生物:5..3《血红蛋白的提取和分离》教案(2)(新人教版选修1).pdf
《生物:5..3《血红蛋白的提取和分离》教案(2)(新人教版选修1).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《生物:5..3《血红蛋白的提取和分离》教案(2)(新人教版选修1).pdf(12页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、1 / 12 课题 3 血红蛋白的提取和分离 一、学习目标: 本课题尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从 复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法,并了解色谱法,电 泳法等分离生物大分子的基本原理,为今后学习运用这些技术打下 基础。W6wF0QhZ0s 二、重点: 凝胶色谱法的原理和方法 三、难点: 样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【基础梳理】 一、凝胶色谱法 1、概念:也称做;是根据分离蛋白质的有效方 法。W6wF0QhZ0s 2、原理 红细胞的洗涤:目的是。分离时采取,直至上清液中 没有,表明红细胞已洗涤干净。 W6wF0QhZ0s (2 血红蛋白的释放:在和
2、的作用下,红细胞破裂,释放出 血红蛋白。 (3分离血红蛋白溶液:把离心后,将试管中的液体用过 3 / 12 滤、除去 ,于中静置片刻后,分离出下层的。 2、粗分离:即透析 (1 方法:将血红蛋白溶液装入,将放入一定量适宜浓度 的中,透析。W6wF0QhZ0s (2 目的:将的杂质除去。 (3 原理:透析袋能使小分子自由进出,而将大分子物质保留在袋 内。 3、纯化 :通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。 操作如下: (1 凝胶色谱柱的制作。 (2 凝胶色谱柱的装填 材料:本实验使用的是。 方法:凝胶用充分溶胀后。配成,一次性倒人色谱 柱内。不能有存在;不能发生流干露出凝胶颗粒的现象。
3、 W6wF0QhZ0s (3 样品的加入和洗脱 a、准备:加样前,打开流出口,使柱内凝胶面上的缓慢下 降到与平齐,关闭出口。 W6wF0QhZ0s b、加样:用小心地将 1mL透析后的样品加到的顶端,注 意不要破坏。W6wF0QhZ0s c 、加样后:打开下端出口,使样品渗入内。 4 / 12 洗脱:加入,打开下端出口,进行。 4 、 纯 度 鉴 定 : 在 鉴 定 的 方 法 中 , 使 用 最 多 的 是。五、操作提示W6wF0QhZ0s 1、红细胞的洗涤:、与十分重要。过少,无法 除去血浆蛋白;过高和过长会使等一同沉淀,达不到分 离效果。W6wF0QhZ0s 2、色谱柱填料的处理:商品凝
4、胶使用前需直接放在中膨 胀,可以将加入其中的 用加热,加速膨胀。 3、凝胶色谱柱的装填:在装填凝胶柱时,不得有气泡存在。气泡 会搅乱洗脱液中蛋白质的,降低。W6wF0QhZ0s 4、蛋白质的分离:如果红色区带地移动,说明色谱柱制作成 功。 【探究归纳】 一、人们用鸡的红细胞提取DNA,而用人成熟的红细胞提取血红蛋 白的原因是什么 ? 二、洗涤红细胞时为什么不能用蒸馏水代替生理盐水? 三、在血红蛋白释放过程中。加入蒸馏水和甲苯的目的是什么? 四、凝胶色谱法的原理归纳 【典例导析】 类型一 凝胶色谱法分离蛋白质 【例 l】凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术, 5 / 12 由于设备简单、操作
5、方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高 的分离效果,目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分 子免疫学以及医学等有关领域广泛应用,不但应用于科学实验研 究,而且,已经大规模地用于工业生产。据图回答问题: W6wF0QhZ0s ,洗脱时,对洗脱液的流速要求是。 W6wF0QhZ0s 【思路点拨】 用凝胶色谱技术分离各种大分子物质时,大分子物质 先洗脱出来,然后是小分子物质。大分子物质由于直径较大,不易 进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布于颗粒之间,所以向下移动的速 度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入 凝胶颗粒的微孔,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个 凝胶颗粒
6、内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进 入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质从而落后于大 6 / 12 分子物质洗脱出来。在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密,以降 低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时,不得有气泡存在, 因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。二是 凝胶色谱操作过程中,不能发生洗脱液流干,露出凝胶颗粒的现 象。一旦发生上述两种情况,凝胶色谱柱需要重新装填。 jNH4ePs1Zm 互动探究 (1凝胶色谱柱的直径大小会影响分离的效果吗? (2题目中 a 和 b 的分离度与凝胶色谱柱的高度有关吗? (3除了题目中提到的气泡需要重装以外,还有哪种
7、情况需要重装? 类型二 探讨电泳的原理 【例 2】蛋白质分子中,氨基酸的-氨基和 -羧基虽然大部分结合 成为肽键,但是蛋白质分子内仍含有各种酸性基团和碱性基团,如 肽链末端的 -氨基和 -羧基、天冬氨酸和谷氨酸残基中的羧基、赖 氨酸和组氨酸残基中的各种碱性基团,所以蛋白质是两性电解质。 在酸性溶液中,碱性基团的解离增大,使蛋白质带正电荷;在碱性 溶液中酸性基团 的解离加强,使蛋白质带负电荷。当溶液到达某一 pH 时,蛋白质可因内部酸性和碱性基团的解离相等而呈等电状态, 这时的溶液 pH 叫做蛋白质的等电点。不处于等电点状态的蛋白质分 子的正、负电荷量是不相同的。试回答下列问题: jNH4ePs
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 血红蛋白的提取和分离 生物 血红蛋白 提取 分离 教案 新人 选修
链接地址:https://www.31doc.com/p-4515754.html