毕业论文-不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响.doc
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1、农业与生物技术学院园艺专业2012届本科生毕业论文编号 0815219 毕业论文 ( 2012 届本科)题 目: 不同种类、浓度的激素配合使用对 银斑百里香无菌苗生长的影响 学 院: 农业与生物技术学院 专 业: 作者姓名: 指导教师: 职称: 副教授 完成日期: 2012 年 6 月 10 日 二一二 年 六 月目 录河西学院本科生毕业论文(设计)诚信声明2河西学院本科生毕业论文(设计)开题报告3论文进度安排和采取的主要措施8主要参考资料和文献8不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响10摘要10引言101. 试验材料与方法111.1 供试材料111.2 培养基配制111.3
2、 培养条件111.4 接种条件及培养方法112.结果与分析112.1 不同浓度的NAA与6-BA配合使用对银斑百里香的影响112.1.1 NAA与6-BA配合使用对银斑百里香种子发芽率的影响122.1.2 NAA与6-BA配比对银斑百里香无菌苗生长的影响132.2 不同浓度的2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香的影响142.2.1 2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香种子的影响142.2.2 2,4-D和6-BA配合使用对百里香无菌苗生长状况的影响153.讨论与结论164.参考文献17附录:18河西学院本科生毕业论文(设计)题目审批表18河西学院农业与生物技术学院指导教师指导毕业论文情
3、况登记表19河西学院毕业论文(设计)指导教师评审表20河西学院本科生毕业论文(设计)答辩记录表21致谢22不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响摘要: 以银斑百里香种子为试材,研究了不同浓度的NAA(萘乙酸)和2,4-D(2,4二氯苯氧乙酸)与6-BA(6-苄基氨基嘌呤)配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响。结果表明,NAA在0.15(mg/L)和2,4-D在0.45(mg/L)是银斑百里香种子萌发成无菌苗的适宜浓度;MS+ NAA(0.15mg/L)+6-BA(0.6mg/L)和MS+2,4-D(0.45mg/L) +6-BA(0.6mg/L) 的培养基中银斑百里香无菌苗生
4、长最佳。关键词: 银斑百里香;植物生长激素;无菌苗Effects on Different the growing of Aseptic seedlings on the Thymus vulgarisSilver PosieAbstract: The paper was to study the effects of various concentration of plant growth hormones such as NAA, 2,4-D and 6-BA on seeds of Thymus vulgarisSilver Posie. The results showed that
5、 the medium of MSNAA(0.15mg/L)6-BA(0.6mg/L) and MS2,4-D(0.45mg/L)6-BA(0.6mg/L) were suitable for inducing seedings. In addition, NAA(0.15mg/L) and 2,4-D(0.45 mg/L) were optimum concentration for inducing the seedings of Thymus vulgaris Silver Posie.Key words: Thymus vulgarisSilver Posie; plant growt
6、h hormones; seedlings引言百里香( Thymus mongolicus),俗称“地椒、地姜、地花椒、麝香草”,是唇形科半灌木芳香植物。原产于地中海南岸,全球约300-400个种,我国有11个种,2个变种,主要分布于西北高原,包括甘肃、陕西、青海、宁夏、新疆、北京、东北及河北、山西北部、内蒙古多石山地、黄土丘陵和沙地上(刘云斌 2005)。 是世界许多国家承认的香辛料之一(樊明涛等 2001),不但可以鲜食、做调味保健品(曹军胜 2002;刘军2010),而且,因含有黄酮类成分而全草入药,是一种广谱性药物,具有行气止痛、防暑避暑、补肝明目、滋胃润肺、利尿排水、抗病毒、杀菌、通
7、经、抗痉挛、驱蠕虫、升血压、刺激白血球等功效,是强力的天然“抗生素”(赵颖等 2009),在医药、传统日用化工及精细化工等领域得到广泛应用,具有极好的开发利用价值。通过植物组织培养方法快速繁殖百里香,不但加速品种繁殖速度,还可扩大种质资源,保持优良品种的种性。种子是建立植物无菌体系的良好外植体(魏春雁 2004),但百里香结实量低,种子败育多(周俊辉等 2003)。本试验以银斑百里香种子为试材,探讨了不同种类、浓度的激素配合使用,对银斑百里香种子萌发的影响和无菌苗生长的影响,为银斑百里香获得无菌苗、诱导愈伤组织和资源的奠定坚实的基础。1. 试验材料与方法1.1 供试材料银斑百里香(T.vulg
8、arisSilver Posie)( 黄健等 2009 )种子,于2011年9月采自张掖市大满乡。1.2 培养基配制供试药品有NAA、6- BA、2, 4-D,各设四个浓度梯度为:A为NAA设0.1、0.15、0.2、0.25mg/L四个浓度,B为6- BA设0.4、0.6、0.8、1.0mg/L四个浓度,C为2, 4-D设0.15、0.3、0.45、0.6mg/L四个浓度。基本培养基为MS培养基,琼脂含量0.6%,培养基灭菌前pH调至5.8。根据配比将激素NAA、2,4-D和6-BA配合使用。1.3 培养条件培养温度(252),光照时间为12h/d,光照强度为2000Lx,培养30 d后调查
9、其生长状况。1.4 接种条件及培养方法将采集的银斑百里香种子用纱布包好,在自来水上冲洗10min,沥干水分后置于超净工作台上。将冲洗干净的种子用75酒精浸泡消毒处理45s,取出后用无菌水冲洗3次,移入活性氯含量为8%9%的NaClO振荡消毒4min,将种子再次取出置于无菌水中振荡重复冲洗5次,而后沥干置于接种盘上备用。在无菌操作室中,将灭菌后的银斑百里香种子,接种于含有不同浓度NAA、2,4-D与6-BA配比的MS培养基中,每处理重复3次,每重复接种10瓶,随机抽取10株进行数据的采集。随时移除被污染培养基。2.结果与分析2.1 不同浓度的NAA与6-BA配合使用对银斑百里香的影响2.1.1
10、NAA与6-BA配合使用对银斑百里香种子发芽率的影响以MS为基本培养基,使用不同浓度的NAA和6-BA配合使用,15-20d后统计银斑百里香种子的发芽情况(见表1)。表1 NAA、6-BA对银斑百里香种子发芽率(%)的影响Table 2 The effects of NAA and 6-BA on the germination rate of Thymus vulgaris Silver Posie seed处理发芽时间(月-日)重复1重复2重复3平均发芽率%0.05显著水平0.01显著水平A1B110-51816120.5111aABA1B210-62012230.6111abABA1B3
11、10-61816170.5667abABCA1B410-52017150.5778abABCA2B110-51824160.6444aAA2B210-52020180.6444aAA2B310-51819180.6111abABA2B410-52118190.6444aAA3B110-51816160.5556abABCA3B210-61221200.5889abABA3B310-51616170.5444abABCA3B410-61614180.5333abcABCA4B110-61416170.5222abcABCA4B210-61214160.4667bcBCA4B310-6161515
12、0.5111abcABCA4B410-8912140.3889cCCk10-84100.0556dD注:表中所列数字为对应培养基中种子的发芽个数。由表1可知,在NAA与6-BA各浓度配合使用下,对发芽率的影响A4B4和对照外其它各组合均无显著差异性。结果表明,当NAA在(0.10.25mg/L)和6- BA在(0.41.0mg/L)时,各处理组合之间的发芽率无显著差异性,对银斑百里香种子萌芽的影响较小,但与对照相比,激素的使用提前了种子的发芽时间和提高了种子的发芽率。2.1.2 NAA与6-BA配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响表2 NAA和6-BA交互作用效果方差分析结果Table 2 T
13、he results of variance analysis of the Interaction of NAA and 6-BA变异来源DFSSMSFF0.01处理组合间150.432980.028864.9940*2.706-BA30.171560.0583910.1014*4.46NAA30.008660.002890.49934.46NAA6-BA90.249000.027684.7889*3.02实验误差320.184870.00578 见表2可知,在NAA和6-BA的处理组合之间、6-BA及NAA和6-BA互作,均达到了极显著水平,NAA作用无差异显著性。表3 NAA和6-BA配
14、合使用对银斑百里香无菌苗的影响Table 3 The effects of NAA and 6-BA on the seedlings of Thymus vulgarisSilver Posie序号6-BAmg/LNAA/mg/LA1(0.10)A2(0.15)A3(0.20)A4(0.25)1B1(0.4)1.15cC1.37cBC1.28cBC1.46bcBC2B2(0.6)1.49cBC2.24aA1.85bAB1.26cBC3B3(0.8)1.34cBC1.21cBC1.05cC1.55bcBC4B4(1.0)1.30cBC0.89cC1.40cBC1.20cBC注:表中所列数字为对
15、应培养基中无菌苗的平均高度(cm)。由表3可知,A2 B2 和A2 B3处理与其他浓度组合间均达到极显著水平,无菌苗生长状况较好;A3B4、 A1B4和A2B1之间无差异显著性;A4浓度下的各个浓度组合使下的幼苗生长状况较差。因此,不同浓度的NAA对银斑百里香无菌苗的影响都较小,6-BA 、NAA和6-BA处理组合之间、NAA对银斑百里香无菌苗的影响都较大,且培养基为MS+ NAA(0.15mg/L)+6-BA(0.6mg/L时银斑百里香无菌苗生长的较好。2.2 不同浓度的2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香的影响2.2.1 2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香种子的影响以MS为基本培
16、养基,使用不同浓度的NAA和6-BA配合使用,15-20d后统计银斑百里香种子的发芽情况(见表4)。 表4 2,4-D、6-BA对银斑百里香种子发芽率(%)的影响Table 4 The effects of 2,4-D and 6-BA on the germination rate of Thymus vulgarisSilver Posie seed处理发芽时间(月-日)重复1重复2重复3平均数发芽率0.05显著水平0.01显著水平C1B110-91614180.5333abcdABC1B210-91913140.5111abcdABC1B310-81818150.5667abcdABC1
17、B410-71716210.6000abcdABC2B110-82019180.6333abABC2B210-81820170.6111abcABC2B310-81114150.4444cdBC2B410-81516190.5556abcdABC3B110-81921200.6667aAC3B210-81915200.6000abcdABC3B310-81620180.6000abcdABC3B410-81315170.5000abcdABC4B110-81714130.4889abcdABC4B210-71514130.4667bcdABC4B310-71114130.4222dBC4B41
18、0-91413110.4222dBCk10-91120.0444eC由表4可知,2,4-D与6-BA各浓度配合使用下,各处理组合之间对银斑百里香种子的发芽率影响差异不显著,即2,4-D(0.150.60mg/L)和6- BA(0.41.0mg/L)配合使用对银斑百里香种子发芽的无明显影响。与对照相比,与其它各处理组合均达到极显著水平。2.2.2不同浓度的2,4-D和6-BA配合使用对百里香无菌苗的影响 表5 2, 4-D和6-BA作用效果方差分析结果显示Table 5 The results of variance analysis of Interaction effect of NAA a
19、nd 6-BA变异来源DFSSMSFF0.01处理组合间150.52610.035078.7675*2.72, 4-D30.33320.11127.75*4.466-BA30.00410.001370.3004.462,4-D6-BA90.18890.020995.247*3.02实验误差320.13010.004 由表5可知,不同浓度的2,4-D和6-BA处理组合之间、2,4-D及2,4-D和6-BA互作配合对于银斑百里香无菌苗的影响,均达到了极显著水平,6-BA作用差异不显著。表6 不同浓度的2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香无菌苗的影响Table 6 The effects of
20、different concentrations of 2,4-D and 6-BA on the seedlings of Thymus vulgarisSilver Posie序号2, 4-Dmg/L6-BA/mg/LB1(0.4)B2(0.6) B3(0.8) B4(1.0)1C1(0.15)1.37bcdB1.26cdBC0.73eD0.87feCD2C2(0.30)1.64bB1.41bcdB1.29bcdBC1.23cdfBC3C3(0.45)2.18aA 1.59bcB1.2dfBC1.16dfBCD4C4(0.60)1.24cdBC1.31bcdBC1.2dfBC1.14dfB
21、CD注:表中所列数字为对应培养基中无菌苗的平均高度(cm)。由表6可知,C3 B3处理的显著性高于与其他浓度组合间,达到极显著水平,无菌苗生长状况为最好;C3B1差异显著性次之;C2、C3和C4浓度下的个浓度组合使用下的无菌苗生长都无显著差异性,且幼苗生长不及C3 B3。结果表明,不同浓度的6-BA对银斑百里香无菌苗的影响较小,2,4-D和6-BA的各处理组合间、2,4-D及2,4-D和6-BA的互作都对银斑百里香无菌苗生长的影响较大。当MS+2, 4-D(0.45mg/L)+6-BA(0.4mg/L) 时银斑百里香无菌苗生长的最好。3.讨论与结论百里香的应用价值和经济价值等引起了人们的注意,
22、关于河西地区银斑百里香的应用鲜有报道,关于银斑百里香组织培养的研究资料甚少。Furmanowa(1992)等人对百里香进行了组织培养,获得了再生植株,穆丹等(2007)获得了相同结果。Mendes.M.L.等(1999)研究了百里香的生根。我国的学者在百里香属植物的组织培养方面也取得了一定的进展(沙红. 2004; 赵庆臻等. 2002; 李晓东等.2009)。李晓东等(2009)分别以普通百里香的带腋芽的茎段和种子为外植体,比较了不同浓度的IAA和6-BA组合对不定芽的诱导和增殖的效果;2010年又设计了不定芽增殖培养基MS+NAA(00.15mg/L)+6-BA(02mg/L),发现不定芽
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