2019-2020学年高中生物选修一(人教版 课件):专题2 课题1 微生物的实验室培养 .ppt
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1、目标导航,预习导引,1.说出培养基的种类、营养要素、配制原则。 2.能根据消毒、灭菌的原理,进行无菌操作。 3.能用牛肉膏蛋白胨培养基纯化大肠杆菌。,目标导航,预习导引,一,二,三,四,一、培养基 1.概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质,该基质称为培养基。 2.种类 根据物理性质不同可将培养基分为液体培养基和固体培养基。 3.营养构成 各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,此外,还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。,目标导航,预习导引,一,二,三,四,二、无菌技术 1.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,具体操作如下。 (1)对
2、实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2.消毒:指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。日常生活中常用的方法有 煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法。 此外,实验室里还用紫外线或化学药物进行消毒。,目标导航,预习导引,一,二,三,四,3.灭菌:指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸
3、汽灭菌。,目标导航,预习导引,一,二,三,四,三、大肠杆菌的纯化培养 1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)倒平板的过程 在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞。 右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰。 左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,左手立刻盖上皿盖。 待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置,使皿盖在下、皿底在上。,目标导航,预习导引,一,二,三,四,2.纯化大肠杆菌 接种方法:微生物接种最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。 (1)平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
4、(2)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 两种接种方法都是为了将聚集在一起的微生物分离,得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的单个菌落。,目标导航,预习导引,一,二,三,四,四、菌种的保存 1.对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。 2.对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,一、培养基的成分与微生物生长所需的营养 微生物细胞的化学组成与其他生物的大体相同,也是由C、H、O、N、P、S以及其他元素组成,其中C、H、O、N占细胞干重的90%以上,这些元素最终来自外界环
5、境中的各种无机化合物和有机化合物。这些化合物可以归纳成碳源、氮源、水、无机盐和特殊营养物质五大类。因而,虽然培养不同微生物的具体培养基配方不同,但一般都要有这几类物质。下页左上表为碳源、氮源与特殊营养物质的相关知识。,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,特别提醒(1)不同微生物对营养的需求不同,所以培养不同的微生物所需要的营养可能不同。 (2)对异养微生物来说,含C、H、O、N的化合物既是碳源,又是氮源。 (3)培养微生物时营养物质要协调。营养物质过少不能满足微生物的营养需求,过多对微生物的生长有抑制作用。 (4)之所以要补充特殊营养物质,是
6、由于微生物缺乏合成这些物质所需的酶或合成能力有限。 (5)在提供营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对pH以及氧气等的需求。如培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性,培养细菌时需将pH调至中性或微碱性,培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,二、配制培养基的原则 1.目的要明确。要根据培养的微生物的种类、培养的目的等选择原料。如自养微生物可以用无机物作碳源、氮源。 2.营养要协调。配制培养基时,必须注意各种营养物质的浓度和比例。如蔗糖是多种微生物的主要营养物质,但高浓度的蔗糖会抑制微生物的生长。其中碳源和氮源的比最为重要。例如:碳氮比为41时,谷
7、氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少;碳氮比为31时,菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 3.pH要适宜。各种微生物适宜生长的pH范围不同。,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,三、消毒与灭菌的比较,二者的主要区别:消毒只能杀死一部分微生物,灭菌杀死的是所有微生物。 特别提醒无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还能有效避免操作者自身被微生物感染。,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,四、几种消毒和灭菌方法及其适用范围,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,规律总结用巴氏消毒法对牛奶进行消毒,可以杀死牛奶中的微
8、生物,而牛奶的营养成分不会被破坏;紫外线照射30 min可以杀死物体表面或空气中的微生物,在照射前,适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果;对于那些培养基中需要、但加热会分解的化合物,如尿素、NaHCO3,不能使用高压蒸汽灭菌法,只能将其配成溶液,使用特定的器材单独过滤灭菌。,知识梳理,典例透析,一,二,三,四,五,六,五、倒平板的注意事项 1.培养基灭菌后,需要冷却到50 左右时,才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。 2.倒平板前,要将装有培养基的锥形瓶瓶口通过火焰灼烧,以防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板
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