迷迭香吸嗅对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马内5-ht和gaba含量的影响.pdf
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1、 分类号: 密级: U D C : 编号: 学 位 论 文 迷迭香吸嗅对血管性痴呆大鼠学习记忆及海迷迭香吸嗅对血管性痴呆大鼠学习记忆及海 马内马内 5 5- -HTHT 和和 GABAGABA 含量的影响含量的影响 The Effect of Rosemary Treatment on Learning and Memorys Improvement and content of 5-HT and GABA of Hippocampus through Olfactory Pathway in VD Rats 窦窦 云云 龙龙 指导教师姓名 高晓平 副教授 安徽医科大学第一附属医院康复科 李光
2、武 副教授 安徽医科大学神经生物研究所 申请学位级别 硕士 专 业 名 称 康复医学与理疗学 提交论文日期 2013-3-19 论文答辩日期 2013-5-22 学位授予单位和日期 安徽医科大学 答辩委员会主席 评 阅 人 2013 年 05 月 安徽医科大学安徽医科大学 Anhui Medical University 硕士学位论文硕士学位论文 迷迭香吸嗅对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马内 5-HT 和 GABA 含量的影响 The Effect of Rosemary Treatment on Learning and Memorys Improvement and content of 5
3、-HT and GABA of Hippocampus through Olfactory Pathway in VD Rats 作者姓名 窦云龙 指导教师 高晓平 副教授 安徽医科大学第一附属医院康复医学科 李光武 副教授 安徽医科大学神经生物研究所 学科专业 康复医学与理疗学 研究方向 脑卒中的基础及临床康复研究 论文工作时间 2011 年 10 月至 2013 年 3 月 学位论文原创性声明 本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。 与我一同工作的同志对本研究所做的
4、任何贡献均已 在论文中作了明确说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 日 期: 学位论文使用授权声明 本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定:学校有权保留 学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版, 有权允许 论文进入学校图书馆被查阅,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索, 有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交中国博士 学位论文全文数据库 、 中国优秀硕士学位论文全文数据库和中国学位论文 全文数据库中全文发表,并可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出版, 并同意编入 CNKI中国知识资源总库 ,在中国博硕士学位论文评价数据库 中使
5、用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。 学位论文作者签名: 导师签名: 日期: 日期: 1 目 录 英文缩略词表 4 中文摘要 5 英文摘要 7 1 前言 . 9 1.1 血管性痴呆的概况 9 1.2 芳香疗法的研究进展 9 1.3 嗅觉通路的概况 . 10 1.4 VD 大鼠造模和学习记忆观察的方法 12 1.5 海马与学习记忆 . 13 1.6 神经递质 5-HT 和 GABA . 14 2 材料与方法 15 2.1 实验动物 . 15 2.2 主要试剂与器材 . 15 2.2.1 试剂 15 2.2.2 器材 15 2.2.3 主要溶液的配制 16 2.3 动物模型制备与
6、分组 . 16 2.3.1 实验动物模型的建立 16 2.3.2 模型大鼠水迷宫筛查 17 2.3.3 动物模型的分组 18 2 2.4 给药方式 . 18 2.5 神经行为学观察 . 19 2.6 形态学观察 . 19 2.6.1 石蜡切片 19 2.6.3 免疫组化 21 2.6.4 细胞计数 22 2.7 统计学分析 . 22 3 结果 22 3.1 水迷宫实验结果 . 22 3.1.1 术后 4 周水迷宫的结果 22 3.1.2 用药后水迷宫结果 23 3.2 HE 染色结果 24 3.3 免疫组化结果 . 24 4 讨论 25 4.1 慢性脑缺血对学习记忆的影响 . 25 4.2 学
7、习记忆障碍的神经递质紊乱机制 . 26 4.3 嗅觉给药通路 . 27 4.4 芳香治疗的精油吸嗅 . 28 4.5 迷迭香吸嗅改善 VD 大鼠学习记忆 29 5 结论 . 30 参考文献 30 3 附录 35 本人简历 41 致谢 43 综述 44 安徽医科大学硕士学位论文 4 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 2VO 2-vessel occlusion 双血管阻断法 VD vascular dementia 血管性痴呆 5 -HT 5- hydroxytryptamine 五羟色胺 GABA gamma-aminobutyric acid -氨基丁酸 HE hematoxyli
8、n-eosin 苏木精-伊红 AD Alzheimers Disease 阿尔茨海默病 NMDA N-methyl-Daspartic acid N-甲基-D-天冬氨酸 CCA common carotid artery 颈总动脉 PBS Phosphate Buffer Solution 磷酸盐缓冲液 ASP Aspartic Acid 天冬氨酸 Glu Glutamate 谷氨酸 CNS central nervous system 中枢神经系统 AMPA alpha-amino-3-hydroxy-5-rnethyliso xazole-4-propionic acid -氨基-3-羧基
9、-5-甲基异恶 唑-4-丙酸 LTP 1ong-term potentiation 长时程增强 Ach acetylcholine 乙酰胆碱 AchE acetylcholinesterase 乙酰胆碱酯酶 ChAT choline acetyltransferase 乙酰胆碱转移酶 DA dopamine 多巴胺 安徽医科大学硕士学位论文 5 迷迭香吸嗅对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马内 5-HT 和 GABA 含量的影响 中文摘要 目的 本实验采用改良的双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,观察迷迭香吸 嗅后血管性痴呆大鼠学习记忆功能的改善情况;并通过免疫组化法检测迷迭香吸 嗅后实验大鼠
10、海马内 5-HT 和 GABA 含量的变化情况,初步探讨迷迭香吸入的作 用机制及临床应用价值。 方法 1. VD 大鼠模型制备: 将健康的 SD 大鼠用改良的 2VO 法造成 VD 模型, 即先结扎左 侧颈总动脉,1 周后用同样的方法结扎右侧颈总动脉。 2. 模型大鼠水迷宫筛查:手术后 4 周时,初步筛选并存活的模型大鼠 16 只,正 常大鼠和假手术大鼠各 8 只。 通过 Morris 水迷宫测定 24 只大鼠的空间学习记忆成 绩,记录定位航行实验中大鼠找到安全平台的时间(即逃避潜伏期)和空间探索 实验中大鼠穿越原平台所在位置的次数 (即穿台次数) 为实验指标, 时间均以 120s 为限。 2
11、.分组及给药:将造模成功的大鼠随机分为模型组和迷迭香组,另设正常组和假 手术组对照。 (1) 迷迭香组 (n=8) : 每天上、 下午分别予以 1%浓度的迷迭香吸嗅, 每次 30min; (2)VD 模型组(n=8) :使用蒸馏水替迷迭香精油,其他同迷迭香组; (3)假手术组(n=8):假手术组分离出 2 侧颈总动脉但不予结扎,余实验步骤 同 VD 模型组; (4)正常组(n=8):不做任何手术处理,余实验步骤同模型组。 3. 神经行为学和形态学观察 在用药后 5 周时,再次使用 Morris 水迷宫测定大鼠的空间学习记忆成绩,水迷 安徽医科大学硕士学位论文 6 宫实验的方法同前。在神经行为学
12、实验结束后,将全部大鼠断头取脑,制作石 蜡切片,进行 HE 染色观察大鼠海马区的病理形态学变化,再用免疫组化法观察大 鼠海马区 5-HT 和 GABA 含量的变化情况。 结果 1.术后 4 周时, 手术组的逃避潜伏期明显长于正常组, 差异有统计学意义(P0.05); 穿台次数显著少于正常组,差异有显著统计学意义(P0.05);假手术组和正常组 相比,潜伏期与穿台次数均无明显差异(P0.05) 。 2.用药 5 周时,迷迭香吸嗅组的逃避潜伏期短于模型组,差异有统计学意义 (P0.05);穿台次数显著多于模型组(P0.05)。模型组大鼠的逃避潜伏期明显 长于正常组,差异有显著统计学意义(P0.05
13、);穿台次数显著少于正常组,差异 有显著统计学意义(P0.05)。 3.免疫组化结果中,模型组的 5-HT 和 GABA 的阳性神经元较正常组明显减少 (P0.05),与模型组比较,迷迭香吸嗅组的阳性神经元数明显增多(P0.05)。 结论结论 1.改良的 2VO 法建立大鼠 VD 模型,对大鼠脑组织损伤较小且会出现明显的学习记 忆障碍,符合 VD 临床的特点。 2.迷迭香吸嗅对 VD 大鼠的学习记忆障碍有明显的改善作用。 3.迷迭香改善VD模型大鼠的学习记忆能力可能与增加海马内5-HT和GABA的含量有 关。 关键词关键词 迷迭香 血管性痴呆 学习记忆 5-羟色胺 -氨基丁酸 安徽医科大学硕士
14、学位论文 7 The Effect of Rosemary Treatment on Learning and Memorys Improvement and content of 5-HT and GABA of Hippocampus through Olfactory Pathway in VD Rats Abstract Objective In this study,we established rat VD model after chronic cerebral ischemia by modified ligaturing bilateral common carotid ar
15、tery. In order to study the effect of rosemary treatment on learning and memory impairment caused by VD through olfactory pathway. On the other hand, in order to test the changes of 5-HT and GABA in the hippocampus of VD rats after treated by rosemary with immunohistochemistry methods. Primarily to
16、study the effect and mechanism and clinical application of rosemary treated on learning and memory impairment caused by VD through olfactory pathway. Methods 1.Preparing VD rat model. Establishing rat VD model by modified ligaturing bilateral common carotid artery, namely as the left common carotid
17、occlusion with a week later ligatured the right one. 2.Model rat screened by Morris water maze. 4 weeks after the surgery ,there were 16 model rats, normal rats and sham operation rats were both 8. The learning and memory capacity of 32 rats was tested by Morris water maze .In this test ,the escapin
18、g latency of the rats to find the hidden platform in orientation navigate test and the numbers of rats crossing the former platform in spatial probe test were recorded .The time was limited within 120 seconds . 3.Dividing rats and Drug delivery. Modele rats were randomly divided into model group and
19、 rosemary group, and the normal group and the sham sham operation group were separated to control. (1) rosemary group(n=8):this group were treated with eugenol(the consistence is 1%) 3 days after surgery twice a day, and each time lasted 30 minutes . (2) VD model group (n =8): rosemary essential oil
20、 were replaced by distilled water, Then the rats in this group get the same procedures as the rosemary 安徽医科大学硕士学位论文 8 group.(3) sham operation group (n =8): the rats in this group submitted to the bilateral carotid arteries were Isolated but not ligatured, Then the experiment steps were same with VD
21、 model group;(4) normal group (n=8): the rats were not gave surgery and treated with rosemary .Then the rats in this group also got the same procedures as the VD group. Result 1. 4 weeks after surgery, there was significant differences between operation group and normal group in the latency and the
22、times through platform(P0.05). There was unsignificant differences between sham operation group and normal group in the latency and the times through platform (P0.05). 3. 5 weeks after treatment, there was significant differences between rosemary group and VD group in the latency and the times throu
23、gh the former platform (P0.05). Aslo compare to normal control group,VD group had significant differences in the latency and the numbers through the former platform (P0.05). 4. In the results of immunohistochemistry ,compare to normal control group, in the hippocampus of VD group rats were significa
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