生物选修一生物技术实践知识点总结.pdf
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1、生物选修一生物技术实践知识点总结 专题一 传统发酵技术的应用 *几种常用发酵菌种的比较 菌种 项目 酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌 生物学分类真核生物原核生物真核生物原核生物 代谢类型异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧 繁殖方式适宜条件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖 生产应用酿酒酿醋制作腐乳制作泡菜 发酵条件前期需氧,后期不需氧一直需氧一直需氧不需氧 最适温度18 2530 3515 18常温 时间控制1012 天78 天 腌制8 天左 右 腌制10 天左 右 其他条件封闭充气口适时充气 控 制 盐 酒 用 量 控制盐水比例 课题一 果酒和果醋的制作 1、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大
2、量繁殖。 C6H12O66O26CO 26H2O 在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O62C2H5OH 6CO 2 2、在发酵过程中, 随着酒精浓度的提高, 红葡萄皮的色素也进入发酵液, 使葡萄酒呈现深红色. 在缺氧呈 酸性的发酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。 3、醋酸菌是单细胞细菌.,当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时, 醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。C2H5OH O2CH 3COOH H2O 4、实验流程:挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵醋酸发酵 果酒果醋 7、酒精检验:在酸性条件下,重铬酸钾与酒
3、精反应呈现灰绿色。 8. 实验装置 充气口 是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的;排气口 是在酒精发酵时用来 排出二氧化碳的;出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与 瓶身相连接,其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二 氧化碳的排出。使用该装置制酒时,应该关闭充气口;制醋时,应该充气口连 接气泵,输入氧气。 课题二 腐乳的制作 1、多种微生物参与了发酵,起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。生殖方式是孢子生殖。 2、原理:毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪 水解为甘油和脂肪酸。 3、实验流程:让豆腐上长出毛霉加盐腌
4、制加卤汤装瓶密封腌制 4、所用豆腐的含水量为70左右,水分过多则腐乳不易成形。* 5. 毛霉的生长条件:将豆腐块平放在笼屉内,将笼屉中的控制在1518,并保持一定的温度。 亚 硝 酸 盐 含 量 发酵时间 (d) 来源: 1. 来自空气中的毛霉孢子,2. 直接接种优良毛霉菌种. 时间: 5 天 6. 加盐腌制:将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层数的加高而增加盐 量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些。加盐腌制的时间约为8 天左右。 注意 :控制盐的用量,豆腐块与盐的质量分数比为51 . 盐的浓度过低,不足以抑制微生物的生长,可能 导致豆腐腐败变质;盐的浓度过高会影响腐乳的口味
5、 7. 食盐的作用:抑制微生物的生长,避免腐败变质; 析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程中不易酥烂; 调味作用,给腐乳以必要的咸味. 8. 配制卤汤: 卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中酒的含量一般控制在12% 左右。 酒的作用 :1. 防止杂菌污染以防腐2. 赋予腐乳以特殊风味3. 酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长 短有很大关系,酒精含量越高,使腐乳成熟期延长;酒精含量过低,杂菌繁殖快,豆腐易腐败。 香辛料的作用:1. 调味作用2. 杀菌防腐作用3. 参与并促进发酵过程 10. 防止杂菌污染:用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷干净后要用沸水消毒。装瓶时,操作要迅速小心。 整齐地摆放好豆腐
6、、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封。封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,防止 瓶口被污染。 课题三 制作泡菜 1. 制作泡菜所用微生物是乳酸菌,其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下,将糖分解为乳酸。反应 式为: C6H12O6 酶 2C3H6O3+ 能量 2. 亚硝酸盐为白色粉末,易溶于水,在食品生产中用作食品添加剂。 膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康,亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外,但在适宜pH 、温度 和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。 一般在腌制10 天后亚硝酸盐含量开始降低,故在10 天之后食用最好 测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发 生重氮化反应
7、后,与N-1- 萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料,与已知浓度的标准 显色液目测比较,估算泡菜中酸硝盐含量。 试验流程 4. 测定亚硝酸盐的一般流程:配制溶液制备标准显色液制备样品处理液比色计算 专题二 微生物的培养与应用 课题一 微生物的实验室培养 1. 培养基 :人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 培养基按照物理性质 可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。 按照 成分 可分为 合成培养基和天然培养基 。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成,常用于微 生物的分离鉴定。天然培养基 是用化学成分不明的天然物质配制而成,常用于实际工业生产。 按照培养基的用
8、途 ,可将培养基分为基础培养基,选择培养基和鉴别培养基。 培养基的化学成分包括水 、 无机盐、 碳源、 氮源 等。 2. 无菌技术 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵. 消毒与灭菌的区别 消毒 指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括 芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法, 化学药剂 (如酒精、氯气、石炭酸等)消 毒、 紫外线消毒 。 灭菌 则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭 菌、干热灭菌 、高压蒸汽灭菌。 *灭菌方法:接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法; 玻璃器皿、金属用具等使用干
9、热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱; 培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅。 3. 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)方法步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)倒平板操作的步骤:了解 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。 右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火焰。 用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约10 20mL )倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。 等待平板冷却凝固,大约需510min。然后,将 平板倒过来放置。 4. 纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的方法最常用的是平板划线法 和稀释涂
10、布平板法。 ( 2)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的 是:使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在 培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种。 (3)平板划线法操作步骤:了解 将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞。 将试管口通过火焰。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。 将试管通过火焰,并塞上棉塞。左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入 平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环,待其冷却后,从第 一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。注意不要将最 后一区的划线与第一区
11、相连。将平板倒置放入培养箱中培养。 (6)涂布平板操作的步骤:了解 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液,滴加到培养基表面。 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却810s。 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。 5. 菌种的保存 (1)对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。 缺点 :这种方法保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异。 (2)对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。 6. 确定培养基制作是否合格的方法 将未接种的培养基在恒温箱中保温12 天,无菌落生长,说明培养基的制备是成功的 课题二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1. 尿素:尿素并不能
12、直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后,才能被植物利 用。土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为他们能合成脲酶 2. 筛选菌株 ( 1)实验室中微生物的筛选应用的原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时抑制或阻止其他微生物生长。 (2)配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如,培养基中不加入有机 物可以选择培养自养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养能固氮的微生物;加入高浓度的食 盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 3. 统计菌落数目 (1)测定微生物数量的常用方法有活菌计数法(稀释涂布平板法)和显
13、微镜直接计数。 (2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统 计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确,一般设置3 5 个平 板,选择菌落数在30300 的平板进行计数,并取平均值 。 4. 实验设计 (1)土壤取样:从富含有机物、潮湿、pH7 的土壤中取样。铲去表层土,在距地表约38cm的土壤层 取样。 (2)样品的稀释: (3)微生物的培养与观察观察微生物的菌落特征:形状、大小、隆起程度、颜色 5.统计某一稀释度下平板上的菌落数 每克样品中的菌落数=(C/V)*M 其中,
14、 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V 代表涂 布平板时所用的稀释液的体积(ml), M 代表稀释倍数 课题三 分解纤维素的微生物的分离 1. 纤维素与纤维素酶 (1)纤维素,一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物 ( 2)纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即 C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶,前两种酶 使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 2. 纤维素分解菌的筛选 (1)筛选方法:刚果红染色法。 (2)刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理 刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生 这种反应。当我们在含有纤维
15、素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合 物。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解 菌为中心的 透明圈 。这样,我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 3. 分离分解纤维素的微生物的实验流程 土壤取样 选择培养(此步是否需要,应根据样品中目的菌株数量的多少来确定)梯度稀释 将样品 涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落 (1)土壤采集选择富含纤维素的环境。 (2)刚果红染色法种类 一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红。 4. 课题延伸:了解 对分解纤维素的微生
16、物进行了初步的筛选后,只是分离纯化的第一步,为确定得到的是纤维素分解 菌,还需要进行发酵产纤维素酶的实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵 和固体发酵 两种。纤维素酶的 测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。 专题三 植物的组织培养技术 课题一 菊花的组织培养 1. 植物组织培养的基本过程 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化 。脱分化产生的愈伤组织继 续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化 。再分化形成的试管苗,移栽到地 里,可以发育成完整的植物体。 2. 植物细胞工程的原理:细胞的全能性。 3. 植物组织培
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