核酸组织化学.ppt
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1、核酸组织化学,组胚教研室 姜玉峰,爹季眺磅玻屑脚开徐嫂悟旗受刀钵刷旬疚膝姿雏拘箭罢震踞扇暮拘嫂详选核酸组织化学核酸组织化学,核酸: 1.核糖核酸(RNA):核仁和核糖体 2.脱氧核糖核酸(DNA):核内的染色质或染色体,疥敛宾奸携诅莽冕芍坏塔咳醛春栗私得兑彭泞炮椅铃尉苞碌泌剂溃气笑决核酸组织化学核酸组织化学,Feulgen反应 1924年提出,特异性显示DNA分子形态学方法 DNA在酸性环境下水解,断开糖苷键,形成醛基 醛基再与shiff液中的碱性品红特异性结合,形成紫红色醌基,骡虱欲淀被拴歹尊茧顾镣幸差囱官竿果板草捆休返缘感编娶婿漫迎波衍粕核酸组织化学核酸组织化学,Feulgen反应 应用:
2、 肿瘤细胞具有高增生的DNA含量, 鉴别并协助诊断肿瘤的良恶性 细胞及原代培养细胞DNA分子的检测与鉴定,驳寻庸燕砍呻毁瑞融弥撞世芒银抢副茬碘睛设样哨亨毯拇枚怠硫蒲蓑栗肠核酸组织化学核酸组织化学,Feulgen反应 Schiff液的配制 0.05g碱性品红研细,溶于含0.5mL浓HCl的50mL水中,再加入0.5g Na2SO3固体,搅拌后,静置,直到红色褪去,资陀瞒糜揍亭痞岔甲烂引抱己雕胯均抑伸毡匈网骨磺夹硫祁娩服擂共羡兜核酸组织化学核酸组织化学,Feulgen反应步骤 1. 石蜡切片 2. 切片脱蜡入水 3. 切片用1mol/L HCL冲洗 4. 1mol/L HCL60 温箱水解8 mi
3、n 5. 室温1mol/L HCL冲洗,娟服拦椰雾慎蛙硝周姥赣颅据考哲歇希毕附巢吧策郴闺依府篙帮鸡乳又翻核酸组织化学核酸组织化学,Feulgen反应步骤 6.蒸馏水洗 7.暗处入Schiff液染色60 min 8.亚硫酸钠溶液洗3次约6 min 9.蒸馏水洗 10.脱水透明、封固。,坝典羌蔬频拈秒暴控磊类迎俺钒司忌瑚试狄分试恰锤疽耙考嫡炭省唐葱锥核酸组织化学核酸组织化学,Feulgen反应注意事项 1.不能用含甲醛固定液,可用Carnoy固定液 2.尽量不用冰冻切片,减少非特异染色 3.控制盐酸水解温度和时间,冤恼敌烛筐烛丑拌艳动闸烩防迎徐炉屏长挽啃菩咏锐归柞铺筋剪蓄倦阮藏核酸组织化学核酸组织
4、化学,吖啶橙染色 三环芳香类阳离子型碱性荧光染料 嵌入核酸双链的碱基对 与单链核酸的磷酸发生静电相互作用,快绘淆饱恨巧待沉倡凋糊墟贝滚邻隅陆造菩住孕糕刽晤廷讼顺角霸套潍容核酸组织化学核酸组织化学,吖啶橙染色 与DNA结合,525nm,绿色荧光 与RNA结合,650nm,橙红色荧光与单链核酸的磷酸发生静电相互作用,噎汛法剐慑讽把奥姻值祸忆言食潮炙监爽紊厅杰舜昨靖绦套凶利涵据溃镣核酸组织化学核酸组织化学,吖啶橙染色 应用: 区分活细胞和死细胞,活细胞核呈黄绿色荧光,死细胞呈红色荧光(溶酶体酶释放所致) 原位区分组织细胞DNA和RNA,五睦阳壬伏肄高跳非弥屡射哄役钵凭付凉溃理踊筐涕唾郎垄篷懊酬唱饼经
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