生物:2..1《微生物的实验室培养》教案(1)(新人教版选修1).pdf
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1、- 1 - / 17 课题 1 微生物的实验室培养 【课程目标】 了解培养基的基础知识,进行微生物培养和无菌技术的操作。 【课题重点】 无菌技术的操作 【课题难点】 无菌技术的操作 基础知识 一、培养基 1概念:人们按照微生物对的不同需求,配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。 8en9GjDA6t 2 营养构成:各种培养基一般都含有、 和,此外还要满足微生物生长对、以及 的要求。 8en9GjDA6t 3培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养 基 PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则 需提供条件。8en9GjDA6t 思考 1从细胞的化学元素组成来看
2、,培养基中为什么都含有 这些营养成分? 【补充 1】碳源:如 CO2 、糖类、脂肪酸等有机物,构成微生物 的结构物质和分泌物,并提供能量。 氮源:如 N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等,主要用来合 成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N 的化合物既可以 作为碳源,又可以作为氮源,如氨基酸等。8en9GjDA6t - 2 - / 17 二、无菌技术:阅读“无菌技术”,讨论回答下列问题: (一获得纯净培养物的关键 是,具体操作如下: 8en9GjDA6t 1 对 实 验 操 作 的、 操 作 者 的和进 行。 2将用于微生物培养的、和等 器具进行。8en9GjDA6t 3为避免周围环境
3、中微生物的污染,实验操作应在附近进 行。 4实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接 触。 ( 二消毒和灭菌 1消毒是 指 。常用的方法有、消毒 法。8en9GjDA6t 2灭菌是指 。常用的方法有:、灭 菌。分别适用于那些用具? 8en9GjDA6t 思考 2无菌技术除了防止培养物被污染外,还具有的目的是 什么? - 3 - / 17 思考 3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太 挤,目的是什么? 思考 4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要首先打开排气 阀,煮沸并排除锅内冷空气,其目的是;随后关闭排气阀 继续加热,气压升至,温度为,并维持 min ;最后切 断热源,使温度自然降温,
4、气压务必降至时打开锅盖,其目的是防 止 8en9GjDA6t 实验操作 -大肠杆菌的纯化培养 : 本 实 验 所 用 的 培 养 基 是, 本 实 验 可 分 成 和 8en9GjDA6t 两个阶段进行。 一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是: 、。 思考 5在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中,动作 要迅速,原因是什么? 溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么? 思考 6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质? 2 倒平板:待培养基冷却至左右时在酒精灯火焰附近操作 进行。 其过程是: - 4 - / 17 在火焰旁右手拿,左手; 使锥形瓶的瓶
5、口; 左手将培养皿,右手,立刻盖上皿盖。 待平板冷却凝固后,将平板。 思考 7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么? 思考 8倒平板的目的是什么? 思考 9若皿盖和皿底之间粘有培养基,则该平板能否培养微 生物?为什么? 思考 10配制斜面培养基作用是什么?,试管为什么要加塞棉 塞? 二、纯化大肠杆菌 微生物接种:最常用的是法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 8en9GjDA6t 1平板划线法是 的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 8en9GjDA6t 其操作步骤是:将在酒精灯火焰上灼烧直至。在酒 精灯火焰旁冷却接种环,并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌 种试管口通过火焰达到的
6、目的。将冷却的接种环伸入 到。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿 盖打开一条缝隙,把接种环,盖上皿盖,不要划破培养 - 5 - / 17 基。灼烧接种环,冷却后从划线。重复上述过程, 完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。 8en9GjDA6t 将平板培养。 思考 11取菌种前灼烧接种环的目的是什么?为什么除第一 次划线外,其余划线前都要灼烧接种环?取菌种和划线前都要求接 种环冷却后进行,其目的是? 8en9GjDA6t 最后灼烧接种环的目的是?在第 1 次划线后都从上次划线末端 开始的目的是? 2稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时,即
7、可获得单个细菌形成的标准菌 落。8en9GjDA6t 系列稀释操作: 取盛有 mL水的无菌试管 6 支,编号 101、102、103、 104、105、106。8en9GjDA6t 用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101 试管中, 并吹打 3 次使之混匀。 从 101 倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102 试管内吹打均 匀,获得 102 倍液。依此类推。 8en9GjDA6t 思考 12系列稀释操作的注意事项是什么? - 6 - / 17 思考 13涂布平板操作的步骤是什么? 结果分析与评价 1培养未接种培养基的作用是什么?,若有菌落形成,说明什 么? 2在肉汤培养基上,大肠杆菌菌
8、落颜色?形态? 3培养 12h 和 24h 后的菌落大小?;菌落分布位置?原因? 思考 14在某培养基上出现了3 种特征不同的菌落是什么原 因? 思考 15频繁使用的菌种利用什么法保存?长期保存菌种的方 法是什么? 典例精析 【 例1 】 下 列 关 于 微 生 物 营 养 的 说 法 , 正 确 的 是( A同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B凡是碳源 都能提供能量 c除水以外的无机物仅提供无机盐 D无机氮源 也能提供能量 【例 2】细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几 种不 同的 处理 ,这 些方法 依次 用于 杀灭哪 些 部位的 杂菌 类型一微生物的营 类型二 无菌技术
9、- 7 - / 17 ( 8en9GjDA6t A接种针、手、培养基 B高压锅、手、接种针 C培养基、手、接种针 D接种针、手、高压锅 【例 3】 以下 关于 制备牛 肉膏 蛋白 胨固体 培 养基的 叙述错 误的 是 ( A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯 C待培养基冷却至50左右时进行倒平板 D待平板冷却凝固约510 min 后将平板倒过来放置 【例 4】下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D. 灭菌必须在接种前 知识拓展 3 消毒与灭菌的区别 消毒是一种采用较温和的理化因素,仅
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