动物细胞培养和核移植技术.pdf
《动物细胞培养和核移植技术.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《动物细胞培养和核移植技术.pdf(9页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、专题 2 细胞工程 2.2 动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 教材预览 导言 动物细胞工程常用的技术手段有、等,其中 是其他动物细胞工程常用的技术的基础。 一. 动物细胞培养 1. 动物细胞培养的过程 培养动物所用的细胞大都取自_或出生不久的 _器官或组织。将组织取出来后,先 用_等使组织分散成单个细胞,然后配置成一定浓度的细胞悬浮液 放在培养瓶中的具有一定浓度的细胞悬浮液在培养箱中培养的过程叫做_; 随着细胞生长的和增 殖,培养瓶中的细胞越来越多,需要定期地用_使细胞从瓶壁上脱离下来,配制成细胞悬浮液, 分装到两个或两个以上的培养瓶中培养,这称为_ _。传代细胞中遗传物质没有
2、发生改变的叫做_; 遗传物质发生了改变,并且带有_ 的特点,这种传代细胞叫做_,这种细胞可以_地传代下去。动物细胞的融合除物理和化 学方法诱导融合之外,还常常用到_作为诱导剂。动物细胞融合技术最重要的用途,是制备 _ 思考 :胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么? 提示 :胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用, 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 思考 . 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行 吗? 提示 :用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为 2,当 p
3、H大 于 6 时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为 7.2 8.4 。多数动物细胞培养的适宜pH 为 7.2 7.4 ,胃蛋白酶在此环境中没有活性,而胰蛋白酶在此环境中活性较高,因此胰蛋白酶适宜用于细 胞培养时的消化。 2. 动物细胞培养的条件 一般动物细胞体外培养需要1_2_3_4. _等条件 思考 :为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清? 提示 :血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种, 是细胞合成蛋白质的基本成分,其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成(称为必需氨基酸),必须由培养 液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多
4、种生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰 岛素生长因子等);血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质,能促进细胞的 生长、增殖和贴附。因此 细胞培养时,要保证细胞能够顺利生长和增殖,一般需添加10% 20% 的血清。 3. 动物细胞培养技术的应用 培养动物细胞可以用于检测有毒物质。根据_占全部培养细胞的百分数,可以判断某种物种的毒 性。现在 _已成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。 二. 动物细胞核移植技术和克隆动物 动物核移植是将动物的一个细胞的_, 移入一个已经去掉_中. 使其重组并发育成一个新 的_, 这个新的胚胎最终发育为动物个体。 教学过程 一动物
5、细胞培养 1动物细胞培养的过程 取动物组织块剪碎组织分散成单个细胞原代培养传代培养 原代培养: 从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。初次培养称为原代细胞培养。 传代培养: 将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养, 称为传代培养。 细胞株:原代细胞一般传至10 代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到4050 代, 这种传代细胞为细胞株。 细胞系: 细胞株传代至50 代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培 养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别:细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞
6、的特点,失去接触抑制,容易传代培养 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合 细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性 细胞融合的方法去除细胞壁后诱导原生质体融 合 使细胞分散后诱导细胞融合 诱导方法物理(离心、振荡、电刺激) 化学(聚乙二醇) 物理、化学方法(同左) 灭活的病毒 用途获得杂种植株制备单克隆抗体 思考与讨论 1. 幼龄与老龄动物的组织细胞比较,分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较,哪一种更易于培养?思 考一下,这是什么道理? 提示 :细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系,细胞的增殖能力与供体的年龄有关,幼龄动物细胞 增殖能力强,有丝分裂旺盛
7、,老龄动物则相反。所以,一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细 胞易于培养。同样,组织细胞的分化程度越低,则增殖力越强,所以更容易培养。 2. 为什么动物细胞要分散成单个细胞培养?用酶消化的是什么物质? 提示 :细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养,也可以用细胞群(团)、组织块培养,经传代培养后, 最终都为细胞培养。分散成单个细胞、细胞群(团)后容易培养,细胞所需的营养容易供应,其代谢废物 容易排出;而用大块组织培养时,内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难,因此,这些细胞在体 外长时间的生存和生长就较困难。同时,分散成单个细胞培养,可使得在细胞水平操作的其他技术得以实 现。用酶消化
8、的是细胞间基质,细胞间基质主要成分有胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等 成分。用蛋白酶可使其消化,从而使细胞相互分离。 3. 动物细胞培养要经过脱分化的过程吗?为什么? 提示:脱分化又称去分化,是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。植物的 任何一部分,甚至单个细胞都具有长成完整植株的能力。但要发育成完整植株,必须先脱分化,脱分化的 细胞具有发育成任何组织的能力,然后进行再分化,形成完整植株。植物细胞培养主要用于农林生产中的 作物、苗木育种,快速繁育种苗、培育无病毒植株等,这就要求植物的组织或细胞先进行脱分化。动物细 胞的培养有各种用途,一般而言,动物细胞培养不
9、需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变 窄,失去了发育成完整个体的能力,所以,动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。 要想使培养的动物细胞定向分化,通常采用定向诱导动物干细胞,使其分化成所需要的组织或器官。 4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞? 提示 :成块组织不利培养,分散了做成细胞悬浮液利于培养 5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体? 提示 :不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体 例题 1下列对动物细胞培养的有关正确的是( ) A 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B 动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞
10、分散C 细胞所 谓癌变发生于原代培养向传代培养过程中D培养至 50 代后传代细胞称为细胞株 2下列有关动物细胞培养的叙述,其中错误的是( ) A 用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理,使其 分散成单个细胞C 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离,制成悬浮液D动物细胞培养只能传 50 代左右,所培养的细胞会衰老死亡。 3动物细胞工程技术的基础是( ) A 动物细胞融合 B 胚胎移植 C 动物细胞培养 D 核移植 答案 1.B 2.C 3.C 2. 动物细胞培养的条件 1). 无菌无毒的环境 2). 营养 3). 温度和 pH 4). 气体
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 动物 细胞培养 移植 技术
链接地址:https://www.31doc.com/p-5214752.html