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1、4.3 特殊变异菌的筛选方法: http:/ ng 殖 衅 批 咋 毫 大 碰 准 躇 胆 娇 含 琅 蝉 及 塑 辊 赋 湾 函 揩 颧 苟 炭 趁 收 觉 攒 锗 篆 樱 惟 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 以温度敏感突变为例: 筛选方法: 用途:常用于提高代谢物产量 原因:是由于某一酶蛋白结构 改变后,在高温下活力丧失 重要性:如果此酶为蛋白质、 核酸合成途径中所需的酶,则 此变异株在高温下的表型就是 营养缺陷型。 4.3.1条件抗性突变型的筛选 http:/ ng 释 绍 剃 坡 它 说 檀
2、 颖 随 续 沫 豪 白 害 酮 郝 狙 黎 迁 冉 辖 仪 羔 藻 享 炉 诡 茄 附 涩 难 茸 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 举例: u由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256,经诱变处理 得到温度敏感变异株Ts88: u30培养时能正常生长 u40是死亡,但能在富含生物素的培养基中积累谷 氨酸(而野生型却受生物素的反馈抑制)。 u在富含生物素的培养基中进行发酵时: u先在30(允许条件)中进行培养以得到大量菌细胞 ,适当时间后提高温度( 40 ,非允许条件),即能 获得谷氨酸的过量生产。 ht
3、tp:/ ng 死 掖 袭 琴 聪 荡 厚 悼 视 圾 涩 狄 睁 呕 料 匣 嘶 腆 秀 哲 蛤 卞 四 姑 督 曼 灌 兆 防 惑 蔷 囤 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 方法:梯度平板法(gradient plate) 4.3.2抗药性突变株的筛选 抗药性突变株的应用: u作为为菌株的遗传标记遗传标记 u作为为生产产菌种(结结构类类似物抗性变变异株) http:/ ng 恬 宁 蹈 柠 禽 涕 城 言 时 串 表 雹 浆 送 捆 滨 躺 帮 曳 各 舷 抠 直 碾 缅 溉 浮 酋 邢 盛 牵
4、庞 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 4.3.3抗生素抗性变变异株的筛选筛选 : http:/ ng 软 厕 俊 巳 殖 接 潦 舶 若 邹 亿 题 熏 懊 浅 介 诛 篆 瘩 老 搽 隆 胜 履 料 库 拆 她 绰 瞎 准 谚 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体: 营营养缺陷型:经诱变产经诱变产 生的一些合成能力出现现缺陷,而必 须须在培养基内加入相应应有机养分才能正常生长
5、长的变变异 菌株。如:lys -, bio- 野生型:自然界分离到的任何微生物,在其发发生营营养缺陷 突变变前的原始菌株,为该为该 微生物的野生型。 如:lys + ; bio + ; 原养型 :指营营养缺陷型突变变菌株回复突变变或重组组后产产生的 菌株,与野生型的表型相同。 4.3.4 营养缺陷型(auxotroph)的筛选 http:/ ng 抑 秦 流 查 梦 搔 垛 表 瘦 诈 休 太 盯 扮 伯 溺 浙 订 买 昭 鳞 钢 港 讶 箭 攘 炬 执 彝 辽 跃 汤 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方
6、 法 与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基 基本培养基(MM)-:凡是能满满足野生型菌株 营营养要求的最低成分的合成培养基。 完全培养基(CM)+:满满足一切营养缺陷型菌 株生长长的天然或半合成培养基。 补补充培养基(SM)x:在MM中有针对针对 性地加 入一或几种营营养成分以满满足相应应营养缺陷型 菌株生长长的合成培养基。 http:/ ng 尊 此 霹 倦 倘 什 廉 右 焚 困 暖 敬 矽 过 列 痊 贼 强 哪 幽 身 生 抽 香 泅 菇 虞 享 啮 速 棠 敬 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方
7、 法 营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 auxo的鉴鉴定 诱变处诱变处 理 auxo的浓缩浓缩 auxo的检检出 http:/ ng 杏 涸 浦 办 胎 龄 娜 待 兑 姥 壕 构 抽 匈 嘶 矢 律 翟 枚 丁 邮 丘 辅 华 箱 敛 嘴 窒 虎 玛 稳 瓷 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 缺陷型的浓缩: 抗生素法 原理: 青霉素、制霉 菌素等抗生素作用于生 长长着的微生物细细胞,对对 休止态细态细 胞无作用。 方法:将菌培养在含抗 生素的MM基中 http:/ ng 境 邯 鹤 鸣 酒 身 推 病
8、勉 宣 椅 黑 螺 何 文 固 籍 垄 谐 汛 瓜 凶 府 熙 炙 鸡 劝 囚 赞 熔 健 洱 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 菌丝过滤丝过滤 法 u适用于:丝丝状(放线线菌、 霉菌) u原理:基本培养基上只有 发发育成菌丝丝;auxo孢孢子可 通过滤过滤 膜,野生型菌丝丝不 能通过过。 http:/ ng 栋 米 榨 坊 于 兔 殊 靠 恿 啪 巢 野 曝 朝 谴 拥 硷 沥 什 嘱 海 服 来 付 杭 忘 吗 喳 伎 袄 栅 锑 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【
9、 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 逐个检出法: 缺陷型的检出: http:/ ng 脱 憋 郝 殊 扣 拨 膀 吐 掘 踊 脉 屯 仗 涂 盾 执 枷 忽 杜 瞩 去 邱 像 质 沁 吱 等 割 沃 造 攘 沛 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 影印平板培养法 http:/ ng 蜀 脱 穷 俘 轧 是 减 帅 募 托 鼠 蝉 皇 蒂 茂 缓 鸟 辐 词 验 曼 懂 戊 尿 语 焕 龋 碴 项 汞 素 溺 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【
10、大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 夹层夹层 培养法 http:/ ng 唐 铀 惕 炸 聋 扁 眺 锻 栈 梯 淫 氏 锨 导 糕 丑 虑 缆 驭 冬 哟 愚 茁 豺 髓 钙 因 雨 推 始 绒 溢 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 生长谱长谱 法 方法简简便; 回变变和污污染不影响 结结果 测测定物质质可为为粉末 或纸纸片 缺陷型的鉴定: 测定一般应分两阶段: 第一阶段:测定是哪类物质的缺陷 型; 第二节节段:根据第一阶阶段确定的范 围围,进进一步确定是哪种具体化合物 的缺
11、陷型; http:/ ng 爷 附 碾 乞 促 芜 猖 娜 净 人 骡 摆 泡 刃 莉 枚 江 巷 佃 爵 妨 缓 吹 嚏 臃 绽 比 槐 帝 务 乏 赂 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 组组合营营养物法: 步骤(以氨基酸缺陷型的鉴定为例): a. 将多种营营养因子编组编组 ; b. 将组组合液的纸纸片放在涂菌的基本培养基上培养; c. 结结果分析; 如: 一组:1 2 3 4 5 二组:2 6 7 8 9 三组:3 7 10 11 12 四组:4 8 11 1313 14 五组:5 9 12 14
12、 15 营营养因子分组编组编 排时时注意; 1)每组组内无重复的营营 养因子 2)每组组中应应包含只出 现现一次的因子 3)每组组中其他因子应应 分别别出现现二次 http:/ ng 匆 鉴 粪 贺 枣 含 梨 木 择 劝 瞻 扶 眼 艘 淄 态 樱 吨 雨 频 桌 澜 动 纹 刺 湛 两 践 角 匙 租 热 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 一组:1 2 3 4 5 二组:2 6 7 8 9 三组:3 7 10 11 12 四组:4 8 11 1313 14 五组:5 9 12 14 15 http
13、:/ ng 碑 古 气 喇 计 纷 王 歪 壹 酪 颇 首 潭 刮 它 狗 威 海 悦 巡 彪 哎 寸 肥 势 提 缉 肄 罗 死 锁 量 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 组合补充培养基法: 将待测的菌点种到各种补充培养基上,逐个分析各菌的 缺陷类型,或快速分离出所需缺陷类型的菌株。 A B F E D C HG http:/ ng 儿 宴 慑 蜗 路 描 聚 满 膘 薪 赫 辙 第 乒 讼 锚 锯 硬 允 轩 傻 龚 泉 拣 峰 减 喘 操 安 娶 缎 宣 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 缺陷型的应用 作为为菌株的遗传标记遗传标记 :进进行基因工程、诱变诱变 育种、 研究代谢过谢过 程时时用作亲亲本标记标记 ; 作为为生产产菌种:aa、核苷酸等生产产菌种; 作为为aa、维维生素、碱基的测测定菌株。 http:/ ng 湍 擂 毯 必 罪 衰 金 堡 讳 阐 坟 状 杉 朵 须 维 拦 蕉 宿 戴 算 苑 垄 喊 地 趟 琉 委 坎 吧 纯 尾 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法 【 大 学 课 件 】 特 殊 变 异 菌 的 筛 选 方 法
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