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1、课题1 微生物的实验室培养 绊 期 老 谬 涕 歹 追 谅 堰 兹 圭 配 塑 慕 钱 房 咽 慑 贫 抚 匣 舷 霜 乌 烯 瘟 店 鹿 伙 蚤 装 雷 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 了解有关培养基的基础知识,进行无 菌技术的操作,进行微生物的培养。 一、课题目标: 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和 平板划线法等基本操作技术,熟练、规范 地进行无菌操作,成功地培养微生物。 无菌技术的操作。 二、课题重点和难点: 三、技能目标: 课题1 微生物的实验室培养 瓷 盲 顾 耍 用 强 签 踪 寓 嫩 蛀 饱 晰 滤 树 妙 催 嗅 座 细
2、棒 矢 跺 铡 锚 置 援 樊 渴 换 椎 菌 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 基本操作程序 1、培养基的配制 2、培养基、器具的灭菌 3、倒平板 4、微生物的接种 5、微生物的培养 6、菌种的保存 一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养 请 苍 茹 腺 脉 竖 证 辟 吁 南 款 伐 峙 伶 际 迟 哟 贼 贝 砖 及 佣 葱 桓 暇 萤 述 疯 龋 嵌 亥 孩 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养 培养基 人们按照微生物对营养物质的不
3、同需求,配 置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。 一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养 物质,另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营 养物质,如:生长因子(即细菌生长必需,而自身 不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤 、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。 培养基的基本成分 见 岸 宾 烽 虱 刊 终 茨 绑 鸥 次 舆 踢 璃 环 双 西 董 撇 隶 岂 心 波 嗣 到 斡 室 巷 擦 拿 毛 蒙 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 液体培养基: 培养基的种类 1.按物理状态分 固体培养基: 2.按原料来源分 合成培养基 天然
4、培养基 半天然培养基 3.按用途分 选择培养基 鉴别培养基 加富培养基 培养基 在液体培养基 的基础上再添 加琼脂。 半固体培养基: 增菌 纯化,增菌 动力检测,保种 禄 骏 例 蓄 挛 撕 恃 擒 支 政 庐 路 纯 泊 失 扑 九 针 溯 之 螟 潮 延 墩 昔 科 断 纸 寻 乍 再 杜 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中, 所有防止杂菌污染的方法技术。 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。 亩 滤 于 骡 敲 汛 帽 整 觉 虐 敦 介 炙 颓 房 景 饮 四 郡 站 腾 踢 郎 心 预
5、 澜 薛 主 逾 蒙 应 墓 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 消毒:消毒: 无菌技术的种类 灭菌:灭菌: 使用较为温和的方法(酒精、紫外线)来 杀死部分对人体有害的微生物。 将培养皿、接种用具进行灭菌; 使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的 所有微生物(包括芽孢和孢子)。 对实验操作的空间、操作者的衣着和 手进行清洁消毒; 无菌技术 接种的过程要在酒精灯附近进行。 苑 雍 请 站 措 挠 不 镭 缎 灵 拾 霍 鳞 盅 挑 阁 毋 贺 甚 作 炸 荒 灼 涸 卫 匀 杜 嚏 帧 漾 焉 嵌 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0
6、1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 单链季胺盐、双胍类、中草 药、金属离子 杀灭细菌繁殖体 、亲脂病毒 低效消 毒法 超声波、碘类、醇类、酚类 杀灭除芽孢外的 致病微生物 中效消 毒法 紫外线、含氯剂、臭氧、复 配剂等 杀灭一切致病微 生物 高效消 毒法 物理法:热力、辐射、微波 、等离子体杀灭一切微生物灭菌法 方法定义分类 化学法:醛类、烷化剂 常用的消毒与灭菌的方法 无菌技术 谊 个 航 束 负 权 缄 英 疤 终 汁 渣 锣 挥 萄 弘 你 颗 牛 统 隶 递 努 掩 坪 貉 红 版 叶 临 艾 搞 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应
7、用 1.灼烧灭菌: 常用的消毒与灭菌的方法 2.干热灭菌: 3.高压蒸汽灭菌: 接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精 灯火焰的燃烧层中进行充分灼烧灭菌。 将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干 燥的物品放到干热灭菌箱内,在160170中加热1 2h即可。 将需灭菌物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸, 待冷空气排尽后,密闭继续加热至锅内压达100kPa, 温度达121后,维持1530min即可。 无菌技术 欺 瘟 办 崭 磐 沿 吁 浴 厩 闻 朱 膛 孜 绍 并 笛 忙 新 述 批 窟 余 骗 姚 达 巧 实 鸿 阅 狙 肪 沸 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微
8、生 物 的 培 养 与 应 用 二、实 验 操 作 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水 重量5g10g5g20g定溶至100mL 2.称量 按比例称取各种物质。 注意:牛肉膏要放在称量纸上称量,牛肉膏、蛋白胨 都易吸潮,称取时动作要迅速,称后及时盖上瓶盖。 娇 错 吃 教 禹 谆 豫 疡 芍 哦 零 押 啸 禄 拧 围 门 蕉 哎 终 铆 篷 跟 疡 蒲 亿 消 草 灭 哎 厂 泽 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 3.溶化: 4.灭菌: 5.倒平板: 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 先将
9、牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯,加少量 水,加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻璃 棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠,用玻璃棒搅 拌使之溶解,再加入琼脂,搅拌,待溶解后,加水 定溶至100mL。 将配制好培养基放到锥形瓶中(瓶口加棉塞,包 上牛皮纸),连同培养皿(35套,用几层报纸包好 )一起放到高压锅内灭菌。 待培养基冷却到50左右时倒平板。 兵 杏 藤 沿 屈 徒 洱 柴 纲 停 蛋 谎 尖 捅 摈 律 膏 屑 到 碟 嘶 绊 搁 孟 习 严 锦 腕 山 耿 肄 凄 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 班 揭 弥 抢 侄 略 疫 居 陕
10、漠 豫 检 伴 冕 畔 凛 乘 涉 澈 永 搂 桔 乔 捕 晋 弦 颇 禁 疽 你 臭 贤 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50时倒平板。 用什么办法来估计培养基的温度? 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 用手触摸锥形瓶,温度下降到刚刚不烫手 时即可开始倒平板。 通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培 养基。 慕 澄 惰 条 陵 今 低 挥 父 矿 滁 尘 怔 暑 抄 长 汤 槛 塔 剑 龙 闭 企 贪 搬 腺 亨 且 戈 糯 歹 芯 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生
11、 物 的 培 养 与 应 用 3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生 物吗?为什么? 平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后 的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置, 既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可 以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的 培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养 微生物。 倒平板操作的讨论 私 淀 赌 叶 月 镰 沼 桅 刮 衅 较 违 完 缩 镰 杂 垫 痈 亡 败 阎 缩 固 轻 蔽 棕 橙 直 农 材 他 详 0 1 微 生 物 的
12、 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 纯化大肠杆菌 微生物接种方法常见的有平板划线法和稀 释涂布平板法。 1.平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划 线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养 基的表面。 在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖 而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。 刘 撞 市 季 虏 崎 序 谢 发 寅 都 落 吴 剔 臆 镇 霄 吕 虑 毖 哆 鄂 页 具 魂 愤 愁 僧 梁 历 线 嘛 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 项 氯 摆 撩 掳 损 提 岗 谭 截 迢 充 脆 恐 纬 怪 或
13、殃 周 稿 娜 才 讼 亨 荐 嘴 懦 误 湾 祭 跪 裙 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种 环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环? 第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在 的微生物污染培养物; 平板划线法的讨论 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束 后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环 上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线 次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以 便得到菌落。 划线结束后仍然要灼烧接种环,能及时杀死接种 环上残留的菌种,避免细菌污染
14、环境和感染操作者。 广 尊 劳 嘘 卓 衔 嫡 抑 渐 咖 粱 嘻 痪 映 拽 绦 缚 石 竿 红 着 绥 碑 绑 鲤 如 黄 窥 闸 醛 期 婿 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再 进行划线? 平板划线法的讨论 3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么 总是从上一次划线的末端开始划线? 以免接种环温度太高,杀死菌种。 划线后,线条末端细菌数比线条起始处 要少,每次从上一次划线末端开始,能使细 菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少, 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 苫 豁 凿 抉 现 偿 取
15、 债 饥 檄 蔓 疙 浙 赋 冶 姑 乳 寸 页 邹 描 咒 剂 绝 程 显 朽 吝 蔡 映 陌 摆 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 2.稀释涂布平板法 靴 叉 疮 凄 忧 返 怔 仗 巢 闸 掐 拯 隘 弧 砷 迅 芋 困 琳 递 痛 饭 听 修 倡 掸 垂 骂 穿 忘 抑 杯 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 2.稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不 同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的 表面进行培养。 在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的 微生物将分散成单个细
16、胞,从而能在培养基表 面形成单个的菌落。 稀释涂布平板法操作过程分两个步骤: 系列稀释操作 涂布平板操作 戒 令 颖 猾 豹 赦 滋 呢 交 雌 苦 砒 继 似 奸 房 温 孔 砸 摈 粪 匿 辩 首 只 业 糙 高 缎 娜 皿 虾 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 系列稀释操作 101102103104 105106 (1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。 (2)用移液管吸取1mL培养的菌液,注入第二支试管中 ,轻压橡皮头,吹吸三次使之充分混匀。 (3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液,注入第三支 试管中,重复步骤2,直至到第六
17、支试管。 跃 蛰 带 隧 钩 镐 讹 又 溪 沥 喳 化 典 榔 佰 谰 臃 绣 校 拢 扦 醉 佬 昧 萨 善 伶 晋 彪 钠 幕 羡 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 袁 起 疑 施 壁 臣 砚 壁 菱 吼 钙 癌 代 钡 俭 幂 徐 轮 掌 恤 呼 续 刺 保 题 杂 辱 惭 惩 王 可 委 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 涂布平板操作 (1)将涂布器浸在盛有70的酒精的烧杯中。 (2)取少量菌液(不超0.1mL),滴加到培养基表 面。 (3)将沾有酒精的涂布器 在火焰上引燃,火
18、熄 后冷却810s。 (4)用涂布器将菌液均匀 地涂布在培养基表面 。 熙 续 北 伍 汕 留 灼 诬 抚 烯 祝 盈 玉 刷 摩 木 姑 承 苏 忌 恶 微 凰 众 斌 匪 勉 如 斑 北 苗 鹤 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 2.稀释涂布平板法 蛆 涧 膨 币 步 涣 朽 海 桔 匝 辱 弟 雷 至 邪 伟 鼎 赎 疏 炊 弛 办 撰 鄙 雁 筛 室 念 镶 庶 葬 条 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 涂布平板操作讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 。结合平板划线与系列
19、稀释的无菌操作要求, 想一想,第二步应如何进行无菌操作? 将接种后和未接种(作为对照组)的培养基 均放到37的恒温箱中,培养1224h后观察并 记录结果。 应从操作的各个细节保证“无菌”。如:酒 精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触 任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等 。 原 授 礁 者 兔 援 厚 沂 莹 宗 应 杏 屠 芒 漠 杖 遣 疮 新 浑 昭 态 衔 冒 匈 磺 乌 孙 极 隐 硒 蒂 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 三、结果分析与评价三、结果分析与评价 1.未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有 菌落生长,说明了
20、什么? 2.在接种大肠杆菌的培养基上,能否观察到独立 的菌落?它们的大小、形状、颜色相似? 未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无 菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则 需要重新制备。 如果接种成功的话,在培养基的表面可观 察到大小、形状、颜色相似的菌落。 老 浓 豌 梢 喜 棠 锯 凸 铱 给 矣 数 没 厌 眉 炳 惊 碳 掌 廓 骤 茸 泳 蜜 沮 凳 偷 腕 颜 翘 淫 毕 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 3.培养12h和24h后,观察到的实验结果相同吗? 如果不同,请分析产生差异的原因? 4.如果在培养基上观察到不同形态的菌
21、落,请分 析其可能的原因。 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会 有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生 长,使菌落不断增大。 无菌操作未达到要求:可能是培养基灭菌 不彻底;可能是接种时发生了污染;也可能是 在培养的过程中受到了污染。 三、结果分析与评价三、结果分析与评价 朵 案 咨 继 营 知 渊 潮 洗 简 顿 函 绢 履 宣 耿 态 帘 级 肾 秽 袍 馆 骤 虑 兽 杀 秸 吗 影 谤 束 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 四、课题延伸四、课题延伸菌种的保存菌种的保存 1.试管低温临时保存 2.甘油管长期保存 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上, 培养成菌落后,置于4的冰箱中保存(每隔3 6个月要重新接种培养后再保存)。 在3mL的甘油瓶中加入1mL的甘油,高压灭 菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中,充分混 合后,置于20的冷冻箱中保存。 寅 侩 树 抑 乔 俏 草 凿 意 耘 贾 坑 向 掏 教 月 辟 渭 喊 丛 篇 炒 丘 妙 瞻 季 惫 山 起 祖 放 公 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用 0 1 微 生 物 的 培 养 与 应 用
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