凝试验 二 二 ” 二 二 二 . . 1 2 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 实验动物血凝抑制试验 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 实验动物免疫酶组织化学法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 前言 本标准修订了G B / T 1 4 9 2 6 . 2 4 -1 9 9 4 实验动物 小鼠肺
5、炎病毒检测方法 中的血凝抑制试验方 法, 将其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位 : 中国实验动物学会。 本标准主要起草人: 贺争鸣。 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 实验动物血凝抑制试验 GB / T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 L a b o r a t o r y a n i ma l -Ha e mo g l u t i n a t i o n i n h i b i t i o n t e s t ( H A 1 ) 范 围 本标准规定了血凝抑制试验( H AI ) 所用试剂、 器材和操作步骤等。 本
6、标准适用于实验动物病毒抗体的检测。 2原理 某些病毒在一定的条件下, 能够选择性的凝集某些动物红细胞。 这种凝集红细胞的能力可被特异性 抗体所抑 制。 主要试剂与器材 试剂 1 血凝素抗原 血凝抗原除部分病毒( 如痘类病毒) 能与感染性颗粒分开外, 大部分是与病毒的感染性颗粒相关联, 3州引 凡培养于鸡胚或组织培养中的病毒及其抗原物质, 经离心除去沉淀, 均可用作血凝抑制试验的血凝素抗 原。见G B / T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1中表1 、 表 2 , 3 . 1 . 2 红细胞悬液 根据不同病毒血凝所需敏感红细胞制备悬液。一般将血液保存于阿氏溶液内, 使用前 p H
7、7 . 4 P B S 洗三次, 再悬于 p H 7 . 4 P B S中。 3 . 1 . 3 阳性血清 3 . 1 . 4 阴性血清 3 . 1 . 5 P B S ( 0 . 0 1 m o t / L , P H 7 . 4 ) 氯化钠8g 氯化钾0 . 2 g 磷酸二氢钾。 . 2 g 磷酸氢二钠( N a 2 H P 0 , 1 2 H , O ) 2 . 8 3 g 蒸馏水加至 1 0 0 0 MI 3 . 1 . 6 阿氏溶液 葡萄糖2 . 0 5 g 构椽酸钠o . 8 g 拘椽酸0 . 0 5 5 g 氯化钠0 . 4 2 g 蒸馏水1 0 0 mL 1 1 5 C , 3
8、 0 min灭菌, 保存于 4 C。 3 . 2器材 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 1 一 0 8 - 2 9 批准2 0 0 2 - 0 5 - 0 1 实施 1 6 GB/ T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 3 . 2 . 1 3 . 2 . 2 3 . 2 . 3 3 . 2 . 4 恒温培养箱。 微量震荡器。 微量血凝反应板( U型或 v型) 。 微量加样器( 容量 5 -5 0 pt_ ) 或微量稀释棒。 4操作步骤 4 . 1 血凝素滴定 将血凝素用P B S 做连续倍比 稀释, 每稀释度留2 5 y L于微量血凝板孔内, 再加2 5 K L
9、 P B S 和5 0 fA L 红细胞悬液, 摇匀。同时设立红细胞对照。置所需温度 3 0 6 0 m i n , 判定结果时将出现凝集“ +” 的最 高稀释度定为血凝素的效价。 4 . 2 待检血清处理 将被检血清置5 6 C 水浴 3 0 min 。 有的血清含有非特异性抑制素, 可用霍乱滤液处理, 即1 份血清加 4 份滤液, 混匀后置 3 7 C 水浴过夜, 再置 5 6 水浴 3 0 mi n 。有的血清含有非特异性凝集素, 可按血清体 积 1 / 1 0量加人 5 0 %红细胞悬液置 4 0C 1 6 h或室温 2h , 然后离心除去血球。 4 . 3 血清稀释 在微量血凝反应板
10、( u型或v型) 上, 自1 : 1 0 起作一系列倍比 稀释, 每稀释度留2 5 u L于血凝板 孔内, 另取1 : 1 0 稀释的血清2 5 k L , 作血清对照( 见表1 ) 0 4 . 4 滴加血凝素 在已稀释好的血清孔内( 除血清对照孔外) 加 2 5 y L血凝素( 根据血凝素不同, 稀释成 4 U或 8 U) , 血清对照孔加 2 5 Fa L P B S ,摇均后置所需温度作用3 0 mi n ( 见表 3 ) , 4 . 5 血凝素单位校对 滴加血凝素的同时, 将8 U血凝素稀释成4 U, 2 U, I U和1 / 2 u , 每孔2 5 K L , 摇匀后置所需温度作用
11、一定时间( 见表 2 ) , 4 . 6 红细胞对照 加P B S 5 0 K L ( 见表2 ) 0 4 . 7 血清对照( 见表 2 ) . 4 . 8 滴加红细胞悬液全部试验和对照孔内, 均加 5 0 I L红细胞悬液, 摇匀后置所需温度作用一定的 时间( 见表 3 ) , 判定结果 。 结 果判定 在对照系统( 阴性血清、 阳性血清、 待检血清、 抗原和红细胞) 成立的条件下判定结果。 判定时以完全不出现血凝的血清最高稀释度为血清的血凝抑制滴度。 各孔血凝结果以+十+、 +、 +、 +、 一表示。 十+十+: 红细胞一片凝集, 均匀铺于孔底。 +: 红细胞凝集基本同上, 孔底有大圈。
12、+: 红细胞于孔底形成一个中等大的圈, 四周有小凝块。 +: 红细胞于孔底形成一个小圈, 四周有少许凝块。 一: 红细胞完全不凝集, 沉于孔底。 GB/ T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 2 血球凝集抑制试验( 检测系统) 操作方法 孔 号3 4 5 6 8 9 1 0 1 1 稀 释 度1 / 1 0 1 / 1 0 1 / 2 01 / 4 01 / 8 0 1 / 1 6 0 1 / 3 2 0 1 / 6 4 0 1 / 1 2 8 0 1 / 2 5 6 0 1 / 5 1 2 1 2 红 细胞 对 照 一一 扎扎 待检血清. p L 血凝素, p L 乃扎 在
13、所 需 温 度 条 件 下 作 用 一 定 时 间 5050 肠50 P B S , p L 红细胞, A I 血球凝集抑制试验( 对照系统) 操作方法 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 血凝素单位4 2 1 1 / 2 P B S , y L 血凝索, p L 阳性血清, p L 阴性血清. p L 红细胞, p L 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 2 5 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5
14、0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 表 3 血凝抑制试验条件 病 毒血凝单位红 细 胞 抗原抗体作用加 灯 细 胸 后 判 定 阳 性 滴 度 备 注 作用温度, C 时间, mm温 度 , C TM EV S e n d a i KR V H- 1 RHD V C P V I CHV RV 8 4 8 8 8 8 4 4 人 “ 。 , 鸡 、 豚 鼠 豚 鼠 豚 鼠 人 ,0 ” 猪 人 “ 0 “ 鹅 6 0 3 0 3 0 3 0 3 0 3 0 3 0 1 2 0 2 2 22 22 22 22 2 2 或 3 7 3 7 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 4
15、3 7 4 2 0 1 0 2 0 2 0 1 0 8 0 1 6 0 1 6 0 疫苗保护效果滴度( HAI ) 疫苗保护效果滴度( HAI ) 疫苗保护效果滴度( E L I S A) 疫苗保护效果滴度( E L I S A) *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档, 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件, 请发站内 信和我联系!我一定帮你解决! 提供优质文档, 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件, 请发站内 信和我联系!我一定帮你解决! 本人有各种国内外标准 20 余万个, 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准,全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址:豆丁下载网址: http:/
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