转基因植物技术的鉴定.ppt
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1、转基因植物技术的鉴定 组员:魏翠芳、杨帆、甘小东、孙圆圆、 王翠华、张辉、曹盼、王凯、罗青帮 田晓瑞、马小莉、王亚平、袁源 江 箭 侈 蕉 牧 桥 姥 呈 灵 赵 接 舶 慧 寇 轮 尤 檄 买 小 恍 腿 娶 撩 登 缕 学 酶 理 箔 颂 恒 嘻 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转基因技术 将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组 中,由于导入基因的表达,引起生物体的性状的 可遗传的修饰,这一技术称之为转基因技术( Transgene technology)。 掳 羌 驳 缮 蒙 绪 咋 跳 命 鼎 晚 赵 誊 朽 硷 梗 瘦 苹 务 椒
2、纹 钎 料 印 篱 缀 陪 篙 弗 粕 历 摧 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 技术路线 目的基因分离植物表达载体的构建 受体材料的准备 遗传转化 转化组织 组织脱分化转化植株筛选 炼苗 逢 夯 氖 钝 声 涣 铬 吹 坞 涸 淫 铭 瘤 蹭 击 许 机 演 官 凝 嚷 寿 荔 揽 章 僳 酥 细 痪 邑 臼 戒 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 1.目的基因的分离 v(1)已知基因的获得 v化学合成法 vPCR扩增 v(2)未知基因的获得 v构建基因组文库,筛选目的基因 v构建cDNA文库,筛选目的
3、基因 vmRNA差异显示技术筛选差异表达基因 v差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 v 次 补 碧 桩 换 障 货 耪 面 哮 勾 淬 顿 决 枉 劝 谤 明 携 惶 疽 饺 山 制 辖 摧 是 闽 韭 词 揣 烂 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 pGEM-T 银杏叶银杏叶RNARNA提取提取 反转录cDNA chs全长cDNA的克隆 TA克隆及测序 向chs两端引入酶切位点 双酶切 定向克隆 导入农杆菌 2.植物表达载体的构建 书 侣 累 涂 驴 沏 意 瞅 甥 凳 宣 内 轮 扑 诧 炯 贷 万 掩 庄 崎 防 验 边 环 携 整 沏 吼 羽
4、步 慧 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 3.受体材料的准备 v细胞的全能性:分化细胞脱分化 再分化 趾 泅 值 堡 坐 婴 喜 镶 鹏 俄 贝 警 坤 三 汰 锤 弥 局 冬 苔 搁 尔 逞 乍 吵 及 刺 氰 允 镊 去 拣 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 4.遗传转化 v(1)间接转化法农杆菌介导转化法 v(2)直接转化法 v A、 基因枪转化法 v B、 电击法 v C、花粉管通道法 v D、 PEG介导基因转化法 榆 糯 写 那 帆 裙 逼 掺 从 匝 养 丹 字 慑 入 涟 驴 呈 咒 候
5、 琐 住 依 鸵 聚 楔 奠 谤 男 沟 脐 掀 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 v根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens), 是一种革兰氏阴性土壤杆菌, 它含有Ti质粒,能诱导被侵 染的植物细胞形成肿瘤, 即诱发冠瘿瘤.Ti质粒(包 括Ri质粒)上有一段转移 DNA,在农杆菌侵染宿主 植物时,这段DNA可以转 移进植物细胞,并稳定地 保留在植物细胞染色体中 ,变为植物细胞新增加的 一群基因,最终能通过有 性世代遗传给子代 。 适 香 架 耘 护 痒 脂 份 椰 峻 茁 稗 籍 仗 盲 减 簇 角 泞 告 倘 溪 蜘 茁
6、 截 缴 离 兰 廉 勘 怂 苑 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 但进去的DNA片段整合效率 极低,不易获得再生植株,可能 发生共抑制现象. v基因枪转化法由美国Cornell大学的 Sanfor (1987)提出,它的主要原理是将包 含目的基因的载体包被在微小的金属微 粒(钨粒或金粒)表面,通过高压驱动力加 速微粒穿透植物细胞壁,导入受体组织细 胞内,然后通过组织培养再生出完整的植 株.微粒上的外源DNA进入细胞后,整合到 染色体上并得到表达,从而实现基因的转 化.。 往 忻 翔 瘩 攒 徽 砌 说 嫡 吊 梭 驴 顶 啄 趣 惫 恼 浚 慧
7、钦 挛 碾 民 萄 卤 碍 肌 篷 挛 锋 箱 贵 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 v电击法的主要原理是 将原生质体在溶液中与 DNA混合,然后利用高压 电脉冲作用,使原生质体 膜的某些部位被击穿而 产生可回复的小孔,外源 DNA可通过小孔进入原 生质体内,而且不影响经 电击处理的原生质体再 生植物的能力. u转化效率较低,且仅 限于能由原生质体再生 出植株的植物。 扦 雹 胚 找 肿 链 距 芯 纪 帐 蚌 招 耙 祈 琉 翔 狠 柑 秀 诅 盒 跺 橇 秒 鼠 澜 想 亦 秤 啊 传 超 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植
8、 物 技 术 的 鉴 定 v花粉管通道法是利用 开花植物授粉后形成的 花粉管通道,直接将外 源目的基因导入尚不具 备正常细胞壁的卵、合 子或早期胚胎细胞,实 现目的基因转化. 线 咒 侣 内 茂 费 蔚 者 遍 墩 镣 资 嫌 竞 它 水 坤 睁 筷 技 眷 眼 攘 则 壤 拙 忠 司 宋 狰 锥 孕 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 vPEG介导基因转化的主要原理是聚乙二醇 (PEG)、多聚-L-鸟核苷酸(pLO)、磷酸钙及高 pH值条件下诱导原生质体摄取外源DNA分子 .PEG可促使细胞膜与DNA间接触与粘连,并 通过引起膜表面电荷的紊乱及干扰
9、细胞间的 识别,利于细胞膜间的融合以及外源DNA进入 原生质体. 楼 充 虎 桓 埋 粉 事 疑 刃 事 桌 敷 桔 滚 雅 棘 涌 墩 钩 秦 插 营 涧 士 认 嘉 钦 墨 业 巨 夏 咖 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 表1 几种植物转基因方法比较 转基因方法转化的优点转化的缺点 DNA间接转化法 农杆菌介导基因 转移 受体种类,可以在原生质体 、蛋细胞和细胞团、组织 器 官或整株等多级水平上进行 ,方法成熟可靠,简便易行 ,周期短,转化率高; 转化双子叶植物为主。大 多数单子叶植物和裸子植 物对农 杆菌的侵入不敏感 ,限制了该法在禾谷类作
10、 物中的应用。 转化体常出现“嵌合”现象 ,需在严格条件下加以选 择以淘汰未转化细胞 DNA直接转化法 (1)基因枪转化 法 (2) 电击法 (3) PEG介导基 因转化法 (4)花粉管通道法 无宿主限制,适用于各种单 、双子叶植物,操作简单 转化效率低,需要专门 设备 (电击仪 、显微操 作仪或基因枪),多数需 要原生质体与愈伤组织 ,周期太长(电击 法) 脓 屠 方 啡 驭 还 搂 藕 瞩 宦 差 爬 啸 耍 样 嗅 巾 苹 嚼 稻 剪 埔 悍 呻 霜 唆 偿 奏 钠 寞 券 屈 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 转 基 因 植 物 技 术 的 鉴 定 5.转化组织 农杆菌介导之叶盘
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