体外培育牛黄资料.pdf
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1、体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 体外培育牛黄 与天然牛黄对比研究资料 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 2 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究 资料纲要 一、体外培育牛黄是国家中药一类新药。 牛黄是干燥的牛胆结石 , 是名贵的中药材。 体外培育牛黄是模拟体内胆结石形成的原理和生物化学过程,在多种酶 作用下,清除胆汁中成石的拮抗成分,制成成石牛胆汁,再通过促发作用, 形成结石核心,由于静电吸引及有机高分子物质的架桥作用,呈网状向核 心层层沉附、增大成牛胆结石。其性状、结构、成分、含量均与天然牛黄 一致;药效学、毒理学研究结果证明安全、有效;临床疗效与天然牛黄一 致,且对某些
2、病种的疗效高于天然牛黄。 二、质量标准采用正式国家药品标准,与药典牛黄标准一致。 体外培育牛黄的质量标准为正式国家药品标准WS3-45 (Z-051)-2003(Z) , 除增加了 游离胆红素检查 外,其它各项(性状、鉴别、检查、含量测定、 功能与主治、用法与用量、注意、贮藏)均与中国药典2000 版一部中牛黄 的质量标准一致。 三、理化性质(性状、结构、成分、含量)与牛黄一致,且更稳定。 体外培育牛黄与天然牛黄均呈球形或类球形,直径0.5-3cm。表面光滑, 呈黄红色至棕黄色。体轻,质松脆,断面有同心层纹。气香,味苦而后甘, 有清凉感,嚼之易碎,不粘牙。 显微观察均可见絮状、团絮状棕色胆红素
3、钙颗粒,呈网状结构,网孔7- 350。 以连续生产的体外培育牛黄及不同产地的天然牛黄进行对比,分析其成分 (胆红素、胆酸、去氧胆酸、牛磺酸、胆固醇、磷脂、无机盐、氨基酸、 糖蛋白、灰分、水分)及相应成分的含量,结果表明体外培育牛黄的各种 成分及其含量与天然牛黄一致。 四、体外培育牛黄与天然牛黄的指纹图谱表现一致。 指纹图谱(胆红素类、胆酸类、氨基酸及肽类)的对比分析表明,体外培 育牛黄与天然牛黄成分一致,且比天然牛黄更稳定。 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 3 五、体外培育牛黄与天然牛黄具有相同的药理、药效。 体外培育牛黄的抗惊厥、镇静、解热、抗菌、消炎、降压等作用与天然牛 黄一
4、致。 体外培育牛黄的主要药效集中反映在中枢作用方面:除了前述抗惊厥、镇 静、解热作用外,还有耐缺氧、清除自由基,保护脑细胞,保护心功能的 作用。 六、体外培育牛黄临床疗效良好与天然牛黄无统计学差异。 应用体外培育牛黄及以其为原料药的复方制剂治疗中风、乙脑、急性咽炎、 牙周炎、疖肿病人共1852 例,疗效良好,总疗效、临床症状疗效、临床体 征疗效以及病理舌象的改善作用等均与天然牛黄相似。且治疗过程中也未 发现明显不良反应。 、期临床试验共1852例治疗结果 组别药名病名总例数愈显率( % )总有效率( % ) 治疗组安宫牛黄丸乙脑 182 93.95 99.45 对照组安宫牛黄丸乙脑 78 88
5、.46 97.43 治疗组单味乙脑 124 92.74 99.20 对照组单味乙脑 41 75.60 87.80 治疗组安宫牛黄丸中风 248 47.98 84.78 对照组安宫牛黄丸中风 148 47.97 84.93 治疗组单味中风 95 37.90 86.30 对照组单味中风 32 32.25 80.60 治疗组片仔癀急性咽炎 416 75.50 96.64 对照组片仔癀急性咽炎 102 80.38 97.06 治疗组单味牙周炎 148 90.54 99.32 对照组单味牙周炎 39 84.61 94.87 治疗组单味疖肿 110 76.36 96.36 对照组单味疖肿 39 66.67
6、 94.87 备注:治疗组用体外培育牛黄;对照组用天然牛黄。 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 4 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 目录 (1) 、牛黄形成机理 (2) 、体外培育牛黄机理与工艺研究 (3) 、天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析 (4) 、不同产地的天然牛黄成分及含量的分析研究 (5) 、体外培育牛黄、天然牛黄、人工牛黄比较表 (6) 、体外培育牛黄成分含量的分析研究 (7) 、体外培育牛黄、天然牛黄相关仪器检测对比性研究 (8) 、体外培育牛黄、天然牛黄游离胆红素含量对比性研究 (9) 、体外培育牛黄指纹图谱研究 (10) 、体外培育牛黄、天然牛黄主要药效
7、学对照性研究 (11) 、体外培育牛黄、天然牛黄一般药理对照性研究 (12) 、体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究 (13) 、体外培育牛黄急性毒性试验 (14) 、体外培育牛黄长期毒性试验 (15) 、体外培育牛黄致突变试验 (16) 、体外培育牛黄培养细胞染色体畸变试验 (17) 、体外培育牛黄对小鼠微核试验 (18) 、体外培育牛黄生殖毒性试验 (19) 、体外培育牛黄与天然牛黄II 、III期临床对比研究汇总 (20) 、安宫牛黄丸(体外培育牛黄)治疗痰热闭窍证(中风) II期临床试验总结 206例临床试验分析 (21) 、安宫牛黄丸(体外培育牛黄)治疗暑温(乙脑)II 期临 床试
8、验总结 150例临床研究分析 (22) 、片仔癀胶囊(体外培育牛黄)治疗上焦热毒证(急性咽 炎)期临床试验总结-203例临床试验分析 (23) 、体外培育牛黄治疗牙周炎期临床试验总结80 例临床 试验分析 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 5 (24) 、体外培育牛黄治疗疖肿期临床试验总结63 例临床试 验分析 (25) 、体外培育牛黄治疗中风期临床试验总结339例临床 试验分析 (26) 、体外培育牛黄治疗暑温(乙脑)期临床试验总结 278 例临床试验分析 (27) 、体外培育牛黄治疗上焦热毒证(急性咽喉炎)期临床 试验总结 319 例临床试验分析 (28) 、体外培育牛黄治疗牙
9、周炎期临床试验总结 112 例临床试验分析 (29) 、体外培育牛黄治疗疖肿期临床试验总结 102 例临床试验分析 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 6 (1) 、牛黄形成机理 : 大肠杆菌大肠杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌 肠道感染结合胆红素 游离胆红素 -葡萄糖醛酸酶 钙浓度升高 + 结石 胆红素钙颗粒 成石胆汁 核心 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 7 (2) 、体外培育牛黄机理与工艺研究 在历经十多年研究胆红素钙结石形成的原因和机理的基础上,基于对胆红素 型牛胆结石的认识,模拟体内结石形成的原理和生物化学过程。根据天然牛黄的 性状、结构、成分、含量特点,应用可调控牛
10、黄质量的配方,在可控条件下的牛 胆结石体外培育,并获得性状、结构、成分、含量、药效、临床疗效与天然牛黄 相一致的体外培育牛黄。 工艺步骤: 成石牛胆汁的生成; 结石核心的形成; 结石的分层培育; 结石的真空干燥。 工艺路线: (3) 、天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析 生物牛胆汁 成石牛胆汁 胆汁核心 生物反应 生化过程 配方 调 pH值 搅拌 牛黄机( 摇转) 调节pH 分层培育 干燥 成品 新鲜牛胆汁 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 8 质量标准对比表: 类项体外培育牛黄(国家药品标准)牛黄(药典2000 版) 来源 本品为以牛科动物牛的新鲜牛胆汁液, 配 成成石胆汁
11、, 在体外培育所得的牛胆红素 钙结石。 本品为牛科动物牛干燥的胆结石。宰牛 时,如发现有牛黄,即滤去胆汁,将牛黄 取出,除出外部薄膜,阴干。 性状 呈球形、类球形,直径0.5-3cm ,表面光 滑,呈黄红色至棕黄色,体轻,质松脆, 有同心层纹。气香,味苦而后甘,有清凉 感,嚼之易碎,不粘牙。 呈卵形、类球形,直径0.6-3 (4.5 )cm , 表面黄红色至棕黄色,体轻,质松脆,有 同心层纹。 气香,味苦而后甘, 有清凉感, 嚼之易碎,不粘牙。 鉴别 粉末加清水调和,涂于指甲,能将指甲染 成黄色。 加清水调和,涂于指甲上,能将指甲染成 黄色。 显微鉴别呈正反应显微鉴别呈正反应 胆红素鉴别呈正反
12、应胆红素鉴别呈正反应 胆酸鉴别呈正反应胆酸鉴别呈正反应 去氧胆酸鉴别呈正反应去氧胆酸鉴别呈正反应 无无 检查 按药典附录水份测定法测定不得过9.0% 按药典附录水份测定法测定不得过9.0% 游离胆红素吸收度不得超过0.70 无 含量 测定 按药典测定薄层扫描法胆酸含量不得少 于 6.0%。 按药典薄层扫描法测定胆酸含量不得少 于 4.0%。 按药典分光光度法测定胆红素含量不得 少于 35.0%。 按药典分光光度法测定胆红素含量不得 少于 35.0%。 功能 主治 清心,豁痰,开窍,凉肝,息风,解毒。 用于热病神昏,中风痰迷,惊厥抽搐,癫 痫发狂, 咽喉肿痛, 口舌生疮, 痈肿疔疮。 清心,豁痰
13、,开窍,凉肝,息风,解毒。 用于热病神昏,中风痰迷,惊厥抽搐,癫 痫发狂, 咽喉肿痛, 口舌生疮, 痈肿疔疮。 用法 用量 0.15-0.35g。多入丸散用;外用适量,研 末敷患处。 0.15-0.35g 。多入丸散用;外用适量,研 末敷患处。 贮藏 臵阴凉干燥处,遮光,密闭保存,防潮防 压。 遮光,密闭, 臵阴凉干燥处, 防潮,防压。 (4) 、不同产地的天然牛黄成分及含量的分析研究 参照国内外有关学者对天然牛黄成分含量的分析方法和结果,对国内外五 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 9 个不同产地的优质牛黄进行了分析研究,其结果如下 成分含量 (%) 产地 澳大利亚牛黄1 西藏牛
14、黄2 京牛黄 3 进口牛黄1 进口牛黄2 水 分 6.9 6.8 7.0 7.0 6.7 灰 分 6.8 6.7 6.9 7.1 6.8 胆 红 素36.700.67* 39.62 1.39* 35.80 0.55* 29.29 0.72* 40.90 0.67* 胆 酸 20.101.48* 15.00 1.13* 14.90 0.88* 15.30 1.03* 17.04 0.92* 去氧 胆酸 6.480.77* 4.900.76* 4.860.75/ 10.63 0.86* 7.150.63* 牛 磺 酸6.420.49* 5.920.73* 6.250.78* 4.660.74* 6
15、.460.55* 胆 固 醇4.801.09* 5.451.08* 5.790.72* 10.55 0.41* 4.400.66* 磷 脂 1.750.38* 1.700.39* 1.900.38* 1.300.41* 2.960.37* 无 机 盐3.36 3.58 3.45 3.73 2.96 氨 基 酸0.655 0.633 0.748 0.565 0.688 糖 蛋 白1.74 2.05 2.59 1.99 2.06 合 计 95.70 92.35 90.19 92.62 97.37 (5) 、体外培育牛黄、天然牛黄、人工牛黄比较表 项目品名 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药
16、业 10 体外培育牛黄天然牛黄人工牛黄粉 性 状 外观 棕黄色球、类球形、质 轻 、 松 、 脆直 径 0.5-3cm 棕黄色球、类球形、质 轻 、 松 、 脆直 径 0.5-3cm 无形状、粉末、 浅黄色 断面 断层金黄色,有同心层 纹结构 断层金黄色,有同心层 纹结构 无结构 气味气香、味苦而后甜气香、味苦而后甜微腥,微苦 显 微 观 察 光 学 镜 10 倍 取少许粉末加50%甘 油乙醇液装片,镜下见 絮状、 团絮状棕色胆红 素钙颗粒 取少许粉末加50%甘 油乙醇液装片,镜下见 絮状、 团絮状棕色胆红 素钙颗粒 大量淀粉颗粒, 呈圆形、 多面形 扫描 电镜 呈 网 状 结 构 , 网 孔
17、 7-350u 呈 网 状 结 构 , 网 孔 7-350u 含 量 胆 红 素35%以上35%以上0.7% 胆酸12%以上7%以上12.5% 去氧胆酸 5%以上4%以上猪 去 氧 胆 酸 15% (6) 、体外培育牛黄成分含量的分析研究 通过对体外培育牛黄处方、制备工艺及其原理的研究,对所生产出的产品 成分含量的研究分析如下: 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 11 成分含量 (%) 批号 901102 901128 901220 910220 920418 水分7.1 6.9 7.0 6.9 7.0 灰分7.3 7.2 7.2 7.0 7.1 胆 红 素 35.58 0.62*
18、 36.61 0.66* 37.370.90 36.87 0.67* 37.960.82 胆酸 14.45 0.50* 16.90 0.59* 16.90 0.59* 16.85 0.60* 16.36 0.99* 去氧胆酸6.800.48* 6.790.40* 6.610.55* 6.60 0.40* 6.80 0.68* 牛 磺 酸6.480.66* 6.700.44* 6.720.46* 6.83 0.48* 6.70 0.44* 胆 固 醇5.950.29* 5.201.16* 5.000.40* 5.10 0.71* 5.30 0.41* 磷脂1.770.30* 1.800.62*
19、1.880.25* 1.88 0.36* 1.75 0.15* 无 机 盐3.68 3.40 3.35 3.43 3.28 氨 基 酸0.788 0.695 0.698 0.670 0.762 糖 蛋 白2.57 2.26 2.43 2.49 1.98 合计92.47 94.46 95.16 94.62 95.26 * n=12 * n=6 (7) 、体外培育牛黄、天然牛黄相关仪器检测对比性研究 红外光谱分析结果:天然牛黄与体外培育牛黄在1730-1350cm-1区间,均有 胆红素盐及胆红素高聚物质的特征峰。 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 12 傅立叶变换红外分光光谱仪分析结果
20、:体外培育牛黄与天然牛黄均见 1690cm-1为羧酸类; 1629-1565cm-1为酰胺类; 1404cm-1为羟基类。 高效液相色谱分析结果:胆酸、去氧胆酸对照品的图谱与体外培育牛黄、天 然牛黄中的胆酸、去氧胆酸一致。 薄层色谱分析结果:体外培育牛黄、天然牛黄色谱中,在与胆酸、去氧胆酸 对照品相应的位臵上显相同颜色的荧光斑点。 微量元素含量测定结果:体外培育牛黄与天然牛黄的微量元素及其含量均 基本一致。 氨基酸含量测定结果:体外培育牛黄与天然牛黄含有相同的17 种氨基酸。 (8) 、体外培育牛黄、天然牛黄游离胆红素含量对比性研究 游离胆红素含量对比表 批号 1 2 3 4 5 6 7 8
21、9 10 11 平均值 天然牛黄4.420 3.238 2.026 3.703 4.300 4.50 3.36 2.756 1.294 1.27 3.82 3.153 体外培育牛黄0.500 0.500 0.490 0.630 0.670 0.622 0.550 0.526 0.480 0.460 0.532 0.544 (9) 、体外培育牛黄指纹图谱研究 体外培育牛黄与天然牛黄三个提取部位(包括酸水、酸醇和二甲亚砜提取液) 的成分,即胆汁酸类、胆红素类等,均基本一致,但某些成分的比例有差异。 10 批体外培育牛黄三个提取部位(包括酸水、酸醇和二甲亚砜提取液)的HPLC 指纹图谱有较好的相似性
22、,说明人工体外培育牛黄的工艺是稳定的。 4 批天然牛黄的之间成分也基本一致,但某些成分,尤其是胆汁酸类成分的比例 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 13 有较明显差异。 指纹图谱(胆红素类、胆酸类、氨基酸及肽类)的对比分析表明,体外培育 牛黄与天然牛黄成分一致,且比天然牛黄更稳定。 (10) 、体外培育牛黄、天然牛黄主要药效学对照性研究: 体外培育牛黄( TPN )灌胃给药能显著抑制小鼠巴豆油性耳廓水肿,大 鼠角叉菜胶性足肿胀、大鼠巴豆油芽囊肿的渗出和增生,抑制白细胞游走反应, 对抗前列腺素 E2 致毛细血管通透性增加;对酵母致大鼠发热和伤寒副伤寒三联 疫苗侄家兔发热均有明显抑制作
23、用,TPN 对安钠咖致小鼠惊厥,吗啡致小鼠竖 尾反应有明显的对抗作用,而与戊巴比妥钠台用则有协同催眠作用;TPN 能显 著减低感染金色葡萄球菌小鼠的死亡率。 试验方法: 体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料 大鹏药业 14 1、TPN 的抗炎作用 1.1 对小鼠巴豆油性耳廓水肿的影响 1.2 对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响 1.3 对大鼠肉芽囊肿的影响 1.4 对白细胞游走反应的影响 1.5 对大鼠肾上腺素内抗坏血酸含量的影响 1.6 对大鼠毛细血管通透性的影响 2、TPN 的解热作用 2.1 对酵母致大鼠发热的影响 2.2 对伤寒副伤寒三联疫苗致家兔发热的影响 3、TPN 的中枢作用 3.1 对
24、安钠咖致小鼠惊厥的影响 3.2 对戊巴比妥钠阈下催眠的影响 3.3 对吗啡致小鼠竖尾反应的影响 3.4 对尼可刹致小鼠惊厥的影响 3.5 对士的宁致惊厥的影响 4、体外培育牛黄( TPN)的抗菌作用 结论: 抗炎作用:体外培育牛黄对小白鼠的巴豆油性耳廓水肿,大鼠的角叉菜胶性 足肿胀,羧甲基纤维素所致的白细胞游走反应均有明显的对抗作用,表明TPN 对急性炎症的渗出和白细胞的趋化均有抑制作用。TPN 的抗炎作用强度与天然 牛黄相近。其抗炎作用可能与对抗前列腺素有关。 解热作用: TPN 对酵母所致的大鼠的发热及对伤寒副伤寒三联疫苗致家兔发 热均有显著的抑制作用,其作用强度与天然牛黄相似。 中枢抑制
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