Roche-LightCycler-480-中文操作说明要点.pdf
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1、LightCycler ? 480 中文操作说明 罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门 February 2008 LightCycler 480 中文操作說明 2 目录 一. 启动机器与软件3 二. 软件设定 - 开启新实验5 三. 样品编辑9 四. 结果分析12 五. 报告18 六. 数据转移至其它计算机 (数据输出与输 入) 19 七. 使用者管理19 LightCycler 480 中文操作說明 3 一 启动机器与软件 启动机器 1. 机器主开关位于机器右后方。 2. 机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转 变成稳定橘色灯,警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约
2、三分半钟 ),表 示机器已经启动完成。 左警示灯右警示灯机器状态 橘 *闪烁* 橘 *闪烁* 正在初始化 绿橘 机器启动完成 96/384孔盘还未放入 绿橘 *闪烁* 96/384 孔盘正在放入中 绿绿 机器启动完成 96/384 孔盘已经放入 绿 *闪烁* 绿 *闪烁* 实验进行中 LightCycler 480 中文操作說明 4 3. 按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成之 96 或 384 孔 盘。放置完成后,左右两警示灯都呈现绿色。 启动软件 1. 开启计算机,并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。 User name: OPERATOR Password: LC480
3、 2. 开启 LightCycler 480 软件,并输入正确的使用者与密码。 LightCycler 480 中文操作說明 5 二软件设定 - 开启新实验 设定新实验 1. 软件开启后,会进入主画面。点选“ New Experiment” 。 2. 出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话,点选画面右边的 按钮。 LightCycler 480 中文操作說明 6 设定实验 若要套用设定好的实验步骤 (Template),请跳至 6.。 1. 在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Format。选项包含 : 另外可再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。 2. 输
4、入反应体积 : 96 well plate 范围为 10-100 ul,而 384 well plate 范围 为 5-20 ul。 LightCycler 480 中文操作說明 7 3. 设定实验步骤 (Program) 设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。利用 +与 增加或 删除步骤。 设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR) program设定成 Quantification,而 Melting Curve
5、 program 设 定成 Melting Curve。 4. 设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同) 点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤,请根据产品说明 书来设定,利用 +与 增加或删除步骤。需要设定的参 数包含Target () 目标温度, Acquisition Mode (荧光侦测模 式),Hold (hh:mm:ss) 停留时间。 Ramp Rate (/s) 为升降温速 度,范围如下: Ramp Rate (/s) Heating up Cooling down 96-well Block 1.0 4.4 /s 1.0 2.2 /s 384-well
6、 Block 1.0 4.8 /s 1.0 2.5 /s 若设定温度低于 50,请把 Ramp Rate 调整成 1.5/s (96 well) 或 2.0/s (384 well)。 LightCycler 480 中文操作說明 8 5. 将实验步骤储存成Template以便下次进行套用。点选左下角 “ Save As Template ” 即可把此步骤储存起来。 6. 若要进行套用时,请直接点选窗口左下角 “ Apply Template” ,选择欲套用之实验步骤 即可。 7. 设定完成后点选 “ Start Run” 开始进行实验。 8. 跳出档案储存窗口,请输入欲储存之文件名称。 实验
7、进行中会进入另一个 Data窗口,窗口下方按键功能如下: End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。 + 10 Cycles : 实时增加循环数目。 Abort Run: 马上结束此实验,请注意,若按此键,则此次实验的结 果将不储存。 LightCycler 480 中文操作說明 9 三样品编辑 将样品分群 1. 点选窗口左边的“ Subset Editor ” 。 2. 点选 “ New” 新增新的群组,并将其命名。 3. 利用鼠标选取此群组之样品位置,点选窗口右下角“ Apply” ,此时 被选取的样品位置会呈现实心的蓝色,如下图。 4. 以此方式依
8、序将所有样品群组编辑完毕。 样品必须分群才能够独立分析,但是样品是否分群并不影响样品 的 Cp 值。 LightCycler 480 中文操作說明 10 编辑样品名称 1. 点选窗口左边的“ Sample Editor” 。 2. 输入每个位置之样品名称 (Name)与重复 (Repl. Of)。 3. 若要更快速输入,可直接在左边的图上点选欲编辑之样品: 若 A1, A2 与 A3 为三重复,在 A2 与 A3 Repl. Of 字段上都填上 A1 即为三重复。 在编辑过程中,可利用Ctrl+C复制文字, Ctrl+V 贴上文字。 LightCycler 480 中文操作說明 11 4. 根
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