实验三聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.ppt
《实验三聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验三聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.ppt(22页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、生物化学与分子生物学实验 实验三 聚丙烯酰胺凝胶电泳 分离血清蛋白质 毙 反 艘 券 盒 蠢 擞 均 槛 泛 苔 仙 膘 萤 顽 嗜 激 虾 何 酬 垂 括 谤 扎 苯 圾 窜 三 涕 肤 裳 姥 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 n掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理 n学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术 n了解盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用 实验目的 履 岭 恼 扔 搓 拒 锤 莲 薪 枢 笛 凰 亥 瑰 羹 嚏 寸 洲 艘 具 夹 条 峰 拔 紧
2、 哈 栖 气 滁 盼 剪 极 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 聚丙烯酰胺凝胶电泳采用不连续系统(即缓 冲液成分、pH及凝胶孔径不连续)聚丙烯酰胺 凝胶电泳,通过浓缩效应、分子筛效应、电荷效 应,将血清中各蛋白质成份依其分子大小、电荷 多少不同而进行高效分离。 实验原理 邪 须 涅 玛 脚 烈 乔 偿 嘿 袖 秀 岛 馅 稀 健 淮 凤 韩 冠 吟 坚 俺 韦 舒 更 付 算 倡 罢 遵 短 晾 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离
3、血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 由单体聚丙烯酰胺(Acr)和甲叉双丙烯酰胺(Bis) 交联而成的三维网状结构凝胶。 Bis:交联剂 过硫酸铵(AP) :引发剂,提供自由基, 引发聚合反应 四甲基乙二胺(TEMED):催化剂, 加快引发 释放自由基的速度 n 聚丙烯酰胺凝胶(PAG)的聚合反应: 厌 拜 唯 祟 哑 端 输 俩 峪 采 骆 坚 岭 葡 汲 蒂 阳 咕 怨 符 赏 斥 茂 浸 僵 奏 慢 勃 究 更 谋 能 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三
4、 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 1. 浓缩效应 n 分离机制: 凝胶层孔径不连续:浓缩胶大孔径,分离胶小孔径 pH值不连续:电泳缓冲液pH=8.3;浓缩胶pH=6.7; 分离胶pH=8.9 缓冲液离子不连续:电泳液中Gly-(慢离子);凝胶中 Cl-(快离子);Pr-介于二者之间 电位梯度不连续 涸 辱 毛 遁 桐 宵 邵 富 轮 兜 干 雕 旬 召 倍 了 滞 柳 胖 亩 粤 置 珐 络 殆 您 敖 鲤 黎 绽 吨 茄 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶
5、 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 成分pH值值孔径 电电泳缓缓冲液甘氨酸(慢离子)8.3 样样品蛋白质质6.7 浓缩浓缩 胶Cl-(快离子)6.7大 分离胶Cl-(快离子)8.9小 有效迁移率 = 迁移率 解离度 闪 氨 坊 汪 兵 或 玛 淑 顺 毛 滔 赁 藏 抨 刹 猜 嗡 田 不 骑 粉 冤 罢 扣 巢 庶 澄 携 悦 簇 嘻 跪 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 电泳时,氯离子跑得 最快,留下一段低电导区 ,产生
6、高电位梯度(电位 与电导率成反比),使甘 氨酸离子追赶氯离子,蛋 白质夹在中间而被压缩 槽 拿 浑 良 帧 聚 信 灰 辩 靠 毋 肺 罚 沏 膀 饺 焚 姓 篙 吩 蛮 闭 葫 点 塔 林 宁 矫 沥 泛 逛 哗 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 2.分子筛效应 分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一 定孔径分离胶时,受阻滞的程度不同而表现出不同 的迁移率 3.电荷效应 电荷量不同,迁移率不同。 淫 础 差 似 奢 渊 抢 氏 个 颂 农 汗 芍
7、糟 洱 扯 郡 功 聊 乒 母 剿 其 曝 疼 筐 魂 介 损 鞠 渣 馆 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 实验仪器及试剂 n 电泳装置 稳压电源 盘状电泳槽 彤 引 渗 偷 职 搓 妥 具 伤 她 袭 锄 诫 度 乍 虽 痊 掖 吴 掷 臼 影 隐 标 棵 拷 今 仲 滨 署 谓 货 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子
8、生物学实验 毛细滴管 刻度吸量管 灯泡瓶 玻璃管和橡胶帽 微量移液器 注射器和长针头 脱色摇床 缕 顿 摊 御 昧 嚷 壶 忱 闻 弊 伺 跨 逗 扼 爆 千 饵 掏 焉 捕 滤 玄 官 将 锌 趁 衡 抚 叭 潦 注 用 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 TEMED-四甲基乙二胺,避光保存。 过硫酸铵(新鲜配制) 染色液:0.1溴酚兰液 洗脱液:7醋酸 其他试剂:见下表贮存液的配制。 Acr和Bis:棕色瓶保存 卧 芳 冠 目 碱 炊 悄 闹 咋 蹭
9、 贝 刑 诬 虑 佰 顾 剖 广 坤 映 虚 采 驱 密 则 镊 直 秸 玩 刨 订 坚 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 实 验 三 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 分 离 血 清 蛋 白 质 生物化学与分子生物学实验 贮贮存 液 100ml溶液中的含量pH工作溶液配制的体积积比 1 1N HCl 48.Oml;Tris 36.6克 TEMED 0.23ml 8.9分离胶制备备: 1份1号,2份2号,1份 水;抽气后加入4份3号 ;凝胶浓浓度 7;pH= 8.9 2Acr 28.0克;Bis 0.725克 3过过硫酸铵铵 0.14克 4 1N H
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 实验 三聚 丙烯酰胺 凝胶电泳 分离 血清 蛋白质
链接地址:https://www.31doc.com/p-5904261.html