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1、硫酸庆大霉素生产工艺流程 班级 08 药剂姓名汪骏学号 08314028 发酵用小 单胞菌 一级种子 罐 二级种子 罐 三级种子 罐 四级种子 罐 酸化中和 交换 分离漂洗 产品 浓缩 喷雾干燥 成盐脱色压滤 洗涤洗脱 脱色 无菌接入 培养 48小时左右, pH 自然, 36-37 培养 24小时左右, pH6.8-7.4 培养 24小时左右, pH6.7-7.4 培养 4天, 34-35 洗脱收率 98% 浓缩收率 88% 炭脱收率 95% 调pH至5.0-5.8 喷速: 20-80L/h 进塔温度: 116-135 喷雾收率 90% 硫酸庆大霉素工业发酵的总流程图 孢子悬浮液的制备流程及工
2、艺要求 设备: 蒸汽灭菌柜双人净化工作台 操作步骤 1. 分装纯化水至三角瓶,每瓶装150mL左右。 2. 组装接种瓶及接种皮管,组装严密,包扎结实。 3. 以上器材及接种用具灭菌, 125 1C, 60min 。 4. 在缓冲间穿好无菌衣,戴上无菌口罩, 进入洁净 室,符合人流物流进出程序。 5. 用酒精棉球擦拭超净台面双手,先擦台面, 后 擦手。 6. 开启超净台通风, 观察风速是否正常, 将接种瓶、 皮管、无菌水、接种铲及斜面摆在洁净台上。 7. 将灭菌纯化水倒入茄子瓶中,一瓶纯化水倒两只 茄子瓶。 8. 用接种铲将孢子刮下制成孢子悬浮液,用力适 度,勿刮出培养基碎屑。 9. 打开接种瓶
3、瓶口, 将孢子悬浮液全部倒入接种瓶 中,注意不要倒在瓶口处,然后重新组装好接种瓶及接种皮管。 10. 制备完毕关闭洁净台,出洁净室,符合人流、 物流进出程序。 物料指标 物料编 号 物 料名称 投产数 量 06010 13 纯 化水 150-20 0ml - 子 斜面孢子 4 支 一级种子发酵培养 实际培养参数控制 培养参数控制 养时间温压气压力气流量拌时间 8 小时 左右 7 度.06MPa .1MPa 0m*3/h - 镜检 镜检步骤 1. 取样 打开蒸汽阀先灭菌,然后关蒸汽阀,打开 取样阀取样。取样完毕后关阀,再次打开蒸汽阀灭菌,关闭。 2 用载玻片沾取一薄层发酵液,加热以使发酵液固 定
4、在载玻片上, 然后滴加美兰溶液进行染色,在显微镜下观察目 的菌的菌丝形态。 3. 配制酚红肉汤培养基, 在培养基中加入发酵液在 恒温箱中进行培养。 一定条件下观察培养基颜色的变化来判断是 否染菌。 4. 另取样用粘度计测粘度。 一级种子镜检 1. 正常标准 菌丝形态: 实团,网团,边散,伸展,原生质充足。 无菌度 : 正常,即无杂菌污染。 3. 实例 批号 21011097 一级种子镜检生长指标 生 长时间 菌 丝形态 菌 丝数量菌情况 2 2h 小 网、分支短 量 少常 3 0h 网 团、实团 量 一般常 3 8h 网量 团、较伸展较多常 4 6h 实 团、边散 量 多常 5 1h 实 团、
5、伸展 量 多常 二级种子的培养 进料状况 表 4 二级种子培养进料状况 物 料编号 物 料名称 投 料量 生 产单位 批 号 0 101009 淀 粉 1 50Kg 卫 辉玉兰公 司 0 609014 0 101006 玉 米粉 4 0 Kg 自 制 0 907001 0 101007 豆 饼粉 1 00 Kg 自 制 0 907009 0 101003 蛋 白胨 2 5 Kg 滑 云东升公 司 0 906013 0 101002 硫 酸铵 4 Kg 中 石化岳阳 公司 0 906004 0 101004 硝 酸钾 0 .4 Kg 交 城晋盛公 司 0 903002 0 101001 轻 质碳
6、酸钙 2 5 Kg 焦 作兰冠耀 公司 0 905003 0 103272 氯 化钴 3 0 g 上 海先金公 司 0 90309 0 101016 泡 敌 0 .6L 开 封树脂厂 0 905013 0 601007 饮 用水 3 .2t 二级种子镜检 1. 正常标准 菌丝形态: 网团,边散,伸展,连片、原生质充足。 无菌度 : 正常,即无杂菌污染。 2. 实例批号 21011097 表 5 二级种子镜检生产指标 生 长时间 菌 丝形态 菌 丝数量 杂 菌情况 4 h 散 网、连片 量 多 正 常 8 h 大 网片、伸展 量 多 正 常 1 2h 大 网片、伸展 量 多 正 常 1 6h 大
7、 网片、伸展 量 多 正 常 实际培养参数控制 表 6 二级培养参数控制指标 养时间温压气压力 空 气流量拌时间 4 小时 左右 7 度.03MPa .7MPa 1 70m*3/h - 三级种子发酵 进料状况 表 7 三级种子培养进料状况 物 料编号 物 料名称 投 料量 生 产单位 批 号 0 101009 淀 粉 5 50Kg 卫 辉玉兰公 司 0 609004 0 101006 玉 米粉 1 20Kg 自 制 0 907001 0 101007 豆 饼粉 3 60Kg 自 制 0 907009 0 101003 蛋 白胨 6 0Kg 滑 云东升公 司 0 906013 0 101002
8、硫 酸铵 1 0Kg 中 石化岳阳 公司 0 906004 0 101004 硝 酸钾 1 Kg 交 城晋盛公 司 0 903002 0 101001 轻 质碳酸钙 7 5Kg 焦 作兰冠耀 公司 0 905003 0 103272 氯 化钴 1 20 g 上 海先金公 司 0 90309 0 102034 淀 粉酶 1 50g 北 京东升公 司 0 904003 0 101016 泡 敌 3 L 开 封树脂厂 0 905013 三级种子镜检 1. 正常标准 菌丝形态:散网、伸展,连片、量多。 无菌度 : 正常,即无杂菌污染。 2. 实例批号 301/327 表 9 三级种子镜检生产指标 生
9、长时间 菌 丝形态 菌 丝数量 杂 菌情况 3 h 散 网、连片、伸 展 量 多 正 常 7 h 大 片散网、伸展 量 多 正 常 1 1h 大 片散网、伸展 量 多 正 常 1 5h 大 片散网、伸展 量 多 正 常 提炼车间生产概况和流程 提炼组的任务是将庆大霉素从来自发酵车间的发 酵液中提炼出来, 同时也负责本车间低单位稀氨洗脱液和成盐炭 脱车间活性炭滤饼中庆大霉素的提取,并最终得到含庆大霉素的 洗脱液,送入浓缩岗位浓缩。 庆大霉素与其他物质的分离采用阳离子交换树脂, 这是基于庆大霉素的弱碱性实现的。用浓氨解析, 阴离子交换脱 色。 氨回收罐 回收 低单位收集罐 树脂分离器 酸化罐 洗脱
10、液贮灌 漂洗罐 阳离子交换柱 发酵液 稀氨洗涤生物 效价低于200u/ml 阳串阴 测定生物效价 高于 600u/ml 低 于 6 0 0 u / m l 回收 , 套用下一批 回收 套用下一批 浓氨 洗脱 脱色 除杂质 分离树脂 复合物 提炼车间流程图 酸化、中和 加树脂吸附 发酵液 分离 阳离子交 饮用水 疏松 稀酸洗 0.05M盐酸、0.02M氯化铵 除钙离子、镁离子 纯化水冲洗 除氯离子 0.08-0.12M稀氨洗 1:20VVM-1:40VVM 除蛋白质等杂质 调节pH 值至碱性 pH8.5-9 4.5%-5.3%浓氨 洗脱 解析 收集 旋光效价 1000u/mL 经阳串阴管道进入阴
11、离子交换柱 9500-12000L 酸洗、碱中和 再生树脂 低单位洗脱液贮罐 旋光效价 200-1000u/mL 3000-4000L 作阳离子交换柱洗脱 回收、氨捞(再吸附 ) 酸化罐树脂分离器 饱和树脂 漂洗柱 漂洗 高单位洗脱液脱色 解析完毕后水洗使树脂再生 压回酸化罐旁的树脂计量 需要时 通空气 赶气泡 加入浓氨水 洗脱液贮罐送入浓缩车 阴离子交换树脂再 含部分庆大霉素的洗脱液 流速 1:100-150VVM 提炼车间流程简介 酸化、中和 操作方法 1. 备好酸化用盐酸、中和用10mol/LNaOH,压 备用树脂入计量槽; 2. 接发酵液 20 吨左右入酸化罐, 缓缓加入盐酸(约 1.
12、5 吨) ,调 pH1.4-3.0,加入泡敌消沫,计量体积。该过程目 的在于裂解菌丝体,释放其中的庆大霉素,以提高收率。 3. 加适量饮用水稀释(20% 左右) ,用 10mol/LNaOH中和 pH6.4-6.8; 4. 按 6.5 万 u/mL(50吨、45 吨罐)或 6 万 u/mL (30 吨、65 吨罐)计量加入732 阳离子交换树脂。 30min后 复测 pH ,控制在 6.4-6.8。交换吸附 5-8h 。取样送化验组测 生物效价。 庆大霉素的洗涤 操作方法 1. 配制 0.5 mol/L HCl与 0.2 mol/LNH4Cl混 合液, 0.08-0.12mol/L的稀氨。 2
13、. 每柱装饱和树脂1100-1500L,用饮用水及空 气疏松树脂并用饮用水赶走气泡。3. 通入稀酸洗涤液至无钙、 镁离子,完成后用饮用水冲洗至无Cl- , 再用 0.08 0.12mol/L 稀氨水洗至 pH 8.5 9.0 。 庆大霉素的洗脱和脱色 操作方法: 1. 配制 4.5-5.3%的浓氨。 2. 用纯化水疏松并冲洗树脂中氮根。 3. 用 4.5%-5.3%浓氨水解吸至洗脱液旋光效价 控制在 1000 u/mL。 4. 第 2 罐透光度低于70% 时,用 2mol/L HCl 和 2mol/L NaOH对 711 脱色树脂进行再生,使其可以循环使 用。注意洗脱收率在98 以上。 5树脂
14、吸率的计算公式:树脂吸率(% )树脂 投量/ 总回收树脂 洗脱收率 = 洗脱总亿发酵总亿 庆大霉素的洗脱和脱色 操作方法: 1. 配制 4.5-5.3%的浓氨。 2. 用纯化水疏松并冲洗树脂中氮根。 3. 用 4.5%-5.3%浓氨水解吸至洗脱液旋光效价 控制在 1000 u/mL。 4. 第 2 罐透光度低于70% 时,用 2mol/L HCl 和 2mol/L NaOH对 711 脱色树脂进行再生,使其可以循环使 用。注意洗脱收率在98 以上。 5树脂吸率的计算公式:树脂吸率(% )树脂 投量/ 总回收树脂 洗脱收率 = 洗脱总亿发酵总亿 庆大霉素的成盐碳脱 成盐 配置人员穿好防护用品,先
15、抽入总体积2/3 的纯 化水,在夹层冷却下再缓慢抽入1/3 的浓硫酸,搅拌均匀,冷 却应在 0.5 小时以上。上批装塔的浓缩液与本批浓缩液混合后压 入成盐炭脱罐。在不断搅拌及夹层通冷却水冷却下缓慢加入 6mol/L的硫酸液,调pH 至 5.0-5.8,当 pH 在 5.0 左右时取 样检测。 炭脱 成盐液温度降到45 以下时, 加入 767 型针用活 性炭进行炭脱,加炭量为成盐液体积的5左右,在搅拌及夹层 通蒸汽加热下,升温至65 5,保温 45min后,压缩。第一 遍炭脱液由储罐压入成盐炭脱罐调pH 在 5.3 左右,同法进行第 二遍炭脱。滤饼用预热的纯化水清洗至尾样在500 u/mL以下, 浓缩至比重 1.10-1.13, 套用于下一批。 炭脱脱率在 95 以上。 庆大霉素的炭脱流程图 硫 酸 储 罐 成 盐 碳 脱 罐 压 滤 器 炭 脱 液 储 罐
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