《3-可行性研究报告 (1).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《3-可行性研究报告 (1).pdf(12页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 附附 2 可行性研究报告可行性研究报告 (编写提纲) 一一、项目的实施方案、项目的实施方案(限(限 3000 字)字) (一)总体方案、研发内容; (1)利用基因芯片技术筛选出于肝癌早期转移相关基因利用基因芯片技术筛选出于肝癌早期转移相关基因 我们前期在人类全基因组范围内检测并比较了早期复发和非早期复发肝癌患者肿瘤组织基因表 达谱的差异。结果提示 DDR1 在早期复发和非早期复发具有显著变化。 (2)DDR1 在肝癌细胞表皮间质转化的作用在肝癌细胞表皮间质转化的作用 1. DDR1 在肝癌各个细胞系中的表达。 2. 构建 DDR1 基因过表达及低表达的稳
2、定肝癌细胞系。 3. 体外研究方法:将不同分组的肝癌细胞分别培养后,通过三维培养观察肝细胞形态学变化,共聚 焦显微镜观察肝癌细胞骨架变化,qRT-PCR、Western Blot、免疫荧光检测肝癌细胞 EMT 分子标志物 mRNA 与蛋白表达, Transwell 实验、划痕实验等检测肝癌细胞 EMT 及侵袭迁移能力变化。 4. 体内研究方法:将高低表达 DDR1 的肝细胞株构建裸鼠原位 HCC 移植瘤模型,MRI 示踪肿瘤的生 长与转移情况,进一步解剖模型观察肿瘤的生长与转移情况。 (3)DDR1 通过通过 DDR1-STAT3 的正反馈调控机制促进肝癌细胞上皮间质转化的正反馈调控机制促进肝
3、癌细胞上皮间质转化 1. 将各个细胞系通过的蛋白的磷酸化水平的芯片技术检测不同信号通路活性。通过磷酸化 Western Blot 检测不同表达水平的 DDR1 情况下 STAT3 的磷酸化水平。 通过 CO-IP, 免疫荧光、 GST-pulldown、 ChIP、EMSA 等技术证明两者之间的关系。 2. 构建 DDR1 和 STAT3 不同表达的细胞系,分别建立裸鼠原位 HCC 移植瘤模型,MRI 示踪肿瘤的 生长与转移情况。 (4) 进一步探讨进一步探讨 DDR1DDR1- -STAT3STAT3 在临床肝癌诊治中的价值在临床肝癌诊治中的价值 1. 收集 300-500 例肝癌临床石蜡标
4、本并切片;统计病人临床病理资料。 2. 免疫组织化学检测 DDR1、STAT3、EMT 相关标志在肝癌中的表达情况。 3. 根据 DDR1-STAT3 表达,判断该通路活性,将患者分为早期复发高危组和低危组,预测患者早 期复发风险,评估该通路在临床的应用价值 4. 联合目前临床上常用的 AFP,CT 等技术与参数预测患者早期复发风险,进一步评估该通路的临 床价值 (5) DDR1DDR1 肿瘤纳米核酸疫苗的优化构建及抗肝癌的价值肿瘤纳米核酸疫苗的优化构建及抗肝癌的价值 1建靶向 DDR1 的肿瘤纳米核酸疫苗 2. 体内验证该核酸疫苗在抗肝癌的临床价值 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) (
5、二)技术路线; 技术技术路线路线图图 1 1:进一步进一步证实证实 DDRDDR1 1 在在 HCCHCC 细胞细胞 EMTEMT 过程中的重要作用过程中的重要作用 技术技术路线路线图图 2 2:阐明阐明 DDR1DDR1 与与 STAT3STAT3 之间之间的正反馈调控的正反馈调控 HCCHCC 细胞细胞 EMTEMT 过程的机制过程的机制 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 技术技术路线路线图图 3 3:探讨探讨 DDR1DDR1- -STAT3STAT3 在临床肝癌诊治中的价值在临床肝癌诊治中的价值 (三)创新点; (1) 本项目首次发现本项目首次发现 DDR1 与与 HCC 高危复
6、发相关,并且是与中国人高危复发相关,并且是与中国人 HCC 密切相关密切相关 的分子标志物。的分子标志物。HCC 根治性切除术后肿瘤复发、尤其是早期复发严重影响着手术 的疗效,并已成为影响患者预后的关键因素。DDR1 的提出,可能为肝癌的治疗提 供了一个新的分子靶标,为未来临床治疗应用提供重要的实验支持和理论依据。 (2) 拟阐明拟阐明 DDR1 在肝癌在肝癌 EMT 中的重要作用中的重要作用。EMT 在 HCC 的早期转移中扮演了非 常重要的角色,明确 HCC 细胞 EMT 过程的分子机制,有助于明确 DDR1 是 HCC 早期转移的关键分子靶标,有助于新的靶向药物的开发,丰富肝癌治疗手段,
7、改善 患者预后。 (3) 以以 DDR1 为切入点,研究为切入点,研究 DDR1 促进肝癌促进肝癌 EMT 的分子机制,提出“的分子机制,提出“DDR1 通过通过 DDR1-STAT3 正反馈通路促进肝癌正反馈通路促进肝癌 EMT 发生”的观点发生”的观点;并进一步明确该通路在;并进一步明确该通路在 肝癌诊治中的临床价值,拟构建靶向肝癌诊治中的临床价值,拟构建靶向 DDR1 的靶向核酸疫苗用于肝癌治疗的靶向核酸疫苗用于肝癌治疗。阐明 该通路有助于进一步确定 DDR1 在肝癌 EMT 发生的重要意义, 并揭示 DDR1 的具 体作用机制,同时也为双靶点抑制 DDR1 和 STAT3,进而抑制肝癌
8、 EMT,减少肝 癌患者复发提供理论支持。也有希望为肿瘤防治提供新思路。 (四)组织方式; 本项目主要在本申请单位完成。申请人所在单位是集科、教、研为一体,拥有大批 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 高级医学人才和现代化医疗科研设备。项目承担单位具有良好的研究条件和基础,并且 已经具备了相当的规模,取得了很好的科研成果。普通外科是申报单位重点专科,建立 了专科实验室,在实验空间、后勤保障和人员技术需求上都有很好的保证。本项目还将 与华大基因合作芯片数据分析与模型构建,确保信息共享,发挥专业交叉、知识互补、 团结协作的精神,确保本项目圆满、顺利完成。 (五)研究团队构成; 课题组成员均具有
9、一线实验研究经验,长期从事消化道肿瘤的相关研究,经过实验 研究的正规培训, 熟练掌握了本学科领域较先进的科研理论和实验技术, 并在并在 Hepatology、 Gut、Ann Surg、Ann Surg Oncol、PLoS One 等等 SCI 收录收录杂志发表多篇杂志发表多篇 HCC 相关相关临床临床 和基础研究成果和基础研究成果。课题组成员组成、层次和技术结构合理,分工清楚,有充分的时间保 证本课题的顺利完成。 (六)计划进度安排; 2012015 5.1.1- -2015.2015.1212 优化前期实验方案,检测并比较 DDR1 不同表达在 Huh7 空白组, Huh7 空载体组,
10、Huh7-DDR1 高表达组以及 SNU-182 空白组, SNU-182 空载体组, SNU-182-DDR1 低表达组中 EMT 相关侵袭力变化。进一步证实 DDR1 高低表达对 HCC 细胞表皮间质转化过程的影响。在体外实验研究的基础上,构建肝癌原位移植瘤裸 鼠模型,并比较 DDR1 不同表达组对移植瘤模型肿瘤生长、凋亡、侵袭迁移能力及生存 时间的影响, 同时通过 MRI 活体示踪技术动态、 连续的追踪肿瘤在动物模型中的生长和 侵袭迁移规律。 2012016 6. .1 1- -2012016 6.1.12 2 研究 DDR1 通过调控 STAT3 的磷酸化促进 HCC 细胞 EMT 过
11、程, 而 STAT3 可以促进 DDR1 基因的表达。 阐明 DDR1 -STAT3 的正反馈通路在肝癌 EMT 过程的重要作用,体内验证抑制 DDR1 -STAT3 的正反馈通路对 HCC 细胞 EMT 的影 响。 2012017 7.1.1- -2012017 7. .1212 进一步探讨 DDR1-STAT3 在临床肝癌诊治中的价值, 研究开发 DDR1 肿瘤纳米核酸疫苗及体内外探讨其抗肝癌的价值。 (七)经费预算合理性评估(采购设备清单、人员费用预算评估、 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 调研计划支出预算等) ; 实验室材料费(4.00 万元) :实验试剂、细胞培养相关耗费品、
12、实验动物等; 差旅费(0.50 万元) :参加会议、交流的住宿费等; 会议费(0.75 万元) :举办一次小型关于肝癌早期复发的会议; 出版/文献/信息传播/知识产权事务费(1.00 万元) :文章发表费用; 人员费(0.5 万元) :劳务费; 专家咨询费(0.5 万元) :本项目相关领域的专家咨询费; 管理费(0.25 万元) :科研管理费。 (八)项目实施绩效。 (1)阐明 DDR1 在 HCC 表皮间质转化中发挥的重要作用。为将来临床靶向抑制 DDR1,抑制 HCC 的 EMT 过程及侵袭转移等恶性生物学特性提供实验支持和理论依 据。 (2)阐明 DDR1 与 STAT3 之间的相互作用
13、及其具体机制,体内验证 DDR1-STAT3 的正 反馈通路对 HCC 细胞 EMT 的影响,提出 DDR1-STAT3 正反馈通路促进肝癌 EMT 的新 观点。 (3)培养博士、硕士 2 名。发表 SCI 收录论著 3-5 篇,其中 IF5 分 1 篇;国内核心刊 物上发表论著 2 篇。 二、项目风险评估(限 1000 字) 正是在上述工作过程中, 课题组发现并重点关注 HCC 术后早期复发患者肿瘤组织中 DDR1 存在表达的异常这一现象,推测 DDR1 可能推动了 HCC 侵袭转移的发生,并通过 全面的文献复习, 确立了 DDR1 与 HCC 侵袭转移恶性生物学的研究方向, 继而进一步开
14、展了相关的临床和基础预实验研究。在临床研究中,课题组利用 Affymetrix Human Genome U133 plus 2.0 基因表达谱芯片与 SAM 软件分析,结果提示 DDR1 在早期复发和 非早期复发具有显著变化。 通过 qRT-PCR, Western blot 检测标本组织中 DDR1 的 mRNA 和蛋白表达水平,进一步论证芯片结果。同时将 DDR1 蛋白表达情况与临床病理特征及 生存资料作关联分析 (详见前期工作基础详见前期工作基础) 。 故本项目的科学问题来源于临床研究的发现,故本项目的科学问题来源于临床研究的发现, 是科学可行的。是科学可行的。 广东省科技计划项目申报
15、书(技术开发类) 因此,课题组进一步开展了 DDR1 在促进 HCC 侵袭转移中的 EMT 研究。我们前期 实验中,将不同分组的 HCC 细胞分别培养后,通过三维培养观察肝细胞形态学变化,共 聚焦显微镜观察 HCC 细胞骨架变化,qRT-PCR、Western-Blot 检测 HCC 细胞 EMT 分子 标志物 mRNA 与蛋白表达, 免疫荧光观察 EMT 分子标志物的表达变化, 侵袭迁移实验, 迁移速率分析等实验检测 HCC 细胞 EMT 相关侵袭力变化,进一步探讨了 DDR1 高低表 达对 HCC 细胞表皮间质转化过程的影响(详见前期工作基础详见前期工作基础) 。我们还将探讨并阐明 DDR
16、1 与 STAT3 的正反馈通路如何调控 HCC 细胞的 EMT 的分子机制。在开展与本项目 相关预实验研究的过程中,课题组已系统的掌握了相关理论知识和实验方法,并进一步 完善了本项目的实验设计和实施计划, 以确保本项目的科学严谨性。 上述预实验的开展,上述预实验的开展, 为本项目的可行性和科学性提供了实验依据支持。为本项目的可行性和科学性提供了实验依据支持。 三、前期工作基础(限 1000 字) (一)现有研发条件; 本项目主要在本研究单位完成。申请人所在单位是集科、教、研为一体,拥有大批高级 医学人才和现代化医疗科研设备,项目承担单位具有良好的研究条件和基础,并且已经 具备了相当的规模、取
17、得了很好的科研成果。申请人所在外科是申报单位重点专科,建 立了专科实验室,在实验空间、后勤保障和人员技术需求上都有很好的保证;我科的专 科实验室已经拥有项目所需的所有仪器设备,具备各项实验操作的 BL2 级实验条件。 (二)已有的研究基础和成果; 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) (三)与项目相关的知识产权情况(所有单位) ; 无。 (四)近三年直接获得国家、省、市科技部门资助的相关项目情况。 本项目申请人作为第三负责人参与广东省科技计划项目 (项目编号: 2012B031800389) : PEDF 基因修饰的骨髓间充质干细胞抑制不同基因型胃肠道间质瘤血管生成的研究。承 担申报单位的 GIST 标本的收集及分子生物学实验和基因检测, 目前项目进展良好, 将近 结题阶段。 申请人作为第三负责人参与广东省科技计划项目(项目编号: 2012B061700093) 人胰腺癌组织中 miR217、miR-216a 靶向调节细胞增殖基因与早期复发的研究,承担标本 广东省科技计划项目申报书(技术开发类) 的收集,目前项目进展良好。
链接地址:https://www.31doc.com/p-3856150.html