细菌简单染色和革兰氏染色.ppt
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1、实验目的 染色原理 染色方法 实验材料 实验内容与步骤 注意事项 实验结果 擒 咎 医 感 雅 口 针 着 菏 软 慎 丢 汤 颅 陷 早 陵 沸 兑 毛 屠 西 厚 鸯 甩 碑 阜 踢 赂 我 舀 坛 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 一、实验目的 1. 学习微生物涂片,染色原理和染色的 基本操作技术,从而掌握微生物的一般染 色法和革兰氏染色法。 2. 巩固显微镜(油镜)的使用方法和无 菌操作技术。 棉 动 任 规 窒 辰 陡 佯 棉 骆 辱 拇 逞 宾 晰 恨 烧 邻 蒜 凡 屑 峰 镀 牡 丽 背 赛 清 蝶 博 亮 帧 细
2、菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 二、染色原理 由于微生物细胞含有大量水分,对光线的吸收和反射与水 溶液的差别不大,机体是无色透明的,与周围背景没有明显的 反差,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色, 使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观 察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物 组成。所以,微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解 质兼有碱性基和酸性基,在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带 正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。 经测定,细菌等电点pH在2-5之间,故在中性
3、、碱性或偏 酸性溶液中,细菌的等电点均低于上述溶液的pH值,所以细 菌带负电荷,容易与带正电荷的碱性染料结合,故用碱性染料 染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同,故可用各 种染料分别染微生物的各结构以便观察。 故 速 械 蛾 潞 站 齐 册 绊 民 驭 鞭 咒 缅 瑟 吞 疾 勉 条 莱 喂 土 被 独 阅 曹 耀 潮 溃 嫂 腿 堵 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 三、染色方法 (一)简单染色法 简单染色法又叫作普通染色法,只用一 种染料使细菌染上颜色,如果仅为了在显微 镜下看清细菌的形态,用简单染色即可。 磐 茁 焕
4、脂 阑 侈 坚 肉 飘 懈 鲍 却 晨 尖 嚎 吕 磁 兄 魂 敝 历 棺 笆 忆 励 咆 弱 饺 谊 积 焙 舀 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 (二)复染色法 用两种或多种染料染细菌,目的是为了鉴别不同性 质的细菌,所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革 兰氏染色法和抗酸性染色法。 革兰氏染色法:不仅能观察到细菌的形态,而且还 可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为 革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染 颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对革兰 氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不
5、同而造成的。 验 砒 鹰 篱 锤 学 樱 忿 仑 焕 向 统 财 搜 忙 女 疮 胃 峪 崖 盆 寐 补 硼 芹 乃 盅 畸 绷 椅 爵 互 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 四、实验材料 1. 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、 接种环、载玻片、酒精灯等。 2. 石炭酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、 95乙醇、番红(沙黄)染液 3. 菌种:表皮球菌、变形杆菌 题 皱 基 我 往 校 棵 惦 荫 则 农 蹲 译 冈 猜 踪 蒙 擅 豁 妻 隐 蹋 毯 青 抚 尚 智 嫩 呐 椅 痛 履 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰
6、氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 五、实验内容与步骤 (一)细菌的简单染色步骤 涂片干燥固定染色水洗干燥镜检 1涂片 取干净的载玻片于实验台上,在载玻片的中央滴一滴无菌 蒸馏水,将接种环在火焰上烧红,待冷却后从斜面挑取少量菌 种(表皮球菌或变形杆菌)与玻片上的水滴混匀后,在载玻片上 涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥,有时为了使之干得更快 些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精 灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间 过长,以防标本烤枯而变形。 瞻 批 涕 膜 缓 坝 慨 邑 赣 浸 拖 狮 寓
7、氧 炸 赞 趴 吃 哇 质 曝 搞 傈 鼓 幕 撼 姨 伤 锰 扁 再 吵 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 3固定 固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上, 在酒精灯火焰外层尽快的来回通过23次,共约23秒钟, 并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超 过60),放置待冷后,进行染色。 4染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫 或美蓝任选一种)一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。 5水洗 斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至 洗下的水呈无色为止。 6干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠,置
8、于室温下自然干燥 。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 玖 爪 簿 邑 酋 廉 蝴 所 咸 窟 袖 熄 受 埠 歉 柠 茫 茎 直 降 类 赛 毙 酚 烯 蕴 甘 寇 器 咳 鹤 袄 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 7镜检 用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。 (二)细菌的革兰氏染色步骤 涂片干燥固定初染水洗媒染水洗脱色 水洗复染水洗干燥观察 1取表皮球菌和变形杆菌(均以无菌操作)分别在同一张载玻 片上做涂片、干燥、固定,方法均与简单染色的相同。 2用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3加碘液媒染1min后水洗。 4斜置载玻片,滴加95
9、乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色 为止,大约需时2030s,随即水洗。 刻 矢 溶 众 蛋 弓 错 北 卵 孟 溅 庭 慑 忙 霄 诛 嘶 侵 养 辕 稻 鸡 犯 溺 佣 宙 承 翱 腾 若 钓 讯 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 5用沙黄染液复染1min,水洗。 6用吸水纸吸掉水滴,待标本片干后置显微镜下,用 低倍镜观察,发现目的物后用油镜观察,注意细菌细胞 的颜色。绘出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果。 钙 骂 雇 接 橇 劲 歪 移 告 氛 值 伪 还 叶 激 暗 茅 鸯 镶 钠 尤 垫 谍 扦 蔚 似 秃 箕 杉 泣 全
10、刚 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 六、注意事项 1革兰氏染色成败的关键是脱色时间,如脱色过度,革兰 氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌;如脱色时 间过短,革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因 此必须 严格把握脱色时间。 2 选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜,若细菌太老, 由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 蒋 呸 靴 妊 搁 室 病 奔 薯 陋 沮 么 旭 断 翟 详 肛 例 柳 枫 缺 氟 孺 攒 汗 检 色 稿 世 妖 垣 距 细 菌 简 单 染 色 和 革 兰 氏 染 色 细 菌 简 单 染
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