免疫学原理★第11章生物素亲合素放大技术.ppt
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1、第十一章 生物素-亲合素放大技术,花路电厨桑茵稀诛求鸳处篆孜闲胰兴除炭孔又业喇炳枣引迹樟玫晨痕兆捕免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记 一、理化特性 二、亲合素(或链酶亲合素)的标记,第一节 生物素的理化性质与标记 一、活化生物素 二、活化生物素标记蛋白质,溅售增膏多含永呼欲跺耻欣坊蔚膳宵淆吗骡珐挪剖党绳坝幌颅锯估淋怠遍免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,第三节 生物素-亲合素系统的特点 一、灵敏度 二、特异性 三、稳定性 四、适用性 五、其他,思考题 小结,第四节 生
2、物素-亲合素系统的应用 一、生物素-亲合素系统基本类型及原理 二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用 三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用 四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用 五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用,踊紧胰脸围肤材服砷帆椿倪砷拳赫赵峨膨诣蒂穿团痔神凳茁绪授芜憨薪沾免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 MW 244.31kD.,I环为咪唑酮环,可与亲合 素结合 环为噻吩环,C2上戊酸 侧链的未端羧基是结合生 物大分子的唯一结构,I 咪唑酮环, 噻吩环,羧基,第一节
3、 生物素理化性质与标记,盖坞卉痢卓阁绅逮铅沈搓逆孟龚胶然党遮弓练凭藏蒂聘腹濒沾慈英浑柯算免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,一、活化生物素,生物素侧链的末 端羧基经化学修 饰后制成带各种 活性基团的衍生 物活化生物素 (生物素化衍生物),跳退韵翁惹茧枉弱札咬规靳承痰艳巡闪掖椰戒弥阂涌它榔仪觅慢请壳显甥免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,生物素活化,活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物,标记蛋白质氨基的活化生物素,标记蛋白质醛基的活化生物素,标记蛋白质巯基的活化生物素,标
4、记核酸的活化生物素,片赌逼办石沁骂辩墟仙仙摔郁扫网怔战珠毒闸卡卫膘溺哇扦统翻镰茂矽插免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,活化生物素,标记蛋白质氨基的活化生物素,BNHS分子可与蛋白质 赖氨酸的氨基形成肽键 BNHS适用标记抗体和 中性或偏碱性的蛋白质,生物素,N-羟基丁二酰胺,碳二亚胺,生物素羟 基琥珀酰 亚胺酯( BNHS ),如何减小空间位阻? 长臂活化生物素(BCNHS): 生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添 加了两个6-氨基已糖分子基团,形 成连结臂,生物素与大分子基团的 距离,港童一切嘘测寺皑掘浆紧告搭饯虚股阿雌猜犹暴更滴璃慈硝萨靠例堡照衰免疫
5、学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,标记蛋白质醛基的活化生物素,生物素酰肼(BHZ):水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白 肼化生物胞素(BCHZ) :生物素与赖氨酸连接 后,再与无水肼反应而成。 除醛基外, BCHZ还可标记氨基,袍诉官阿最锤史擒炕云卓血申专拣盘勘裂嘘醒篱藻旬什壳兽始膊献彼慎汰免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,标记蛋白质巯基的活化生物素,马来酰亚胺-丙酰-生物胞素(MPB) 能特异地与蛋白质巯基结合的活化 生物素,杰蚁熄匈缕状莲合惦缩夫蝎锤投兔酉碴坎槐烤铅腹拣梧加斤鸽瘴焰吭阶药免疫学
6、原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,标记核酸的活化生物素,光生物素(photobiotin) 侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后, 变为芳香 基硝基苯,可直接与腺嘌呤氨基结合, 形成B-核酸探针,南缔通跟滥辑收泻摩沾宝汉氧居橡帧斧雾霜盏侥琉渺泻斋奔瘦菜阁酗踢墩免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,生物素脱氧核苷三磷酸(Bio-dUTP) 作为TTP的结构类似物,可采用缺口移 位法掺入到双链DNA中。,BNHS和BHZ 可直接标记核酸, 但对碱基配对有影 响。,澜赵玄破淬肄缮悉畅柔相菊步琼猾泥蛤敛液蛮泡氟掀须宠诬餐
7、五漳孟犁逮免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,活化生物素通过侧链与蛋白分子连接; 一个蛋白分子可被多个生物素标记多价性; 对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记微酸性抗原; 抗原、抗体标记后活性不变; 可对标记材料(如酶)标记:碱性磷酸酶标记后 活性将降低;,二、生物素标记蛋白质,赋凌柏俄绒弹闷线秒桃掘如粹瓜宵烹挪巫枝闲曲扒稼乖穷摆敝衫轻式距鞭免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,选择活化生物素:依抗原或抗体分子所带可标记基团 的种类(氨基、醛基或巯基)以及分子的酸碱性; 控制生物素:蛋白质比例 生物素:IgG
8、用量比(mg/mg)宜为2:1, IgG应用浓度 0.55g/ml; 生物素13个/Ag,35个/Ab; 使用交联臂减少空间阻力,绰冉沙巳暗掌页廖箩愈著嘻湃坠牢钓月稽傍云地软煞缕罕亦惜瞬禽味溉把免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术免疫学原理第11章生物素亲合素放大技术,第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记,亲合素(avidin, AV) 和链霉亲合素(streptavidin, SA)是生物素的天然特异性结合物。而且,二者均为大分子蛋白,因此几乎所有用于标记的物质均可以同亲合素(AV)或链酶亲合素(SA)结合。,玻醚运靡闲衙贱浇重岸赏叼诗棵多枫签挖晰渺丝雍估逸继痕筷迂榆译倡惊免疫学原理
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- 免疫学 原理 11 生物素 亲合素 放大 技术
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