高中生物实验总结.pdf
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1、高中生物实验总结 实验一 观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布 1. 实验原理:利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和 RNA在细胞中的分布; 甲基绿和吡罗红对DNA和 RNA的亲和力不同 :甲基绿 +DNA 绿色 吡罗红 +RNA 红色 2. 分布 :真核生物DNA主要分布在细胞核中; 线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA ; RNA主要分布在细胞质中。 3. 实验结果 : 细胞核呈绿色, 细胞质呈红色. 4. 实验结论 :DNA主要分布在细胞核中;RNA主要分布在细胞质中; 5. 实验流程: (1)取口腔上皮细胞制片:载玻片上滴一滴质量分数为:0.9%NaCl 溶液;
2、漱口后,用消毒牙签刮口腔内壁后放在载玻片的液滴中涂抹几下; 载玻片在酒精灯上烘干,盖上; (2)水解:载玻片放入盛有30ml 质量分数为8% 的 HCl 的小烧杯中; 大烧杯中加入30温水; 将小烧杯放入大烧杯中保温5min; (3)冲洗涂片:用蒸馏水 的缓水流冲洗载玻片10s; (4)染色:吸水纸吸去载玻片的水分; 滴两滴混合染液,染色5min; 吸去多余的染液,盖上盖玻片; (5)观察:先低倍后高倍; 6、几种液体在实验中的作用: (1)0.9%NaCl 溶液: 保持口腔上皮的正常形态。 8% 的 HCl:改变细胞膜等的通透性;使染色质中的DNA与蛋白质分开。 蒸馏水:配置染液;冲洗载玻片
3、。 (2)混合染液需要现配现用 ; (3)该实验不宜用深色的材料,避免颜色对实验的干扰。 实验二、物质鉴定 一、实验原理:还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 (水浴加热) 脂 肪 + 苏丹 III 橘黄色(滴液观察或制片显微镜观察) 脂 肪 + 苏丹 IV 红色 蛋白质 + 双缩脲试剂紫色反应(不加热) 1、还原糖的检测 (1)材料的选取:还原糖含量高,白色或近于白色,如:苹果,梨,白萝卜。 (2)试剂: 斐林试剂 (甲液: 0.1g/mL 的 NaOH 溶液,乙液:0.05g/mL 的 CuSO4溶液), 现配现用 。 (3)步骤: 取样液 2mL于试管中加入刚配的斐林试剂1mL (斐林试剂甲
4、液和乙液等量混合均匀后再 加入) 水浴加热2min 左右观察颜色变化(白色浅蓝色砖红色) 操 作 方 法注 意 问 题解 释 1. 制备组织样液。 (去皮、切块、研磨、过滤) 苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高, 组织液很易被氧化成褐色, 将产生的颜色掩盖。 2. 取 1 支试管,向试管内注 入 2mL组织样液。 3. 向试管内注入1mL新制的 斐林试剂,振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液 分别 配制、 储存, 使用前 才将甲、 乙液等量混匀成斐林试剂; 切勿 将甲液、乙液分别加入苹果 组织样液中进行检测。 斐林试剂很不稳定,甲、乙 液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2
5、在 70 90 0C 下分解 成黑色 CuO和水; 甲、乙液分别加入时可能会 与组织样液发生反应,无Cu OH生成。 4. 试管放在盛有50-65 0C温 水的大烧杯中, 加热约 2 分钟, 观察到溶液颜色:浅蓝色 棕色 砖红色 (沉淀) 最好用试管夹夹住试管上部,使 试管底部不触及烧杯底部,试管 口不朝向实验者。 也可用酒精灯对试管直接加热。 防止试管内的溶液冲出试 管,造成烫伤; 缩短实验时间。 模拟尿糖的检测 1、取样:正常人的尿液和糖尿病患者的尿液 2、检测方法:斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸 3、结果:试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液,未出现砖红色沉淀的是正常人
6、的尿液。 4、分析:因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖,与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀,而正常人尿 液中无还原糖,所以没有发生反应。 2、脂肪的检测 (1)材料的选取:含脂肪量越高的组织越好,如花生的子叶。 (2)步骤:制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央 染色(滴苏丹 染液 23 滴切片上 23min 后吸去染液滴体积分数50% 的酒精洗 去浮色 吸去多余的酒精) 制作装片(滴1 2 滴清水于材料切片上盖上盖玻片) 镜检鉴定(显微镜对光低倍镜观察高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒) 操 作 方 法注 意 问 题解 释 花生种子浸泡、 去皮、 切下一些子叶 薄片,将薄片放在载玻片
7、的水滴中, 用吸水纸吸去装片中的水。 干种子要浸泡34 小 时,新花生的浸泡时间 可缩短。 因为浸泡时间短,不易切片;浸 泡时间过长,组织较软,切片不 易成形。切片要尽可能薄些,便 于观察。 在子叶薄片上滴23 滴苏丹或苏 丹染液 ,染色 1 分钟。 染色时间不宜过长。 用吸水纸吸去薄片周围染液,用50% 酒精洗去浮色,吸去酒精。 酒精用于洗去浮色,不洗去浮 色,会影响对橘黄色脂肪滴的观 察。同时,酒精是脂溶性溶剂, 可将花生细胞中的脂肪颗粒溶 解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上 12 滴蒸馏水,盖上盖玻片。 滴上清水可防止盖盖玻片时产 生气泡。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄 处,可
8、看到细胞中有染成橘黄色 或 红 色圆形小颗粒 。 装片不宜久放。时间一长,油滴会溶解在乙醇 中。 3、蛋白质的检测 (1)试剂: 双缩脲试剂 (A液: 0.1g/mL 的 NaOH 溶液, B 液: 0.01g/mL 的 CuSO4溶液) (2)步骤:试管中加样液2mL 加双缩脲试剂A 液 1mL ,摇匀 加双缩尿试剂B液 4 滴,摇匀观察 操 作 方 法注 意 问 题解 释 制备组织样液。 (浸泡、去皮研磨、过滤。) 黄豆浸泡1 至 2 天,容易研磨 成浆,也可购新鲜豆浆以节约 实验时间。 鉴定。加样液约2ml 于试管中, 加入双缩脲试剂A,摇匀;再 加入双缩脲试剂B液 34 滴, 摇匀,溶
9、液变紫色。 A液和 B液也要分开配制,储 存。鉴定时 先加 A液后加 B液 。 CuSO4溶液不能多加。 先加 NaOH 溶液, 为 Cu 2+与蛋白 质反应提供一个碱性的环境。 A、B 液混装或同时加入,会导 致 Cu 2+变成 Cu ( OH ) 2沉淀, 而失效。 否则 CuSO4的蓝色会遮盖反应 的真实颜色。 可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够,在实验中蛋清 粘在试管壁,与双缩脲试剂反 应后会粘固在试管内壁上,使 反应不容易彻底,并且试管也 不易洗干净。 附:淀粉的检测和观察 用试管取2ml 待测组织样液, 向试管内滴加2 滴碘液,观察 颜色变化。 碘液不要滴太多以免影响颜色
10、观察 4、考点提示: (1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些?葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维 素都是非还原 (2 ) 还原性糖植物组织取材条件? 含糖量较高、颜色为白色或近于白色,如:苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 (3) 研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响? 是为了 使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少,使鉴定时溶液颜色变化不明显。 (4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用? 斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成酒石酸络铜离子,酒石酸络铜离子和可溶性还原糖在加热条件 下反应产生砖红色沉淀。斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸
11、 有一定的还原性 而自发地 缓慢产生氧化亚铜沉淀,而氧化亚铜是砖红色沉淀,这就会给实验带来误解。因此斐林试剂一 般为现用现配。 (5) 还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为:浅蓝色棕色砖红色 (6)花生种子切片为何要薄?只有很薄的切片,才能透光 ,而用于显微镜的观察。 (7) 转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊, 其原因一般是什么?切 片不均匀。 (8)脂肪鉴定中乙醇作用?洗去浮色。 (9)双缩脲试剂A、B两液是否混合后用?先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化? 不能混合;先加A液的目的是使溶液呈碱性 ;先留出一些大豆组织样液做对比。 实验三 观察叶绿体
12、和细胞质流动 1、材料:新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶,口腔上皮细胞临时装片 2、原理:叶绿体在显微镜下观察,绿色, 球形或椭球形。 用健那绿 染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色, 细胞质接近无色。 知识概要:取材制片低倍观察高倍观察 考点提示: (1) 为什么可直接取用藓类的小叶,而不能直接取用菠菜叶? 因为藓类的小叶很薄,只有一层细胞组成,而菠菜叶由很多层细胞构成。 (2)取用菠菜叶的下表皮时,为何要稍带些叶肉? 表皮细胞除保卫细胞外,一般不含叶绿体,而叶肉细胞含较多的叶绿体。 (3) 怎样加快黑藻细胞质的流动速度?最适温度是多少? 进行光照、提高水温、切伤部分叶片;25左右。 (4)对
13、黑藻什么部位的细胞观察,所观察到的细胞质流动的现象最明显?叶脉附近的细胞。 (5)若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针,则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是 怎样的? 仍为顺时针。 (6)是否一般细胞的细胞质不流动,只有黑藻等少数植物的细胞质才流动? 否, 活细胞的细胞质都是流动的。 (7)若观察植物根毛细胞细胞质的流动,则对显微镜的视野亮度应如何调节? 视野应适当调暗一些,可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。 (8)在强光照射下,叶绿体的向光面有何变化?叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。 实验四、观察有丝分裂 1、材料:洋葱根尖(葱,蒜) 2、步骤:(一)洋葱根尖的培养(二)装片的
14、制作 3、实验原理:(1)龙胆紫溶液能将染色体染成深色 ( 2)有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同,可用高倍显微镜根据各个 时期内染色体的变化情况,识别该细胞处于那个时期。 制作流程: 解离漂洗染色制片 1. 解离 : 药液 : 质量分数为15% 的盐酸 , 体积分数为95% 的酒精 (1 : 1混合液 ). 时间 : 35min . 目的 : 使组织中的细胞相互分离开来. 2. 漂洗 : 用清水漂洗约10min.目的 : 洗去药液 , 防止解离过度, 并有利于染色. 3. 染色 : 用质量浓度为0.01g / mL或 0.02g / mL的龙胆紫溶液 ( 或醋酸洋红液) 染色
15、3 5min 目的 : 使染色体着色, 利于观察 . 4. 制片 : 将根尖放在载玻片上, 加一滴清水 , 并用镊子把根尖弄碎, 盖上盖玻片 , 在盖玻片上再加一片 载玻片 . 然后用拇指轻轻地按压载玻片 . 目的 : 使细胞分散开来, 有利于观察 . 过程方法时 间 目的 解离上午 10 时至下午2 时,剪去洋葱根尖2-3mm,立 即放入盛入有盐酸和酒精混合液(1:1)的玻璃 皿中,在温室下解离。 3-5min 用药液使组织中的细胞相 互分离开来 漂洗待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛入清水的玻 璃皿中漂洗。 约 10min 洗去药液,防止解离过度 染色把根尖放进盛有质量浓度为0.01g/ml
16、或 0.02g/ml 的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)的玻璃皿中染色。 3-5min 染料能使染色体着色。 制片用镊子将这段根尖取出来,放在载玻片上,加一 滴清水,并用镊子尖把根尖能碎,盖上盖玻片, 在盖玻片上再加一片载玻片。然后,用拇指轻轻 的按压载玻片。 使细胞分散开来, 有利于观 察 (三)观察 1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞:细胞呈 正方形 ,排列紧密 , 有的细胞正在分裂。(长方形:伸 长区) 2、换高倍镜下观察:分裂中期分裂前、后、末期分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分 布的特点)。其中,处于分裂间期的细胞数目最多。 考点提示: (1) 培养根尖时,为何要经常换水?增加水中
17、的氧气,防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。 (2)培养根尖时,应选用老洋葱还是新洋葱?为什么?应选用旧洋葱,因为新洋葱尚在休眠,不易 生根。 (3)为何每条根只能用根尖?取根尖的最佳时间是何时?为何? 因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午10 时到下午2 时;因为此时细胞分裂活跃。 (4)解离和压片的目的分别是什么?压片时为何要再加一块载玻片? 解离是为了使细胞相互分离开来,压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受 力均匀,防止盖玻片被压破。 (5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的,其原因是什么?压片时用力过大。 (6) 解离过程中盐酸的作用是什么?丙酮可代替吗?分解和溶解
18、细胞间质;不能, 而硝酸可代 替。 (7) 为何要漂洗?洗去盐酸便于染色。 (8) 细胞中染色最深的结构是什么?染色最深的结构是染色质或染色体。 (9)若所观察的细胞各部分全是紫色,其原因是什么?染液浓度过大或染色时间过长。 ( 10)为何要找分生区?分生区的特点是什么?能用高倍物镜找分生区吗?为什么? 因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是:细胞呈正方形,排列紧密,有的 细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区,因为高倍镜所观察的实际范围很小,难以发现分生 区。 (11)分生区细胞中,什么时期的细胞最多?为什么?间期;因为在细胞周期中,间期时间最长。 (12)所观察的细胞能
19、从中期变化到后期吗?为什么?不能,因为所观察的细胞都是停留在某一时期 的死细胞 。 (13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体?为什么?不能,因为洋葱表皮细胞一般不分裂。(已分化 的细胞不分裂) (14)若观察时不能看到染色体,其原因是什么? 没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。 实验五 、比较酶和 Fe3+的催化效率 考点提示: ( 1)为何要选新鲜的肝脏? 因为在不新鲜的肝脏中,过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。 (2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么? 应选用较粗的,因为在较细的试管中容易形成大量的气泡,而影响卫生香的复燃。 (3)为何要选
20、动物的肝脏组织来做实验,其他动植物的组织的研磨液能替代吗? 因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶,所以能够 替代。 (4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液,哪一个催化效果好?为什么? 研磨液效果好;因为它增加 过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积 。 (5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时,可否共用下个吸管?为什么? 不可共用,防止过氧化氢酶与氯化铁混合,而影响实验效果。 实验六 色素的提取和分离 1、原理:( 1)叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇 提取色素 (2)各色素在层析液中的溶解度不同, 随层析液在滤纸上扩散速度不同分离色素 2、步骤: (1)称取
21、5g 绿色叶片并剪碎 提取色素研钵研磨漏斗过滤 (2)加入少量SiO2、CaCO3和 5ml 丙酮收集到试管内并塞紧管口 (1) 将干燥的滤纸剪成6cm长,1cm宽的纸条, 剪去一端两角 (使层析液同时到达滤液细线) 制滤纸条 (2)在距剪角一端1cm处用铅笔画线 (1)用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线 滤液划线 (2)干燥后重复划2-3 次 (1)向烧杯中倒入3ml 层析液(以层析液不没及滤液细线为准) 纸上层析(2)将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁,轻轻插入层析液中 (3)用培养皿盖盖上烧杯 观察结果:滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带(如下图) 最宽:叶绿素a;
22、最窄:叶绿素b; 相邻色素带最近:叶绿素a 和叶绿素b; 相邻色素带最远:胡萝卜素和叶黄素。 考点提示: (1)对叶片的要求?为何要去掉叶柄和粗的时脉? 绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。 (2)二氧化硅 的作用?不加二氧化硅对实验有何影响? 为了 使研磨充分 。不加二氧化硅,会使滤液和色素带的颜色变浅。 (3)丙酮的作用?它可用什么来替代?用水能替代吗? 溶解色素 。它可用酒精等有机溶剂来代替,但不能用水来代替,因为色素不溶于水。 (4)碳酸钙的作用?不加碳酸钙 对实验有何影响? 保护色素 ,防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙,滤液会变成黄绿色或褐色。 (5)研磨
23、为何要迅速?要充分?过滤时为何用布不用滤纸?研磨迅速, 是为了防止丙酮大量 挥发;只有充分研磨,才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸,但能通过尼龙布。 (6)滤纸条为何要剪去两角?防止两侧层析液扩散过快。 (7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线?因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素,会影响色素的 分离结果。 (8) 滤液细线为何要直?为何要重画几次?防止色素带的重叠;增加色素量,使色素带的 颜色更深一些。 (9) 滤液细线为何不能触到层析液?防止色素溶解到层析液中。 (10)滤纸条上色素为何会分离? 由于不同的色素在层析液中的溶解度不同,因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。 (11)
24、色素带最宽的是什么色素?它在层析液中的溶解度比什么色素大一些? 最宽的色素带是叶绿素a,它的溶解度比叶绿素b 大一些。 (12)滤纸条上相互间距最大的是哪两种色素?胡萝卜素和叶黄素。 (13) 色素带最窄的是第几条色素带?为何?第一条色素带,因为胡萝卜素在叶绿体的四种色 素中含量最少。 14、扩散最快的是胡萝卜素(橙黄色),扩散最慢的是叶绿素b(黄绿色)。 实验七 观察质壁分离和复原 1、条件 :细胞内外溶液浓度差,活细胞,大液泡 2、材料:紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡),质量浓度0.3g/mL 的蔗糖溶液,清水等。 3、步骤:制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片观察盖玻片一侧滴蔗糖溶液
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