2019_2020学年高二人教版生物选修一课件:2.1 微生物的实验室培养(二) .pdf
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1、第5课时 微生物的实验室培养(二) 专题2 微生物的培养与应用 学习导航 1.通过阅读教材P1617“(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”,掌握配 制培养基的步骤和倒平板操作的过程。 2.结合教材P1819“(二)纯化大肠杆菌”,理解并掌握利用平板划线法 和稀释涂布平板法来纯化微生物的方法。 重难点击 1.掌握制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法。 2.学会用平板划线法和稀释涂布平板法纯化微生物。 一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 当堂检测 二、微生物的分离与纯化技术 内容索引 一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 基础梳理 牛肉膏蛋白胨固体培养基是细菌培养中常用的一种培养基,大肠杆菌的 纯化就是用的该培养
2、基。 1.牛肉膏蛋白胨培养基的成分及各成分提供的营养牛肉膏蛋白胨培养基的成分及各成分提供的营养 培养基组分提供的主要营养物质 牛肉膏5.0 g碳源、氮源、磷酸盐和维生素 蛋白胨10.0 g碳源、氮源和维生素 NaCl 5.0 g无机盐 蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、氧元素 2.制备步骤制备步骤 (1)培养基的配制 计算:根据牛肉膏蛋白胨培养基 的比例,计算配制100 mL培养基时 各成分的用量 称量 0.5 g牛肉膏:比较黏稠,用 称取 1 g :易吸潮,要 (牛肉膏也是) 0.5 g NaCl 2 g_ 琼脂 配方 称量纸 蛋白胨迅速称取 溶化 :1 moL的NaOH、pH试纸,将pH
3、调为7.4 7.6 牛肉膏和称量纸水 加热溶化后取出称量纸 加蛋白胨和NaCl 微火加热、不断搅拌 溶解后加 (需不断用玻棒搅拌,防止琼脂糊底而导致烧杯破裂) 熔化后,补加蒸馏水至 mL 调节pH 琼脂 100 :趁热分装到洁净锥形瓶中 加棉塞:用棉花不用脱脂棉,脱脂棉吸水 包扎:外包 纸,且挂标签 牛皮 分装 (2)灭菌 (3)倒平板 将 的培养皿放在 的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶, 左手拔出棉塞。 右手拿锥形瓶,使瓶口 。 用左手将培养皿打开一条 的缝隙,右手将锥形瓶中的培养 基倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。 等待平板冷却凝固后,将平板 。 培养基: 灭菌 培养皿: 灭菌 倒
4、过来放置 高压蒸汽 干热 灭过菌火焰旁 迅速通过火焰 稍大于瓶口 1.填表比较溶化时两次使用玻棒搅拌的目的 问题探究 操作搅拌的目的 往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠后用玻 棒搅拌 _ 加入琼脂,加热使其熔化的过程中使 用玻棒搅拌 _ 防止琼脂糊底而导致烧杯破裂 促使蛋白胨和氯化钠溶解 答案 答案 琼脂是一种多糖,在98 以上熔化,在44 以下凝固,倒平板 时高于50 则会烫手,低于50 时若不及时操作,琼脂会凝固。可以 用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时, 就可以进行倒平板了。 2.倒平板时的注意事项 (1)培养基灭菌后,需要冷却至50 左右时,才能倒平板的原因是什么?
5、 你用什么办法来估计培养基的温度? 答案 答案 答案 通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生 物污染培养基。 (2)分析右图,回答、问题: 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 答案 答案 平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也 比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。 从防止杂菌污染的角度思考,平板冷凝后将平板倒置的原因是什么? 答案 答案 答案 未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后,如果无菌落生长, 说明培养基制备成功、合格,未受到污染。 (3)怎样判断制备的培养基是否合格、成功,是否受到污染? 答案 拓展应用 1.某学校
6、开展大肠杆菌培养活动,首先对实验室进行清扫和消毒处理,然 后准备各种原料和用具。请回答下列问题: (1)对买回来的菌种进行扩大培养, 首先制备试管培养基, 写出制备牛肉膏蛋 白胨固体培养基所需的原料: 。 (2)微生物在生长过程中对各种成分需求量不同, 配制培养基时各成分要有合 适的 。 在烧杯中加入琼脂后要不停 , 防止 。 (3)将配制好的培养基分装到试管中,加棉塞后若干支试管一捆,包上牛皮 纸并用皮筋勒紧放入 中灭菌。灭菌完毕后拔掉电源,待压 力表的压力自然降到0时,将试管取出。如果棉塞上沾有培养基,此试管 应 。 牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂 比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂 高
7、压蒸汽灭菌锅 废弃 答案 2.制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基,关于倒平板的具体描述正确的是 待培养基冷却至40 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板 将灭过菌 的培养皿放在桌面上,左手拔出棉塞 右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通 过火焰 用左手的拇指和食指完全打开皿盖 右手将锥形瓶中培养 基倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖 等待平板冷却510 s, 将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上 A. B. C. D. 答案解析问题导析 问题导析问题导析 (1)培养基灭菌后,需冷却至 左右时才能倒平板,原因 是琼脂在44 以下凝固。 (2)倒平板的过程要在 附近进行。 答案返回上页 酒精灯火焰 50 返回上页
8、解析 解析 琼脂是一种多糖,在98 以上可溶解于水,在44 以下凝固, 倒平板时高于50 则会烫手,低于50 时若不能及时操作,琼脂会凝 固。无菌操作应贯穿于操作的全过程,皿盖全打开则空气中的微生物会 进入培养基。等待平板冷却凝固(大约需510 min)后,将平板倒过来放 置,使皿盖在下,皿底在上。 答案 答案 要对培养基进行高压蒸汽灭菌,对培养皿进行干热灭菌,酒精灯 火焰旁属于灼烧灭菌。 一题多变一题多变 倒平板的过程需要进行无菌操作,在培养基的制备过程中,还有哪些环 节需要进行无菌操作? 答案 二、微生物的分离与纯化技术 基础梳理 1.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 (1)平板划线法 原理:通过
9、接种环在琼脂固体培养基表面 的操作,将聚集的 菌种逐步 到培养基的表面。 步骤 接种环灭菌:将接种环放在酒精灯火焰上灼烧直至烧红 连续划线 稀释分散 取菌种 a.在酒精灯 冷却接种环,并打开盛有菌液的试管的_ b.将试管口通过 达到消灭试管口杂菌的目的 c.将已 的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液 d.将试管口 ,并塞上棉塞 火焰旁棉塞 火焰 冷却 通过火焰 平板 划线 培养:将平板 ,放入培养箱中培养 a.左手将皿盖打开一条缝隙,右手把沾有菌种的接种环迅速伸入平 板内,划 条平行线,盖上皿盖。注意 。 b.灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域 开始往第二区 域内划线。重复以上操作,完成三、四、五
10、区域内划线。注意不 要将最后一区的划线与 相连 三至五不要划破培养基 划线的末端 第一区 倒置 (2)稀释涂布平板法 原理:将菌液进行一系列的 ,然后将不同稀释度的菌液分别 涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 梯度稀释 步骤 .系列稀释操作 a.编号为101106试管中分 别盛有 水。 b.用移液管吸取 培养 的菌液,注入101倍稀释的试管中,得到稀释菌液。 c.从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液,注入102倍稀释的试管中。依次 类推,完成菌液的稀释。 注意注意 移液管要经过灭菌,并且操作应在酒精灯火焰附近完成。 9 mL 1 mL .涂布平板操作 涂布器消毒:将涂布器浸在盛有 的烧
11、杯中 取菌液:取少量菌液滴加到 表面 涂布器灭菌:将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精 燃尽后, 810 s 涂布平板:用涂布器将 均匀涂布在培养基表面,涂布时 可转动培养皿,使菌液分布均匀 酒精 培养基 冷却 菌液 2.菌种保藏菌种保藏 比较项目临时保藏甘油管藏 适用范围 的菌种 的菌种 培养基 培养基 培养基 保藏温度4 20 具体方法 接种到固体斜面培养基上 适宜温度下培养 冰箱 中保藏 甘油瓶中装入甘油后 将菌液转移至甘油瓶中混 匀后冷冻箱中保存 频繁使用长期保存 固体斜面液体 4 灭菌 1.平板划线操作注意事项 (1)平板划线法接种菌种时,哪些操作可防止杂菌污染? 问题探究 答
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