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1、闽南地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究 闽南地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究*欧山海林永财倪宏英张永昌周海容陈长荣(厦门市中心血站,福建厦门361004)摘要:目的研究闽南地区无偿献血者中隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况,探讨现有输血传播乙肝病毒(HBV)的检测方法的有效性。方法依据多种与HBV相关血清学指标的检测情况对献血者标本进行HBV携带风险评价分级,对较高携带风险的标本做单份多区段巢式-PCR检测其HBV DNA,对低携带风险的标本做10份混合的巢式-PCR检测。采用这一方案,对闽南地区19 360例HBsAg阴性的无偿献血者标本做检测分析。结果闽南地区HBsAg阴性
2、献血者中的HBV DNA阳性检出率为021% (40/19 360, 95% CI: 015%028% ),属于OBI;其中抗-HBc阳性检出率85% (34/40),但阳性预测值仅为34% (34/995, 95% CI: 24%47% );HBV NRAg阳性预测值30% (6/20),但灵敏度为15% (6/40)。结论现有筛查体系下无偿献血者中仍存在一定比例的OBI,需要寻求更为有效的检测方法。 关键词:乙型肝炎病毒,隐匿性感染(OBI);巢式-PCR;抗-HBc;核酸检测;无偿献血者;闽南乙型肝炎(简称乙肝)病毒(HBV)感染是我国乃至全世界最重要的公共卫生问题之一。HBV表面抗原(
3、HBsAg)是检测HBV感染的最常用指标,也是包括我国在内的大多数发展中国家当前用于血液制品HBV感染筛查的唯一指标。自1978年Hoof-nagle等首次报道了1例输注HBsAg阴性但乙肝核心抗体(抗-HBc)阳性的血液而致受血者HBV感染,并随后在大猩猩身上获得证实至今,人们已认识到除了感染早期的检测“窗口期”外,多数HB-sAg检测阴性但HBV DNA阳性的病例由隐匿性HBV感染(occultHBV infection, OBI)引起3, OBI献血者的血液可能导致受血者感染HBV或引起病毒性肝炎45。OBI作为HBV感染的1种特殊类型成为了临床和流行病学的一大难题。对于OBI的检测,目
4、前尚缺乏商品化的试剂及其可靠方法,采用核酸检测(nucleic acid testing,NAT)方法检测肝组织(或血液)中的HBV DNA是目前检测OBI的“金标准”;除此之外,抗-HBc或也作为筛查指标,尤其在“抗-HBc单独阳性”(anti-HBc alone)的个体中,HBV DNA的阳性率明显著高于其他血清学模式68。另据报道, 1种联合检测HBV前S1抗原和核心抗原的乙肝核酸相关抗原(HBV NRAg)的ELISA方法,也可用于OBI尤其是HBsAg“a”表位突变株感染的规模化筛查910。有鉴于此,我们选取部分HBsAg阴性献血者的血浆标本检测HBVNRAg、抗-HBs和抗-HBc
5、,根据这些血清学指标的检测情况,对标本的HBV携带风险进行评价分级,并进一步做NAT检测,以系统了解该地区无偿献血者中OBI的情况及现行血液筛查体系的有效性,现报道如下。 1材料与方法11研究对象选取厦门市中心血站2007年7月18日2008年8月27日采血现场HBsAg金标试纸及ALT试纸初筛合格的无偿献血者血液标本19 518(人)份(5 ml/份),分离血浆, -20保存待检。上述献血者均为厦门及其周边地区的常住者。 12血清学检测HBV NRAg(批号:N20070501、N20071201、N20080301),抗-HBs (批号: R20070505、R20071101、R2008
6、0405),抗-HBc(批号: C20070601、C20071201、C20080401)检测采用ELISA试剂(均购自北京万泰生物药业股份有限公司);HBsAg检测也采用ELISA方法,使用美国雅培公司MurexV3试剂(批号:L030510、L046010、L097610),厦门新创试剂(批号:2007055108、2007095112、2008025101)及北京万泰试剂(批号:S20070601、S20071101、S20080301)初筛,3种试剂均检测为阴性方判为阴性。对初筛阴性的标本进行风险分级后做HBV DNA检测,若HBV DNA阳性,则再以法国生物梅里埃公司Hepanos
7、tikaHB-sAgUltra试剂(批号: BV221087)及美国伯乐公司MonolisaAgHBsUltra试剂(批号:BL20080611)复检。 13HBsAg初筛阴性标本的风险分级与分组1)HBsAg(-) /NRAg(+)时HBV DNA阳性概率较高,被认作高风险等级,相应标本(20份)归为A组; 2)单一抗-HBc(+)时为中风险等级,相应标本(995份)归为B组; 3)其他血清模式为低风险等级,相应标本(18 345份)归为C组。 14HBV DNA检测对HBV NRAg(+)或抗-HBc(+)而抗-HBs(-)(共1 015份)均逐份检测;其他血清学模式的标本采用10份混合的
8、方式检测。血清中HBV DNA提取采用Qiagen公司的QIAamp DNABloodMiniKit(批号: 20091029-222521)进行,HBVDNA检测采用不同区段的6套引物(表1)的巢式-PCR (上海英骏生物技术有限公司,批号:HG080314056),检测下限约为20 cp/ml11。初次NAT检测阳性的标本,均取备份标本重新提取DNA复检,复检阳性方判为阳性,否则判为阴性。 15统计学方法Mantel-Haenszel卡方检验或Fisher精确概率用于分类变量统计检验; Mann-WhitneyU检验用于连续变量的方差分析;统计软件采用SPSS170,P<005为差异
9、具有统计学意义。 2结果21HBsAg初筛19 518例标本中,检出158例HBsAg(+): 08%, 95% CI (0710)%,性别比(MF)=1101,平均年龄(289)岁; 19 360例HBsAg(-):MF =1241,平均年龄(269)岁。 22风险分级(组)及HBV DNA检测1)依据HBV NRAg、抗-HBs及抗-HBc的检测结果,将HB-sAg(-)的19 360份标本分为A组:HBV NRAg(+)标本20例,属于HBV携带高风险,做单份检测HBV DNA,其中有6例阳性(300%, 95% CI:119%543% );B组:单一抗-HBc(+) 抗-HBs(-)标
10、本995例,属于HBV携带中等风险,做单份HBV DNA检测,其中有34例阳性(34%, 95%CI: 24%47% );C组:其他血清学模式抗-HBs(+)或全阴性)标本18 345例,属于HBV携带低风险,采用每10份混合做HBV DNA检测,共检测了其中5 000例标本,未发现1例阳性(图1)。2)采用2种进口HBsAg试剂对所检出的40例HBVDNA阳性标本复检:均为阴性。3)40例OBI中,男性28例,女性12例,MF=241(2=3934,P<005),平均年龄(309)岁,与初筛HBsAg(+)组比较,差异无统计学意义(T=0044,P>005)。 23HBV NRA
11、g和抗-HBc检测对OBI的检出率和阳性预期值见表2。 表140例OBI中单一抗-HBc(+)标本与HBV NRAg(+)标本HBV DNA检出率和阳性预期值比较nHBV DNA阳性检出数(% )阳性预测值(95%CI)单一抗-HBc(+) 559 34(850) 34 /995(342% )HBV NRAg(+) 20 6(150) 6 /20(300% )3讨论在HBV低流行的国家和地区,目前多通过HB-sAg与抗-HBc或HBV NAT一起检测来降低OBI对受血者造成的可能风险1316;在西方发达国家 ,HBsAg检测阴性的献血者中有0007%005%的HBV DNA阳性1721。在中国
12、等处在HBV高流行区的发展中国家,由于抗-HBc的高本底阳性率和NAT的高费效比,目前仍仅采用HBsAg筛查,献血者中OBI的存在情况尚不清楚,考虑到这些地区普通人群的高HBV携带率,评估这些地区HBsAg筛查后残余的HBV经血传播风险十分必要。 我们将血清学指标结合NAT方法筛查了闽南地区19 360(人)份献血者标本,结果显示本地区HBsAg(-)献血者中任有约021% (40/19 360, 95%CI: 015%028% )的OBI者(图1)。LeiLi等12的研究表明,在我国台湾地区HBsAg(-)献血者中存在011% (12/10 727, 95% CI: 006%020% )的O
13、BI者。2个相邻地区的相近结果证实了在HBV高流行区,献血者中HBsAg筛查后残余的HBV经血传播风险明显高于发达国家,是不容忽视的问题。 当然,由于我们未对全部标本做单份NAT检测,本组资料可能存在一定的遗漏,从而导致对残余HBV风险的低估。 HBV NRAg的检测靶标是独立于HBsAg之外的HBV抗原,本组资料中检测OBI的阳性预测值较高(30% ),但由于献血者中OBI者的病毒载量一般较低,该指标用于献血者OBI筛查的灵敏度仅为15%;而40例OBI中的34例(850% )属于“单一抗-HBc阳性”,显示该血清学模式或可作为规模化筛查OBI的指标,可是该指标较低的阳性预测值(342% )
14、(表2)如果通过抗-HBc来筛查当前献血者中的OBI,需多报废497%的合格血浆(961/19 326)或许将阻碍其在常规血液筛查中的应用。因此寻求更为灵敏的HBsAg检测试剂或者更为经济有效的NAT方法仍将是今后进一步提高中国血液安全的发展方向。 参考文献Hoofnagle JH, Seeff LB, Bales ZB, et a.l Type B hepatitis aftertransfusionwith blood containing antibody to hepatitisB core anti-gen.N Engl JMed, 1978, 298(25): 1379-1383.
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