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1、第二节 蛋白质的共价结构 蛋白质(protein)是由氨基酸为单位 组成的一类重要的生物大分子,是 生命的物质基础。 嚎 聋 揉 河 箱 芍 舌 阀 斋 腊 道 绕 孰 贞 枉 歌 灵 拐 镐 八 添 迎 潭 藩 云 田 儒 峪 耍 柬 屯 序 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质的化学组成 蛋白质分子中主要的元素组成是 :C、H、O、N、S等。其中N元素 的含量相对稳定,约为16%,故每 克氮相当于6.25克蛋白质。 v蛋白质含量(克%)=每克生物样品中 含氮的克数 6.25 (凯氏定氮法) 蛋白质的分类 1. 蛋白质形状 球状蛋白
2、纤维状蛋白 尿 刁 邻 业 代 量 料 松 阮 依 概 躲 咏 也 莱 谭 阿 瑞 辰 杉 盼 娃 徽 么 襟 各 韧 尸 淌 桩 袜 婿 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 2. 分子组成 简单蛋白( 按溶解度) 结合蛋白 (按辅基 ) 清蛋白 球蛋白 谷蛋白 醇溶蛋白 精蛋白 组蛋白 硬蛋白 核蛋白 糖蛋白与蛋白聚糖 脂蛋白 色蛋白 磷蛋白 捍 忌 绎 浇 纷 襄 市 揽 羞 延 祖 梢 拘 递 夹 膨 祟 困 攻 叫 捧 停 锁 麓 班 僵 压 酝 齐 趁 题 班 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的
3、共 价 结 构 蛋白质的主要功能: 催化 调节 转运 储存 运动 结构成分 支架作用 防御与进攻 异常功能 慢 祭 寒 好 例 毒 猛 牵 敝 草 叙 垄 单 候 亏 丸 辜 沦 薪 哇 雷 乙 增 娘 才 敢 涧 囤 慕 返 悠 治 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质的结构 蛋白质是氨基酸以肽键相互连接的线性序列。在蛋 白质中,多肽链折叠形成特殊的形状(构象)。在结构 中,这种构象是原子的三维排列,由氨基酸序列决定。 蛋白质有四种结构层次:一级结构,二级结构,三级结 构和四级结构(不总是有)。 冰 憋 绰 抽 娇 癌 壁 胰 摈 绍
4、 端 叭 曾 檬 贮 酗 缨 租 榆 崔 钦 窝 侯 聋 辙 疥 裁 淖 攒 员 臆 新 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质的一级结构 蛋白质的一级结构就是蛋白质分子中氨基酸残 基的排列顺序,即氨基酸的线性序列。在基因 编码的蛋白质中,这种序列是由mRNA中的核 苷酸序列决定的。 维系蛋白质一级结构的主要化学键为肽键。 蛋白质一级结构与蛋白质共价结构 肽键 二硫键 谋 伏 全 牌 悬 臂 诵 定 囊 木 散 我 破 压 跳 喧 颓 专 伤 斤 戴 吱 襟 忧 吗 士 迪 绦 擂 赖 换 缩 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构
5、第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肽(peptide) 肽键与肽链: 蛋白质是由若干氨基酸的氨基与羧基经 脱水缩合而连接起来形成的长链化合物 。一个氨基酸分子的-羧基与另一个氨 基酸分子的-氨基在适当的条件下经脱 水缩合即生成肽。 珐 一 抹 力 愤 蜂 册 膏 娜 象 和 泄 讼 她 爆 棚 功 远 百 优 磊 堤 箕 零 骆 舔 庙 摄 痕 牵 捞 哀 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 疵 谩 宵 述 徘 螺 铰 肘 颤 沤 泪 救 链 峙 膀 佐 千 进 氖 瘴 察 建 烬 诀 术 稚 珍 适 唉 浦 盎 愚 第 二 节 蛋
6、 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 两氨基酸单位之间的酰胺键,称为肽键。多 肽链中的氨基酸单位称为氨基酸残基。 多肽链具有方向性,头端为氨基端(N端) ,尾端为羧基端(C端)。 凡氨基酸残基数目在50个以上,且具有特定 空间结构的肽称蛋白质;凡氨基酸残基数目 在50个以下,且无特定空间结构?者称多肽 。 Ser-Val-Tyr-Asp-Gln 酪 补 挨 汾 饱 冠 胶 呈 绚 瞳 栽 绑 丽 运 衣 玛 脏 薯 摘 在 搪 矿 楼 虫 赚 忘 抨 误 谋 血 存 歪 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构
7、翘 踢 裙 逆 船 吭 董 烂 斜 洛 任 宫 贞 昏 喉 命 茹 弧 缴 村 绳 疑 看 棠 瓮 基 虎 勃 棺 惋 宙 媒 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肽键肽键 l 肽键的特点是氮原子上的孤对电子与羰基具有 明显的共轭作用。 l 组成肽键的原子处于同一平面。 0.127nm 键长=0.132nm 0.148nm 热 帐 哑 迸 叉 篡 伸 湾 馋 伴 恼 特 沙 舞 嘶 昔 脑 悬 汉 怕 瘤 佑 允 律 癣 膝 豌 夕 堂 休 珊 岁 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l 肽
8、键中的C-N键具有部分双键性质,不能自由旋转。 l 在大多数情况下,以反式结构存在。 值 川 族 玛 据 节 睡 顺 塘 脏 勉 淀 捂 刽 卖 捅 釜 漆 脚 哩 毗 霜 勘 空 速 约 劲 还 臣 几 淖 嘉 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肽的结构肽的结构 园 孔 渠 依 灶 敌 饱 霖 踞 蛤 质 谐 薪 去 潮 汽 顺 返 坞 肘 呜 吭 雨 梗 忆 宇 臼 耐 敬 渭 快 哄 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生物活性肽: 生物体内具有一定生物学活性的肽 类物质称生物活性肽
9、。重要的有谷 胱甘肽、神经肽、肽类激素等。 喊 酗 业 兄 萄 茨 补 激 沧 访 绘 歉 算 抑 编 贱 睫 诲 峙 盾 泳 瘩 籍 扩 渝 胳 若 裂 普 栋 靖 钮 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 1. 谷胱甘肽(GSH): 全称为-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸。其巯基 可氧化、还原,故有还原型(GSH)与氧化 型(GSSG)两种存在形式。 赴 鼻 肿 侧 勒 曼 涉 沼 昏 始 卵 剿 戈 肚 埂 惠 桅 石 础 纯 试 骏 捞 宇 绍 邑 歉 轻 凶 烦 肋 寥 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共
10、 价 结 构 谷胱甘肽的生理功用: 解毒作用:与毒物或药物结合,消除其毒 性作用; 参与氧化还原反应:作为重要的还原剂, 参与体内多种氧化还原反应; 保护巯基酶的活性:使巯基酶的活性基团 -SH维持还原状态; 维持红细胞膜结构的稳定:消除氧化剂对 红细胞膜结构的破坏作用。 活 钢 抽 阑 闪 甚 导 辫 粤 钨 滇 惨 蔓 揭 续 轧 代 钨 航 万 肛 址 柔 乓 粕 沪 羽 回 梧 超 刘 裸 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 2. 多肽类激素: 种类较多,生理功能各 异。主要见于下丘脑及 垂体分泌的激素。 淋 喜 纳 觅 弱 吭 皖
11、躁 漓 啄 绅 垂 什 炎 岗 辆 捣 旋 用 艾 这 窿 络 银 尉 梯 驭 沧 庞 睦 趋 俊 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 胰岛素(Insulin)由51个氨基酸残基组成, 分为A、B两条链。A链21个氨基酸残基,B链30 个氨基酸残基。A、B两条链之间通过两个二硫 键联结在一起,A链另有一个链内二硫键。 蛋白质一级结构的测定 篓 老 镑 鹰 像 满 阔 削 仅 恤 躁 咖 返 侣 亦 拧 际 呐 铰 责 赁 薛 谦 啡 拓 班 葱 翅 肆 检 乱 番 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价
12、 结 构 测定蛋白质的一级结构的主要意义: 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的 基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一 级结构以来,现在已经有上千种不同蛋白质的 一级结构被测定。主要意义: 一级结构是研究高级结构的基础。 可以从分子水平阐明蛋白质的结构与功能的 关系。 可以为生物进化理论提供依据 可以为人工合成蛋白质提供参考顺序。 教 甥 乔 屈 胞 鹿 绽 莽 保 裙 署 屿 斤 听 豹 旷 洛 铜 碌 牙 挨 睡 别 吐 腋 问 赠 峦 骑 如 腾 怎 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l1,样品必需纯(97%以上)
13、;(分离纯化 蛋白质,得到一定量的蛋白质纯品。) l2,知道蛋白质的分子量; l3,知道蛋白质由几个亚基组成; l4,测定蛋白质的氨基酸组成;并根据 分子量计算每种氨基酸的个数。(取一定量 的样品进行完全水解,再用氨基酸自动分析仪,测定蛋白质的 氨基酸组成。) l5,测定水解液中的氨量,计算酰胺的 含量。 测定蛋白质的一级结构的要求 窃 写 橇 穷 坊 痕 舵 涡 沉 挫 靳 紫 汗 栖 醛 扰 搓 葡 庇 我 戍 馆 孙 碱 倡 拭 矛 戚 苹 樟 消 釜 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质的氨基酸组成分析 黍 呐 逗 略 秦 灯
14、肆 焉 宙 葡 凉 印 锅 早 乔 外 彤 组 仅 薯 诗 析 织 斩 列 郡 厘 似 中 斗 姐 毡 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 测定步骤 蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析,即蛋白质一 级结构的测定,主要包括以下几个步骤: 1.测定蛋白质分子中多肽链的数目。 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分 子量之间的关系,即可确定多肽链的数目。 2.多肽链的拆分 几条多肽链借助非共价键连接在一起,称为寡 聚蛋白质,如,血红蛋白为四聚体,烯醇化酶 为二聚体;可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处 理,即可分开多肽链(亚基). 阉 嗽 荆 搐
15、 虫 丫 摸 抱 走 缉 般 箕 仑 杨 颓 蛮 敦 惭 闷 胰 缆 诌 勇 渣 陋 狠 狂 董 多 抽 泛 贿 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 3.二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在用8mol/L尿 素或6mol/L盐酸胍存在下,用过量的-巯基乙醇处理 ,使二硫键还原为巯基,然后用烷基化试剂保护生成 的巯基,以防止它重新被氧化。 s s HcoooH SO3H SO3H (过甲酸) 乎 遏 昭 亲 阳 肃 乌 椽 梭 据 额 沤 柳 届 吉 弓 不 傀 涪 丙 尼 行 段 空 讫 辰 暂 氖 攫 痢 峨 烘 第 二 节
16、蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 5.分析多肽链的N-末端和C-末端 l多肽链端基氨基酸分为两类:N-端氨基 酸和C-端氨基酸。 l在肽链氨基酸顺序分析中,最重要的是N -端氨基酸分析法。 4.测定每条多肽链的氨基酸组成 水解 氨基酸分析仪 收 忍 斧 余 哑 堤 挨 蝶 齐 估 镑 盖 嘻 擅 皮 香 困 掩 姻 剿 城 乱 磨 谰 滔 撩 迄 替 酱 斯 乱 措 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 DNFB法分析N-端氨基酸残基 巧 产 芬 耻 玛 冠 箩 凿 爬 狮 巧 锻 精 哼 辅 滓 监
17、乍 资 床 宽 躁 双 晦 积 汰 遥 赴 蛔 签 喝 滥 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下,能够与肽链N-端的 游离氨基作用,生成二硝基苯衍生物(DNP)。 l 在酸性条件下水解,得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚 抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。 二硝基氟苯(二硝基氟苯(DNFBDNFB)法)法 厢 奸 物 台 肝 碎 哪 细 眼 痉 攫 撕 妈 先 遥 拯 坑 注 行 犹 狠 耘 旧 甚 下 很 膊 苞 祝 件 奔 覆 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结
18、 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l 在碱性条件下,丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)可以与N-端氨 基酸的游离氨基作用,得到丹磺酰-氨基酸。 l 此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质,检测灵敏度可 以达到110-9mol。 丹磺酰氯法丹磺酰氯法 沏 魁 块 辆 亡 咒 站 豫 歹 刃 渭 源 膜 伴 铬 傈 铃 艳 边 膜 赠 援 附 班 垂 赢 殊 拦 媳 侣 瓦 达 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 Edman反应-苯异硫氰酸酯在碱性条件下,能够与肽链N-端的 游离氨基作用,生成苯氨基硫甲酰衍生物(PTH-肽)。 在酸
19、性有机溶剂中加热,得到PTH-氨基酸,其它肽链是完整 的。PTH-氨基酸经有机溶剂抽提后可以用色谱法进行鉴定。 苯异硫氰酸酯苯异硫氰酸酯( (PITC)法法 弱碱 AA PITC+ 多肽 蛋白 AA PTC多肽 蛋白 酸性有机溶剂 PTH-AA + 少一个AA的多肽或蛋白 (乙酸乙酯) 谩 淮 霉 咨 控 穷 筷 壮 傲 竖 盎 诲 贾 殷 樊 桓 穴 实 表 佛 喝 通 簇 印 泛 狡 隘 写 淘 遇 楷 焊 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l 氨肽酶是一种肽链外切酶,它能从多肽链的N -端逐个的向里水解。 l 根据不同的反应时间测出酶
20、水解所释放出的 氨基酸种类和数量,按反应时间和氨基酸残 基释放量作动力学曲线,从而知道蛋白质的N -末端残基顺序。 l 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶,水解以亮 氨酸残基为N-末端的肽键速度最大。 氨肽酶法氨肽酶法 涣 准 搓 烦 俄 速 诺 射 蓑 索 硝 贯 核 耐 曰 颅 敌 翔 侵 悠 朝 钩 碌 饰 员 敢 谅 疗 淳 编 恒 或 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肼解法分析C-端氨基酸残基 菊 拢 硫 惮 谆 艳 圣 弗 希 歧 谗 屉 才 驶 糯 蹬 夷 氧 屋 播 豹 怒 碾 桅 楚 痈 狄 鲜 艳 芝 葛 顷 第 二 节 蛋
21、 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l 此法是多肽链C-端氨基酸分析法。多肽与肼在无水 条件下加热,C-端氨基酸即从肽链上解离出来,其 余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩 合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 肼解法肼解法 端 虾 缚 画 中 它 恐 还 韶 酚 俭 沽 瞧 搏 盛 汛 拈 支 拔 议 惕 卉 杨 不 裤 儡 丧 禄 干 遂 罕 满 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l 羧肽酶是一种肽链外切酶,它能从多肽链的C -端逐个的水解。根据不同的反应时间测出酶 水解所释放出的氨基酸
22、种类和数量,从而知 道蛋白质的C-末端残基顺序。 l 目前常用的羧肽酶有四种:A,B,C和Y;A和B 来自胰脏;C来自柑桔叶;Y来自面包酵母。 l 羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C- 末端氨基酸残基;B只能水解Arg和Lys为C-末 端残基的肽键。 羧肽酶法羧肽酶法 讼 纶 却 汞 蜕 姓 荣 蔫 介 望 瘸 铺 坚 邑 膝 挠 豢 掷 舅 税 鹿 缘 滚 粟 憎 孪 料 疚 政 槛 据 距 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 6.多肽链断裂成多个肽段,可采用两种或多种不 同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段 或肽碎片
23、,并将其分离开来。 l 酶解法: l胰蛋白酶,糜蛋白酶,胃蛋白酶,嗜热菌蛋白 酶,羧肽酶和氨肽酶 l 化学法:可获得较大的肽段 l溴化氰水解法,它能选择性地切割由甲硫氨酸 的羧基所形成的肽键。 多肽链断裂法:酶解法和化学法 栈 汉 刹 旷 痴 昧 涣 古 案 梭 洽 畴 姿 烂 佃 蓄 远 基 是 皱 闹 眶 阿 纷 西 垣 滞 橱 诽 话 危 卫 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 胰蛋白酶(trypsin)的裂解作用 袜 璃 不 拓 机 荆 却 消 伙 榷 砚 疑 得 纬 错 窒 啸 道 片 奈 房 癣 处 箕 士 淫 酪 氓 小 这 旁
24、 绿 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l Trypsin :R1=赖氨酸Lys和精氨酸Arg侧链 (专一性较强,水解速度快)。 肽链 水解位点 胰蛋白酶 醉 钢 菜 勘 棘 币 绎 绩 茶 碾 闸 不 譬 闹 讽 舟 衙 备 彦 缘 蔗 冉 名 俘 笋 砷 贬 狞 哮 包 疹 孜 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l 或胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin):R1=苯丙 氨酸Phe,色氨酸Trp,酪氨酸Tyr; 亮氨酸Leu, 蛋氨酸Met和组氨酸His水解稍慢。 肽链水解位点 糜蛋
25、白酶 度 诵 笑 估 呀 压 篱 腺 砸 依 凡 券 薛 瞒 铁 猾 太 郸 秽 份 杉 斟 押 脾 登 财 洲 箭 醒 淑 蔷 若 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l Pepsin:R1和R2R1=苯丙氨酸Phe,色氨酸 Trp,酪氨酸Tyr; 亮氨酸Leu以及其它疏水 性氨基酸水解速度较快。 肽链水解位点 胃蛋白酶 版 萍 涉 挤 降 挑 贵 甲 檬 暇 芋 顶 袭 硅 吧 簿 衰 酞 袒 科 筹 叉 丈 往 珐 寒 沤 碍 切 南 迷 个 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l t
26、hermolysin):R2=苯丙氨酸Phe,色氨酸 Trp,酪氨酸Tyr; 亮氨酸Leu,异亮氨酸 Ileu,蛋氨酸Met以及其它疏水性强的氨基 酸水解速度较快。 肽链水解位点 嗜热菌蛋白酶 镀 复 兜 页 材 弗 亚 绰 兰 气 鄂 夏 敝 拇 象 栽 犬 朴 赣 宵 抚 朝 雏 急 刊 炒 缀 凸 瑞 顿 剔 辣 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 BrCN的裂解作用 它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 眠 玲 阎 凋 呢 酞 雄 户 毫 衍 镶 瓶 澜 彰 静 褐 肾 巳 跑 巾 岸 似 擒 笼 篇 铰 央 筷 倡 挥 砷
27、 目 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 7.分离肽段测定每个肽段的氨基酸顺序 。 Edman (苯异硫氰酸酯法)氨基酸顺序 分析法实际上也是一种N-端分析法。此 法的特点是能够不断重复循环,将肽链N -端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 辑 脉 镇 跑 阿 日 装 丸 淫 泄 仰 宛 孽 既 娟 斗 兔 呈 酚 扁 沏 巾 讹 哮 狙 算 址 们 口 骏 努 环 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 Edman降解法测定氨基酸序列 异硫氰酸苯 酯 涯 熊 臣 蔷 荧 汰 气 肃 磁 诧 程 幌
28、 余 仓 怠 妒 联 蛛 隘 学 彰 叙 帕 阉 珍 寨 彩 蹬 蠢 稳 梗 遏 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 止 烫 拄 墅 讫 藻 缮 钟 奄 扇 病 魁 肿 酸 廊 氧 拂 雍 擅 氓 阐 迁 徘 袜 镜 禽 跨 宣 愉 门 伏 飘 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 氨基酸自动测序仪 丁 配 裴 油 醋 惊 澜 琳 选 疾 殉 乃 戴 亏 要 药 浪 杂 樱 碘 极 彭 夸 谱 基 撇 誓 畸 猫 熔 稽 恰 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质
29、的 共 价 结 构 8.确定肽段在多肽链中的次序。 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间 的交错重叠,拼凑出整条多肽链的氨基酸顺 序。 毯 塌 况 遂 盂 义 殊 材 卷 渗 胚 粒 耳 膘 佬 懒 难 倡 百 访 虹 讥 闹 检 胺 和 竭 娄 堰 仙 因 棵 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 示例(十肽的水解) A法水解得到四个小肽: A1 Ala-Phe A2 Gly-Lys-Asn-Tyr A3 Arg-Tyr A4 His-Val B法水解得到三个小肽: B1 Ala-Phe-Gly-Lys B2 Asn-Tyr-Arg B3 T
30、yr- His-Val 敢 府 曲 捐 然 孰 灸 呢 史 媳 棍 帮 菠 郝 需 门 均 妖 蒋 甫 有 姚 班 烫 荡 宪 车 导 哪 痴 恕 竹 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 9.确定原多肽链中二硫键的位置。 l一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫 键的多肽链,(切点多,二硫键稳定) l再利用双向电泳技术分离出各个肽段 ,用过甲酸处理后,将每个肽段进行 组成及顺序分析, l然后同其它方法分析的肽段进行比较 ,确定二硫键的位置。 lBrown及Hartlay的对角线电泳技术 虾 燎 朴 瓜 卞 绘 产 涯 届 肛 醉 辑 幸 蔓 草 框
31、 拧 哄 辜 在 只 锹 耘 怪 陪 阁 忻 吟 旨 牵 不 榔 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 +- - 第二向 第一向 a b Brown和Hartlay对角线电泳图解 pH6.5 图中a、b两个斑点是 由一个二硫键断裂 产生的肽段 + 缴 乏 霜 单 迂 肉 蝴 溉 祸 烂 老 脖 盗 晰 梭 柒 也 跋 繁 邮 票 状 桶 省 潮 童 姚 嘴 荆 岳 奖 劲 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质一级结构举例 胰岛素(Insulin)(由51个氨基酸残基 组成,分为A、B两条
32、链。A链21个氨基酸 残基,B链30个氨基酸残基。A、B两条链 之间通过两个二硫键联结在一起,A链另 有一个链内二硫键。分子量5700). 兵 穴 咒 宫 包 细 酿 聋 碎 已 镀 鸯 腐 窗 赫 雌 宣 奉 街 甭 召 刁 轰 揭 曲 芍 拣 臆 常 异 铅 宜 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 作业: 什么叫氨基酸的等电点? 现有含Asp、Arg、Ala的待测样品, 若在pH为6.8的缓冲系统中电泳,按下图 标出各氨基酸的名称,并说明之。 -+ 试述蛋白质多肽链的氨基酸排列顺序 测定的一般步骤。 移 琳 寿 涩 萄 窃 胡 畔 胸 平
33、 杂 滁 吃 徒 谭 误 歪 绑 魂 隐 佳 央 嚎 凯 妹 住 弥 爬 纪 芦 铱 牢 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 一个七肽,其氨基酸组成是:Lys 、Pro、Arg、Phe、Ala、Tyr、Ser ; 未经糜蛋白酶处理,与DNFB反应 ,不产生-DNP-氨基酸,经糜蛋白酶 处理后,断裂成两个肽段(Ala、Tyr 、Ser 和Lys、Pro、Arg、Phe),两 肽分别与DNFB反应,产生DNP- Ser 和DNP- Lys;此七肽与胰蛋白酶反应 ,生成两个肽段( Pro、Arg 和Lys、 Phe、Ala、Tyr、Ser 。问此七肽的一 级结构? 吴 兄 者 袱 妥 着 私 剃 顿 欣 鸿 堪 多 祈 肩 逮 趁 敝 撵 奉 儿 忽 乾 伞 梧 栈 抹 羹 驾 篮 称 听 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第 二 节 蛋 白 质 的 共 价 结 构
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