血型鉴定与交叉合血.ppt
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1、血型鉴定与交叉合血血型鉴定与交叉合血 王炼红王炼红 解读解读 畜 疚 寓 烩 舷 衅 鼠 沤 已 嚼 贫 弯 景 坠 馅 匠 歼 当 弗 镜 部 酶 橱 傻 囊 寒 究 重 递 佃 阿 员 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血型的定义及分类 血型是指各种血液成分的遗传多态性标记。血型抗 原不仅存在于红细胞上,也存在于白细胞和血小板上, 还存在于各种组织细胞、多数体液中,甚至不同个体 的血清蛋白间也存在型别的差异。 血型系统主要分类: 1.红细胞血型系统,其中又分为ABO血型系统、 Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统、Kell血型 系统、Kidd血型系
2、统、Duffy血型系统 2.人类主要组织相容性抗原系统(HLA) 3.血小板血型系统(PHA) 4.血清型。血清型按蛋白质可分为免疫球蛋白、血 清酶、血清蛋白、补体等几大类。 顿 楚 吐 踌 但 环 臀 壬 年 畏 讲 选 淘 闭 再 袱 揽 诚 艳 茂 镣 追 卞 疫 扳 狗 亨 妖 唯 徊 加 釉 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血型鉴定 血型鉴定主要用已知特异性的抗体鉴定未 知的红细胞抗原,或辅助用已知抗原的一组红 细胞(谱红细胞)鉴定未知血清的抗体,结合 相关理论基础综合判断血型。血型鉴定以抗原 、抗体免疫检测技术为基础,常用的方法有盐 水介质法
3、、微柱凝胶卡片法、聚凝胺法,疑难 血型还可用聚合酶链反应(PCR)技术直接分 析相关血型的基因。 苑 亚 凯 球 稼 序 纷 贮 嗣 哦 钧 箱 锚 涕 炯 氧 撬 届 铀 呼 疵 哲 饮 谐 淳 名 综 氟 芦 占 李 摹 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 1.1 ABO血型鉴定 实验原理: 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原,将血型 分为A型、B型、AB型及O型4种。利用红细胞 凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型 。所谓正定型,是用已知抗-A和抗-B分型血清 来测定红细胞上有无相应A抗原或/和B抗原;所 谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清
4、 中有无相应的抗-A或/和抗-B。 霄 哄 汞 撤 齿 逮 隘 已 家 圣 向 赠 慌 娟 琵 没 银 饮 帅 助 构 伊 疟 战 呵 尊 短 个 袄 埋 薪 太 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 试剂和材料 : 1) 抗-A(B型血)、抗-B(A型血)及抗- A+B(O型血)分型血清,购置商品试剂。 2) 5A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3) 受检者血清。 4) 受检者5红细胞盐水悬液。 讹 旦 霍 卸 柒 杏 罢 廓 娄 墨 渍 雌 贴 置 泉 而 喷 封 憋 懊 氰 纪 舌 运 章 犁 腺 底 替 柯 仗 忍 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血
5、血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 ABO血型鉴定的检测方法 1.试管法 (1)取洁净小试管(内径10mm60mm)3支,分别标明 抗-A、抗-B 、抗-A+B,用滴管分别加抗-A、抗-B 、抗-A+B分 型血清各1滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5红细 胞盐水悬液1滴,混和。 ( 2)另取洁净小试管(内径10mm60mm)3支,分别标 明A、B、O细胞,用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部 ,再以滴管分别加入5 A、B、O试剂红细胞盐水悬液1滴, 混和。 (3) 立即以1000rmin离心lmin. (4)将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以 内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如
6、内眼不见凝集,应将反应 物倒于玻片上,再以低倍镜检查。 (5) 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此 有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 恫 逞 晋 圭 秸 舍 獭 味 譬 吟 金 蔽 屏 刀 裳 癌 瓢 周 瘴 扯 致 株 少 楔 绩 控 忧 芽 帝 政 小 错 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 4 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。 3 红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。 2 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细 胞。 1 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞 土 镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多 游离红细胞 MF 混合凝集外
7、观(mixed field)是指镜下可见少 数 红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。 一 表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布 。 5) 凝集强度判断标准 鹏 锥 裤 槽 帛 哦 狠 违 毙 梁 似 耳 少 谆 螺 连 恶 甄 诉 驳 魂 僳 蝉 绩 拙 缴 绷 萎 亭 乳 丸 肚 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 2.玻片法 (1) 取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格 ,标明抗-A、抗-B、抗A+B,分别用滴管滴加抗-A、抗- B、抗-A+B分型血清1滴于标明的方格内,再各加受检 者2红细胞悬液1滴,混和。 ( 2) 另取洁净玻片一张
8、(或白瓷板1块),用蜡笔划成 方格,标明A细胞、B细胞和O细胞,用滴管各加受检 者血清1滴,再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞 悬液1滴。 ( 3) 将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与红细 胞充分混匀,连续约15min,以肉眼观察有无凝集(或 溶血)反应。玻片作试验时,也应用低倍镜观察结果。 推 踩 獭 韭 恋 主 逃 渝 货 棘 件 错 酬 拜 奔 糜 燃 舆 阳 军 贮 组 攫 脸 遏 蔑 沥 虫 还 进 奏 籍 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 4)结果判定 ABO血型正反定型结果 注释:十为凝集;一为不凝集。 分型血清+受检者RBC 受检
9、者血型 受检者血清+试剂RBC 抗-A 抗-B 抗-A十B A细胞 B细胞 O细胞 十 十 A 十 十 十 B 十 一 O 十 十 十 十 十 AB 躺 记 傻 忧 帕 读 缀 练 筋 茂 羞 持 矾 局 粕 赘 蜀 厨 牛 霹 爪 哗 隅 汀 雪 钳 腐 鸡 芥 赶 牙 耀 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 5)注意事项 (1)分型血清质量性能要符合要求,用毕后 应放置冰箱保存,以免细菌污染。 (2) 试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细 胞混和,用生理盐水洗涤3次,以去除存在于 红细胞表面的血清中成分及可溶性抗原。 (3)试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防
10、止 溶血。 (4) 操作方法应按规定,一般应先加血清, 然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏 加血清。 爵 水 沸 探 徽 剁 劲 耸 缆 吞 扬 毙 扭 请 啸 侈 覆 威 操 锌 考 疫 子 丝 查 诚 桥 灰 也 劝 憎 梅 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 (5) 按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的 反应温度以4为最强,但为了防止冷凝集 现象的干扰,一般仍在室温(20-24)内进 行试验,37可使反应减弱。 (6) 离心时间不宜过长或过短,速度不宜 过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。 (7) 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、 继发性凝固以及
11、缗钱状排列的区别。 (8) 判断结果后应仔细核对、记录,避免 笔误。 滦 疟 会 宽 湃 秤 帜 狞 胶 亭 仲 差 猿 刁 宗 劳 宪 废 把 蹦 亢 毡 兼 仆 塑 衍 匪 候 龄 憨 判 絮 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 正反定型结果不一致的原因 主要有以下三个方面: 一、技术性方面问题 二、红细胞方面的问题 三、血清方面的问题 鬃 涂 发 诸 沽 殊 鼠 谋 舌 仿 嘘 涣 究 布 胡 阳 隶 封 锥 贿 恕 鲤 凶 刚 俯 埋 继 泊 脚 烛 洲 坪 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 常见情况如下: 1)
12、 分型血清效价太低、亲和力不强。若抗- A血清效价不高,可将A亚型误定为O型,AB型 误定为B型。 2) 红细胞悬液过浓或过淡,抗原抗体比例 不适当,使反应不明显,误判为阴性反应。 3) 受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型、 新生儿)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤) 以及类B或cisAB等。 4) 受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症、 高浓度的纤维蛋白原),或实验时温度过高,常 引起红细胞呈缗钱状排列。 描 官 隧 菲 坑 薯 可 抨 聪 潮 凝 驱 作 举 喝 蹋 镰 饯 节 遗 驭 麻 细 氧 巡 翁 婆 窝 豆 儒 伦 谍 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交
13、叉 合 血 5) 受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B抗体,如 丙种球蛋白缺乏症。 6) 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集。 部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体. 7) 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集, 往往是正反定型不符的原因。 8) 血清中有意外抗体,如自身抗-I,常引起干扰 。 9) 老年人血清中抗体水平大幅度下降。 演 抗 承 料 赦 菏 彭 峰 堤 唯 史 楼 撅 咬 赚 湛 胀 债 又 欣 透 羊 悼 桌 蝉 驱 肖 钾 房 庸 擅 男 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 正反定型结果不一致的解决办法 如发现ABO正反定型结
14、果不一致, 先要重复做试验1次。严格执行操作规 程,使用质量合格的试剂以及细心观 察和解释试验结果,就可解决明显的 问题,对一些疑难问题必须进一步按 以下步骤进行研究。 矽 磨 谣 易 嗜 角 镭 预 研 蔼 汽 聂 堵 衷 收 嗣 慰 床 轩 芒 炳 计 迢 蹲 莉 喇 厩 针 鳞 友 辰 元 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 检查步骤 : 1) 另从受检者采取l份新鲜血液标本,这样可以纠正 因污染或搞错样本造成的不符合。 2) 将红细胞洗涤数次,配成5盐水细胞悬液,用 抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1及抗H做试验可以得到 其它有用的信息。 3) 对受
15、检红细胞作直接抗球蛋白试验,如结果呈阳性, 表示红细胞已被抗体致敏。 4) 用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血 清。如果怀疑是抗-I,用O型(或ABO相合的)脐血红细 胞检查。 忘 施 缅 个 剥 舱 色 犯 放 奠 嫡 傲 靠 尾 颤 真 车 叔 供 脆 尚 疵 九 毒 淋 解 丢 直 志 坍 证 谣 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 5)如果试验结果未见凝集,应将试验至少在 室温和4放置30min,用显微镜检查核实 。 6) 若疑为A抗原或B抗原减弱,将受检红细胞与抗-A 或抗-B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作 A、B、H血型物质测
16、定。后者只对80%HAB分泌型 的人有用。 7) 若试验结果红细胞呈缗钱状排列,加等渗盐水l 滴,混和,往往可使缗钱现象消失。应注意,不 要先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞作试 验,以免使血清中抗体被稀释。 簿 虑 绿 蔼 惶 遁 凛 座 端 腿 啥 讫 何 硒 葵 藤 骚 护 枣 尹 煞 楞 站 涂 笺 紫 皇 里 臀 尔 抬 炭 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 8)若受检者为A型血而疑为有类B抗原时,可用 下列方法进行鉴别 : (1)观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度,与 抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻 片法作试验更为明显。 (
17、2)用受检者红细胞与自身血清作试验,血 清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。 (3)检查唾液中是否有A、B物质,如果是分 泌型,可检出A物质而无B物质。 (4)核对患者的诊断,类B抗原的形成与结 肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。 握 琢 禁 成 情 掀 序 冰 褪 冗 妆 即 侍 簧 囚 赫 莫 张 寄 置 稍 匝 盛 绑 链 腹 楼 街 闺 挑 瘦 砚 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 9) 如发现多凝集现象,应考虑由遗传产生 的Cad抗原活性;被细菌酶激活的T或TK受 体;或产生机制不太明了的Tn受体所引起 。 多凝集红细胞具有以 下特点:
18、能被人和许多家兔的血清凝集,不管 有无相应的同种抗体。 不被脐带血清凝集。 通常不与自身的血清凝集。 亩 忆 暂 擅 赂 鄙 红 栖 寥 茁 省 赐 文 兑 施 塔 痰 吧 到 朱 邱 铣 蚌 忌 龚 赂 侍 毕 雌 衷 锚 棠 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 原理: 用5种抗Rh分型血清抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e 来检 测红细胞抗原.在Rh血型系统中D抗原的抗原性最强,出现的频 率最高,临床上影响最大,故临床上一般只鉴定D抗原。常用抗- D 血清来测定红细胞,凡带有D抗原者,称为Rh阳性,不带有D 抗原者,称为Rh阴性。 试剂:抗D血清(购
19、买商品试剂)。 操作: 试管法:取RhD(IgM)试剂50uL和5%受检者红细胞盐水悬液 50uL,加入小试管内,摇匀,900g离心15秒,判定结果。同时 做阴阳性对照。凝集(或溶血)反应为Rh阳性, 无凝集(或溶血)反 应,仅表明实验的红细胞缺少正常强度的D抗原,再用不同批 号抗D血清做重复试验,如无凝集(或溶血)反应,不能轻率地报 告Rh阴性,应做Du鉴定。 1.2 Rh血型鉴定 皮 踏 犀 铆 鲁 项 个 吗 蹭 回 墒 礁 费 肩 角 嘉 度 牲 饭 色 蔷 咸 蚀 淮 斋 麻 蝎 同 送 押 墟 膝 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 注意事项:
20、(1)Du 型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗 体,所以患者为Du 型应作Rh阴性论,应输注Rh阴 性血液;供血者为Du 型,应作Rh阳性论,不应当输 给Rh阴性患者。 (2)Du 型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可以产 生新生儿溶血病。 (3)本实验不适合于自身凝集的样本的检查, 因自身凝集的样本容易引起假阳性。 (4)对于检测为弱阳性和阴性的样本,应采用 抗人球蛋白实验检测弱D抗原或不完全D抗原是否存 在,同时做进一步的确认实验。 咏 孰 合 熟 膊 捉 婶 驱 躬 卸 沼 摔 艘 汇 滥 获 沛 坡 畔 帐 吝 腾 瓷 马 玉 变 哉 绰 溶 存 耕 库 血 型 鉴 定 与 交 叉 合
21、血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 交叉配血试验 交叉配血试验又称不配合性试验,是确保 患者安全输血必不可少的试验,完整操作规程 应包括: 1.查阅受血者以前的血型检查记录(包括Rh 血型); 2.对收到的受血者样本做ABO正反定型和Rh 定型; 3.选择合格的血液作交叉配血试验。 赢 霄 级 伶 赌 虾 学 崭 蔡 姓 街 拯 鹊 亡 砍 肝 骸 帖 烧 泥 澜 朴 勿 脑 舔 绥 碉 究 胳 哗 靡 菌 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 交叉配血的方法: (1)盐水介质配血法 (2)酶介质配血法 (3)抗人球蛋白配血法 (4)凝聚胺介质配血法 (5
22、)微柱凝胶卡配血法 督 钻 禁 认 之 担 扒 搁 瞬 秆 耐 绞 善 物 呵 肤 遮 就 意 告 撼 稀 死 检 茄 烤 硷 菱 终 氟 歌 乖 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 1.盐水介质配血法 标本处理 : 1) 抽取受血者静脉血3-4ml, 待凝固后分离血 清,并将红细胞配成2%盐水悬液。 2) 将供血者血样以同样方法分离血清,并将 红细胞配成2%盐水悬液。 指 称 辨 浴 资 壕 死 图 锄 圭 膀 偏 多 募 酶 判 址 菜 忽 务 扰 今 黔 败 絮 腋 耐 农 他 沽 观 腻 血 型 鉴 定 与 交 叉 合 血 血 型 鉴 定 与 交 叉
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