GBT 19915.4-2005.pdf
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1、I CS 0 7 . 1 0 0 . 3 0 C 5 3 (Gs 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB / T 1 9 9 1 5 . 4 - 2 0 0 5 猪链球菌 2型三重 P C R检测方法 Me t h o d o f d e t e c t i n g S t r e p t o c o c c u s s u i s t y p e 2 b y t r i p l e - P C R 2 0 0 5 - 0 9 - 2 7发布2 0 0 5 - 1 1 - 0 1实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布 GB
2、 / T 1 9 91 5 . 4 -2 0 0 5 o li青 猪链球菌2型是链球菌属的成员, 其致病菌株可致猪链球菌病, 引起猪败血症、 脑膜炎等。人可通 过伤口感染该菌, 并导致死亡。为了区别正常猪所携带的猪链球菌 2型无毒菌株与发病猪分离的致病 菌株, 特制定本标准。本标准是采用现代分子生物学诊断技术制定的。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位: 南京农业大学。 本标准主要起草人: 陆承平、 姚火春、 范红结、 何孔旺。 GB / T 1 9 9 1 5 . 4 -2 0 0 5 猪链球菌 2 型三重 P C R检测方法 范围 本
3、标准规定了猪链球菌 2 型荚膜基因( c p s 2 ) , 溶菌酶释放蛋白基因( m r p ) 和o r f 2 这三个毒力基因 的三重P C R检测技术。 本标准适用于由猪链球菌 2 型致病基因和致病菌株的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法 术语 和
4、定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 . 1 猪链球菌2 型 S t r e p t o c o c c u s s u i s t y p e 2 猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌, 根据其荚膜多糖抗原的差异, 可分为 1 - 3 4 及 1 / 2共 3 5个 血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型, 不仅对猪致病性很强, 而且可以感染特定的人群, 是 一种重要的人畜共患病病原菌。 测定方法 4 . 1 方法提要 挑取可疑细菌培养物菌落, 加人 P C R反应管中, 进行 P C R扩增, 琼脂糖凝胶电泳检测 P C R产物, 与标准分子量标记比较, 来确定扩增产物的大小。 4 .
5、2 试剂和材料 除另有规定, 所用试剂均为分析纯, 水为符合 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 的灭菌双蒸水。 4 . 2 . 1 c p s 2 , m r p和o r f 2 的上下游引物, 按合成说明书使用。 4 . 2 . 2 T a q D N A聚合酶。 4 . 2 . 3 琼脂糖: 电泳级。 4 . 2 . 4 澳化乙锭。 4 . 2 . 5 分子量标记: DL - 2 0 0 0 , 4 . 2 . 6 T E 缓冲液: 1 0 m m o l / L T r i s - H C I ( p H 8 . 0 ) , l m m o l / L E D T A (
6、 p H 8 . 0 ) , 4 . 2 . 7 I O XP C R缓冲液: 1 0 0 m mo l / L K C 1 , 1 6 0 m mo l / L ( NH , ) 2 S O 1 , 2 0 m mo l / L Mg S O , , 2 0 0 m mo l / L T r i s - H C I ( p H 8 . 8 ) , 1 % T r i t o n X - 1 0 0 , 1 m g / m L B S A , 4 . 2 . 8 电泳缓冲液: 2 4 2 g T r is 碱, 5 7 . 1 mL冰乙酸, 1 0 0 mL 0 . 5 mo l / L E
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