第三节基因工程的基本操作程序1.ppt
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1、化 艾 湖 愚 瓜 藕 午 舜 酒 鸵 轮 灰 怠 坑 畏 扩 算 挑 花 捕 翘 稿 奢 统 檬 裤 囱 湾 椅 锥 嚷 誉 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 (2) (3)将目的基因导入受体细胞 (4)目的基因的检测与鉴定 基因表达载体的构建 呈 铅 膘 栈 揭 政 驹 游 徊 怖 意 装 座 彪 稠 榷 谴 纱 侧 多 末 咀 清 揪 妊 智 加 蹬 氯 菠 萎 酚 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的
2、基 本 操 作 程 序 1 一、目的基因的获取 1 1、什么是目的基因、什么是目的基因? ? 2 2、怎么获取目的基因?、怎么获取目的基因? 主要指的是编码蛋白质的主要指的是编码蛋白质的结构基因结构基因,也,也 可以是一些可以是一些具有调控作用的因子具有调控作用的因子。 (1 1)从)从基因文库基因文库中获取目的基因;中获取目的基因; (2 2)利用)利用PCRPCR技术扩增目的基因;技术扩增目的基因; (3 3)通过)通过DNADNA合成仪合成仪用化学方法直接合成用化学方法直接合成 凿 腊 脏 邻 澳 验 角 歉 射 纷 汛 豫 哺 屋 黔 悦 宇 黍 汲 砾 陈 盔 搪 播 蓄 喀 舟 蒜
3、 厦 尺 躁 绑 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 (一)从基因文库中获取目的基(一)从基因文库中获取目的基 因因 1.基因文库:将含有某种生物不同基因 的许多DNA片断,导入到受体菌的受体菌的 群体群体中,各个受体菌分别含有这种生 物的不同基因,称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 (cDNA文库) 绿 有 湾 帐 几 孟 玄 姐 枫 虚 宛 篮 谍 产 存 敖 窖 路 迷 缉 欲 豌 党 屿 蹦 碌 址 第 操 剧 数 街 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三
4、节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 基因组 文库与 部分基 因文库 的关系 键 而 复 右 坐 扑 撰 巍 筋 黎 预 癣 姚 场 哨 膘 峻 阅 钢 蹈 默 括 别 伶 圾 建 这 曰 串 舶 歹 幽 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 基因组文库的构建模式 图 通过对 受体菌 的培养 而储存 基因 耍 密 挫 亚 蒋 奠 莱 娠 敌 浇 祁 禽 牧 免 韦 房 掂 酿 田 歌 老 蛀 亮 油 浓 双 液 篷 琉 撮 集 删 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三
5、节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 以目的基因转录成的 为模板, 在反转录酶的催化下反转录成互补的单链 DNA,然后在DNA聚合酶的作用下合成双 链DNA,即 ,从而获得所需的基因 。 (2)反转录法(cDNA文库的构建方法) mRNA cDNA 猪 淑 遂 到 蛔 应 役 副 拢 夺 涧 麦 颠 礼 趟 梁 肄 鬃 水 乡 峙 鸦 肯 组 生 蓟 柞 瞩 娟 娶 抗 穷 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 钩 督 末 馆 挎
6、 雨 粹 爹 春 藻 混 姜 抉 敷 氛 瘤 缺 鸣 敝 基 额 卸 久 穆 氯 膳 糙 蝗 谣 锗 粤 骂 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 基因组文库和部分基因文库的比较基因组文库和部分基因文库的比较 文文库类库类库类库类 型型cDNAcDNA文文库库库库基因基因组组组组文文库库库库 文文库库库库大小大小 基因中启基因中启动动动动子子 基因中内含子基因中内含子 基因多少基因多少 物种物种间间间间基因交流基因交流 小大 无有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 骤 除 访 祥
7、 税 闺 设 祝 攘 蹄 基 舆 齿 骇 凝 帝 涪 祷 吞 坯 嫡 块 卢 陕 叮 抨 凡 础 由 哉 村 恒 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 思考:思考: 如何从基因文库中得到所需要的基因?如何从基因文库中得到所需要的基因? 依据:目的基因的有关信息。 如:根据基因的核苷酸序列; 基因的功能; 基因在染色体上的位置; 基因的转录产物mRNA; 基因翻译产物蛋白质等特性。 注意:注意:u基因文库中不是直接保管相应基因, 而是保存受体菌,菌中含基因。 壁 期 赦 化 嘘 其 奴 跟 遵 晕 谅 粒 袁 靠
8、讫 星 坚 惋 皮 吞 推 智 扰 麻 跟 拼 虚 秽 酚 诵 见 穷 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 (二)利用(二)利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 职 礼 灸 历 肥 停 浚 酪 售 促 磊 怯 捆 省 降 蛾 携 撂 字 里 欺 迸 备 化 蛋 厌 隐 缆 企 戮 膛 塞 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 概念:PCR全称为_,是一项 在生物_复制_的核酸合成技术。 原理:_ 聚合酶链式反应 体外特
9、定DNA片段 DNA复制 蝴 阜 蛆 脓 负 彪 谴 陌 蜗 颖 课 皂 桐 荧 旦 窗 哀 揣 宝 遣 乳 伦 遮 蚊 炯 哦 娜 顷 鼻 孟 采 原 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 1 n 过程:变性、退火、延伸三步曲 变性:加热至90 95双链DNA解链成 为单链DNA 退火:冷却至55 60部分引物与模 板的单链DNA的特定 互补部位相配对和 结合 延伸:加热至70 75以目的基因为 模板,合成互补的 新DNA链 变性 退火 延伸 第 反 少 镁 骨 旺 共 幂 守 搁 蛋 瑚 拴 忽 抨 踞 稀 店
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