动物解剖生理实验指导..pdf
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1、实 验 内 容 实验一、显微镜的使用、组织切片的显微观察 实验二、犬骨骼的观察、骨骼辨认测试 实验三、血液的凝固 实验四、红细胞的脆性试验 实验五、蛙心活动观察 实验六、红细胞计数 实验七、反射弧分析及脊髓反射活动观察 实验八、胃肠运动观察和小肠吸收观察 1 实验一显微镜的构造、使用和保养 实验目的 了解显微镜的基本构造,掌握显微镜的使用方法和保养方法。 材料设备 显微镜、组织切片、擦镜纸等。 方法步骤 (一)机械部分 1、镜筒 2、物镜转换器 3、镜臂 4、调焦器 5、载物台 6、镜柱 7、镜座 (二)光学系统部分 光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置 (反光镜、聚光器和光圈等) 。
2、1、目镜: 常见的有5、 10和 15(表示放大倍数)的目镜,可根据 不同的需要选择使用,最常使用的是10目镜。 2、物镜: 常用物镜的放大倍数有10、 40和 100等几种。一般将8 或 10的物镜称为低倍镜(而将 5以下的叫做放大镜) ;将 40或 45的称为 2 高倍镜 ;将 90或 100的称为 油镜 (这种镜头在使用时需浸在镜油中)。 图 1-3 物镜的性能参数及工作距离 C 线为盖玻片的的上表面,10 物镜的工作距离为7.63mm ; 40 物镜的工作距离为0.198mm ;10/0.25 、40/0.65 、100/1.25表 示镜头的放大倍数和数字孔径。160/0.17表示镜筒
3、长度为 160mm ,盖玻片厚度为0.17mm 。 3、聚光器: 调节光线的强弱,升高聚光器可使光线增强,反之则光线变弱。 光圈能控制进入聚光器的光束大小的可变光阑。以调节光线的强弱。在光圈 的下方常装有滤光片框,可放置不同颜色的滤光片。 4、反光镜: 反光镜有两个面,一面为平面镜,另一面为凹面镜,凹面镜有 聚光作用,适于较弱光和散射光下使用,光线较强时则选用平面镜。 二、光学显微镜的使用方法 ()准备 将显微镜平稳地放在身前的实验桌上,略偏左,使镜臂对着身体,镜筒向前。 (二)对光 转动转换器, 使低倍镜对准通光孔,转动粗调节器, 使低倍镜前端距载物台约 1-2 厘米的距离。 将光圈放大;
4、让左眼朝目镜里注视,同时用手将反光镜转向光源;调节反光镜, 直至从目镜里看到一个白色明亮的圆形视野。 (三)低倍镜观察 将玻片标本放在载物台上,使待检查部分位于通光孔中心,用弹簧夹片压住载 玻片两端。 两眼从侧面注视,将物镜降至距标本约0.5 厘米时停止。 用左眼朝目镜里观察,同时转动粗调节器,缓慢上升镜筒, 直到视野中出现物 象,再用细调节器调节。 3 (四)高倍镜观察 先将低倍镜下找到所需观察的物象,把要进一步放大的部位移到视野正中央。 转动转换器, 使高倍镜到位。调节反光镜和光圈,使光照明亮,再微微调节细 调节器,直到物象清晰。 (五)显微镜复原 用擦镜纸揩净目镜和物镜,用清洁纱布揩净镜
5、体。再转动转换器, 把两个物镜偏 到两旁,并将镜筒下降,然后将显微镜平稳地放入镜箱内保存。 4 实验二动物主要组织的显微镜识别 实验目的 掌握单层扁平上皮、单层柱状上皮、 单层立方上皮、 疏松结缔组织、 骨骼肌、 平滑肌、神经元的结构特点。 材料设备 显微镜、单层扁平上皮、单层柱状上皮、单层立方上皮、疏松结缔组织、骨 骼肌、平滑肌、神经组织切片及相关的图。 方法步骤 1、取镜与放置 移动显微镜时,要一手拿镜臂,一手托镜座,将显微镜放置在前方桌面上。 2、打开光源,上升聚光镜,开大孔径光阑。 3、观察 将被检标本置于载物台上,用压片夹夹住, 旋转最低倍数物镜观察。 调节粗调焦螺旋,使载物台缓缓上
6、升,直至物镜镜头接近标本。这时,一边 使用目镜观察,一边调节粗调焦螺旋使载物台下降,直至视野中看到物像为止。 移动载片位置, 使物象处于视野的中心,此时再调节细调焦螺旋以增加物象 的清晰度,可以调节聚光镜和孔径光阑,使光线强弱适中,以便于观察。 转动物镜转换器,换用高倍镜头。用细调焦螺旋调节,换用高倍镜后,可调 节聚光镜和孔径光阑以增加亮度。 观察更细微结构必需使用油镜时,则在制片上滴一滴香柏油。油镜使用完后, 要及时地用蘸有乙醚的擦镜纸把油镜镜头擦拭干净。 4. 收显微镜 关闭光源; 下降聚光镜; 关闭孔径光阑; 转动物镜转换器,使之处于最低倍 数物镜下。 显微镜保持清洁。显微镜的光学部分只
7、能用专门的擦镜纸擦拭。 按实验室的要求,做好显微镜的使用记录等。 实验结果 1复层上皮组织 2平滑肌 3. 神经组织 4. 心肌切片 5. 硬骨组织 6. 软骨组织 5 实验三犬全身主要骨、关节、骨性标志的识别 实验目的 在犬骨骼标本上识别各部位骨骼及骨性标志。 材料设备 犬骨骼标本。 方法步骤 1 脊柱骨的组成:颈椎、胸椎、腰椎、荐椎、尾椎的形态与连结。 2 胸廓的组成:胸椎、肋骨和胸骨。 3 骨盆腔构造:背侧荐骨、侧面髋骨、后侧坐骨、腹侧耻骨组成。 4 四肢骨组成及分布:骨骼名称、形态、关节名称、关节角度。 5 骨性标志:肩胛冈、大结节、髋结节、大转子、坐骨结节。 实验结果 绘制犬全身主要
8、骨、关节和骨性标志的图示。 技能考核 在标本和活体上识别主要骨、关节及骨性标志。 * 骨骼辨认测试 6 实验三血液凝固 实验目的 以血液凝固时间作为指标,了解对血液凝固影响的因素,加深对生理止血过 程的理解。 实验原理 血液凝固是一个酶的有限水解激活过程,可分为三个环节: (1)凝血酶原激 活物的形成;( 2)凝血酶原激活为凝血酶; (3)纤维蛋白的形成。在此过程中有 多种凝血因子和Ca 离子的参与。根据凝血过程起动时激活因子来源不同,可将 血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性激活途径是指参与血液 凝固的所有凝血因子在血浆中,外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进 入血管后,
9、与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。 实验药品和器材 生理盐水,液状石蜡、草酸盐、柠檬酸盐、肝素(8 U/ml ) 。注射器,试管6 支,小烧杯2 个,试管架,竹签1 束 (或细试管刷 ),秒表。 实验方法与步骤 1. 采血(动物不限) 。 2. 准备试管。 试管 1 不加任何处理(对照管) 试管 2 用液状石蜡润滑整个试管内表面 试管 3 放少许脱脂棉 试管 4 加草酸钾12 ml 试管 5 加柠檬酸盐12 ml 3. 每管加入血液1-2 ml。将多余的血盛于小烧杯中,并不断用竹签搅动直 至纤维蛋白形成。 4. 记录凝血时间每个试管加血1-2 ml 后,即刻开始计时,每隔壁15 s
10、倾 斜一次, 观察血液是否凝固,至血液成为凝胶状不再流动为止,记录所经历的时 间。 4、5 号试管加入血液后,用拇指盖住试管口将试管颠倒两次,使血液与药 物混合。 5. 如果加草酸钾和柠檬酸盐的试管不出现血凝,可再向两管内分别加入 7 0.025 mol ?L-1 的 CaCl2溶液 23 滴,观察血液是否发生凝固 ? 注意事项 1. 采血的过程尽量要快,以减少计时的误差。对比实验的采血时间要紧接 着进行。 2. 判断凝血的标准要力求一致。一般以倾斜试管达45 度时,试管内血液不 见流动为准。 3. 每支试管口径大小及采血量要相对一致,不可相差太大。 实验结果 将实验结果及各种条件下的凝血时间
11、,并进行比较、 分析解释产生差异的原 因。 思考题 1.血液凝固的机制及影响血凝的外界因素? 2.为什么有几管不凝?为什么有几管比对照组管凝血时间长?为什么有几 管比对照管凝血时间短? 8 实验四红细胞脆性的测定 实验目的 学习测定红细胞渗透脆性的方法,理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形 态与功能的重要性。 实验原理 正常红细悬浮于等渗的血浆中,若置于高渗溶液内,则红细胞会因失水而皱 缩;反之,置于低渗溶液内,则水进入红细胞,使红细胞膨胀。如环境渗透压继 续下降,红细胞会因继续膨胀而破裂,释放血红蛋白,称之为溶血。红细胞膜对 低渗溶液具有一定的抵抗力,这一特征称为红细胞的渗透脆性。红细胞膜对
12、低渗 溶液的 抵抗力越大 ,红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血,即红细胞 渗透脆性 越小 。将血液滴入不同的低渗溶液中,可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大 小。开始 出现溶血现象的低渗溶液浓度,为该血液红细胞的最小抵抗力 ;出现 完 全溶血 时的低渗溶液浓度,则为该血液红细胞的最大抵抗力 。 生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液;而将能维持红细胞正 常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液(如 1.99%的尿素溶液),但等张溶液一定是等渗溶液。 实验药品 1%肝素, 1%氯化钠溶液, 2%氯化钠溶液,蒸馏水。 仪器与器材 10 ml 小试管,试管架,滴管,
13、1 ml 移液管, 2 ml 移液管。 实验方法与步骤 1.溶液配制:取11 个小试管,配制出11 种不同浓度的氯化钠低渗溶液。 不同浓度的NaCL 溶液配制 试管号 试液 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1%NaCl/ml 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 2%NaCl 2 蒸馏水 /ml 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 0 NaCl 浓度 /% 0.7 0.65 0.6 0.55 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 2 2.制备抗凝血:不同动物采血方法各有所异,但
14、多采用末梢血,将血滴在有 1%肝素(或柠檬酸盐)的表面皿上,混匀(1%肝素 0.1 ml 可抗 10 ml 血 )。 9 3.加抗凝血: 用滴管吸取抗凝血, 在各试管中各加一滴,轻轻摇匀, 静置 0.5 1 h。 4.观察结果:根据各管中液体颜色和浑浊度的不同,判断红细胞脆性。 未发生溶血的试管:液体下层为大量红细胞沉淀,上层为无色透明,表明 无红细胞破裂。 部分红细胞溶血的试管:液体下层为红细胞沉淀,上层出现透明淡红(淡 红棕)色,表明部分红细胞已经破裂,称为不完全溶血。 红细胞全部溶血的试管:液体完全变成透明红色,管底无红细胞沉淀,表 明红细胞完全破裂,称为完全溶血。 实验结果 报告该实验
15、动物红细胞的最小渗透抵抗力和最大渗透抵抗力。将全班的结果 加以统计, 并用平均值标准差表示。讨论如何通过渗透脆性特征判断机体的健 康状况。 注意事项 小试管要干燥,加抗凝血的量要一致,只加一滴。 混匀时,轻轻倾倒1 2 次,减少机械震动,避免人为溶血。 抗凝剂最好为肝素,其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。 配制不同浓度的NaCl 溶液时应力求准确、无误。NaCl 溶液的浓度梯度可根 据动物的实际情况适当进行调整。 思考题 1.红细胞的形态与生理特征有何关系? 2.根据结果分析血浆晶体渗透压保持相对稳定的生理学意义。 3.输液时应注意的事项。 实验五蛙心活动观察 实验目的 观察滴加乙酰胆碱、肾上腺素
16、对心脏运动的影响。 实验原理 10 心脏的特殊传导系统具有自动节律性,但各部分的自动节律性高低不同。两 栖类动物的心脏起搏点是静脉窦( 哺乳动物的是窦房结) 。 正常情况下, 静脉窦(窦 房结)的自律性最高,能自动产生节律性兴奋,并依次传到心房、房室交界区、 心室, 引起整个心脏兴奋和收缩,因此静脉窦(窦房结)是主导整个心脏兴奋和 搏动的正常部位, 被称为正常起搏点; 其他部位的自律组织仅起着兴奋传导作用, 故称之为潜在起搏点。 实验材料 蛙或蟾蜍。任氏液、1:10000 肾上腺素、 1: 10000 乙酰胆碱。 仪器与器械 蛙板,蛙类常用手术器械一套,蛙钉,玻璃分针,秒表,滴管。 实验方法与
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