沙门氏菌的检验分析.pdf
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1、沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1 班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 201430520115 201430520116 201430520121 201430520122 摘要:本实验采用 GB/T4789.4-2010 的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过 本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术,了解沙门氏菌的一些生化特性; 本实验 先用显色培养基找出可疑菌落, 再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌,再 通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词:沙门氏菌接种 生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一,其病原沙门 氏菌属于肠道细菌科。 沙门
2、氏菌是一个统称, 泛指 2000 多种有紧密连系的细菌, 包括引起食物中毒, 导致胃肠炎、 伤寒和副伤寒的细菌。 虽然只有少数人因沙门 氏菌而患病, 但是,在世界范围内的细菌性食物中毒事件中,由沙门氏菌引起的 占大多数。因此,采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌,已经成为了人们 最关心的问题之一 1 。国标法 (GB4789.4-2010) 是目前中国规定的食品中沙门氏 菌的标准检测方法 , 也是基层实验室普遍采用的检测方法, 它根据沙门氏菌的生 长特点和生化特性 , 采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5 个步骤 进行 2 。 1材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 仪器设备
3、均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱: 36 1,42 1 吸管: 1 mL(具 0.01 mL 刻度) 、10mL (具 0.1mL刻度或微量移液器及吸头 电子天平 PL602-S,梅特勒 -托利多仪器(上海)有限公司; 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B ,上海申安医疗器械厂 1.1.2 试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和 H诊断血清、 API20E生化试剂盒或 VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3 培养基 蛋白胨水( BPW) 、四硫磺酸钠煌绿( TTB ) 、亚硒酸盐胱氨酸( SC )增菌液、亚硫 酸铋( BS )琼脂、 HE 琼脂、三糖铁琼脂、
4、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化 钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、-D 半乳糖苷 (ONPG)培养基 1.2 实验方法 1.2.1 培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤 蛋白胨水(BPW ) : 称取蛋白胨 10g、 氯化钠 5g、 磷酸氢二钠 9g、 磷酸二氢钠 1.5g 、 蒸馏水 1000ml,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约 10 min,煮沸溶解, 调节 pH,高压灭菌 121 ,15 min 。 分装 10 瓶,每瓶 90ml 四硫磺酸钠煌绿 (TTB ) :高压灭菌 121 ,15 min 灭菌冷却后至 30,每 100ml 基础培养液加碘液
5、2ml,煌绿液 1ml 1.2.1.2配制培养基的注意事项 (1)按照说明书上的用量进行换算,称取准确分量的合成培养基粉末; (2)加热煮沸溶解培养基时,留意锅内水位的变化,水位下降可再添加适量的 水,以免水分蒸发过多,导致后面分装不够量; (3)往试管中放小导管时,注意处理气泡。 1.2.2 沙门氏菌群检测 1.2.2.1沙门氏菌检测程序 2沙门氏菌检测操作步骤 2.1 前增菌 称取 10 g (mL ) 样品放入盛有 90 mL BPW 的无菌均质杯中, 以 8 000 r/min 10 000 r/min 均质 1 min 2 min,或置于盛有 90 mL BPW 的无菌均质袋中,用
6、拍击式均质器拍打 1 min2 min。 使用均质袋,可直接进行培养,于 36 1 培养 8 h 18h。 2.2 増菌 轻轻摇动培养过的样品混合物,移取 1 mL,转种于 10mL TTB 内,于 42 1培养 18h24h。同时,另取 1mL ,转种于 10mL SC内,于 361培养 18 h 24h。 2.3 分离 分别用接种环取增菌液1 环, 划线接种于一个 BS琼脂平板和一个 HE琼脂平 板 。于 361分别培养 18 h24 h(HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基 平板)或 40h48h(BS琼脂平板) ,观察各个平板上生长的菌落, 各个平板上 的菌落特征见表 1 2.4 生化试
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