SN-T-1151.5-2003.pdf
《SN-T-1151.5-2003.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《SN-T-1151.5-2003.pdf(7页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、SI 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 1 5 1 . 5 -2 0 0 3 对 虾杆 状病毒 ( B P) 检 测方法 P r o t o c o l o f d e t e c t i o n f o r B a c u l o v i r u s p e n a e i 2 0 0 3 - 0 5 - 2 8 发布2 0 0 3 - 1 2 - 0 1实施 中华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 S N / T 1 1 5 1 . 5 -2 0 0 3 前言 本标准是采用 O I E的 水生动物健康手册 2 0 0 0 年版的检疫规
2、程。 本标准的附录 A是规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 江育林、 陈莉莉、 潘坤永、 史秀杰。 S N/ T 1 1 51 .5 -2 0 0 3 对 虾 杆 状 病 毒 ( ,B P) 检 测 方法 范 围 本标准规定了用直接显微镜镜检和用聚合酶链式反应( P C R ) 技术检测对虾杆状病毒的方法。 本标准适用于对虾杆状病毒的鉴定及本病的流行病学调查、 诊断、 检疫和监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修
3、改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法( e q v I S O 3 6 9 6 : 1 9 8 7 ) G B / T 1 8 0 8 8 -2 0 0 。 出人境动物检疫采样 S N / T 1 1 5 1 . 3 -2 0 0 2 斑节对虾杆状病毒( MB V ) 诊断方法 试 荆和材料 1 阳性病毒D N A: 由O I E参考实验室提供或由国家质量监督检验检疫总局指定
4、的实验室提供。 2 水: 应符合 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2中一级水的规格。 3 T a q 酶: -2 0 保存, 不要反复冻融或温度剧烈变化。 4 d NT P : 含d C T P , d G T P , d A T P , d T T P各 1 0 mmo l / L , 5 引物: 有二对引物可选用。使用时浓度为 4 0 Is mo l / L 。其序列如下: B PI F: 5 - GAT - C TG C AA- GAGGAC - AAA- C C- 3 B P l R: 5 - A T C - G C T - A A GC T C - T G GC AT
5、- C C - 3 扩增目的基因中的 5 6 0饰 片段。 B P2 F: 5 - TGT- TC T- CAG- CCA- ATA- CAT- C G 3 B P 2 R: 5 - A T C - C T GT T T - C C A - A G C - T C T - G C - 3 扩增目的基因中的5 8 0 b y 片段。 6 异丙醇: 分析纯, 使用前预冷到一2 0 -C. 7 矿物油: 要求无DN A酶和R NA酶。 8 D NA分子量标准( Ma r k e r ) , 9 样品缓冲液: 按使用说明书中规定的比例与样品混合。 3段乳3.3.3. 3 . 3 3 . 3 4器材和设
6、备 4 . 1 P C R扩增仪。 4 . 2 电泳仪。 4 . 3 微量移液器及吸头。 4 . 4 紫外观察灯。 4 . 5 恒温培养箱。 4 . 6 普通冰箱和低温冰箱。 4 . 7 电动匀浆器。 4 . 8 普通显微境。 4 . 9 离心机和离心管。 4 . 1 0 剪刀、 镊子。 S N / T 1 1 5 1 . 5 -2 0 0 3 5 直接光学显徽镜检查 5 . 1 原理 取活的( 鲜活的、 濒死的或有损伤的) 对虾的 肝胰腺, 或者用收集到的粪便样品做湿压片, 观察B P 在肝胰腺中形成的有特征性的三角形包涵体. 52 新鲜组织湿片法 必须是活虾, 取出肝胰腺。幼体在解剖镜下将
7、肝胰腺摘出, 置于载玻片上, 小心地制备压片。用相 差或亮视野显微镜检查, 在 肝胰腺或中肠的湿压片中, 如果观察到上皮细胞的核内 有单个或多 个四面 体 的 包涵体, 就可以诊断为B P 感染。 包涵体呈四面体或金字塔形, 从金字塔底部到顶部的尺寸为 0 . 1 li m 2 0 u m 之间, 大多数垂直的长度为8 K m -1 0 ft m 。可与MB V的 球形包涵体明显区 分开来。 可以按照 S N/ T 1 1 5 1 . 3 -2 0 0 2中的方法做组织切片后进行光镜镜检包涵体。 5 . 3 粪便检查 粪便检查可在不杀死对虾的情况下检查对虾是否带有 B P 。该方法适用于稚虾或
8、大一些的对虾, 在 用非致死方法检查有经济价值的亲虾时特别适用。把对虾放在水簇箱、 产卵箱或其他合适的水箱中待 数小时, 直到水箱底部出现粪便。用塑料虹吸管吸取排泄物, 放在玻璃离心管中。把粪便制成湿片, 直 接用显微镜检查包涵体。B P的包涵体是明显的带折射的四面体, 高度在 0 . 1 fa m-2 0 p m之间。 聚合酶链式反应( P C R ) 6 1 样品 用收集到的粪便样品、 取活的对虾肝胰腺或保存在 9 5 环的乙醇中的对虾肝胰腺样品都可以用作 P C R检测的模板。 6 . 2 D N A抽提 在粪便或肝胰腺样品中加人消化缓冲液( 见附录 A ) , 样品和缓冲液的比例为 1
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- SN 1151.5 2003
链接地址:https://www.31doc.com/p-3798157.html