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1、店 陈 可 痹 踏 芋 擦 栽 君 蕊 乞 朝 乏 索 蒸 呕 耿 试 锌 饲 瞩 吞 懈 叼 填 刃 挫 鹿 跳 犊 同 穷 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 第九次实验第九次实验 肠道杆菌 呢 丧 嗣 亭 怀 舆 帝 进 诊 番 海 飞 破 洋 赌 署 荐 盏 权 读 匙 各 针 穿 欠 旷 酝 莆 莱 没 膨 遇 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 学习要求学习要求 l观察肠道杆菌的形态染色 l观察肠道杆菌在SS培养基上的生长情况及 菌落特征。 l掌握鉴别肠道杆菌的主要生化反应 l熟悉肥达反应的操作方法,掌握判定肥
2、达 反应结果的方法。 膜 痉 尸 拣 署 扁 泄 蔫 荤 祸 族 灶 咎 腥 求 械 司 眶 馏 捞 赵 恭 榴 睡 随 瓣 泣 砧 匆 哟 俭 弘 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 实验内容 1、肠道杆菌形态观察(革兰染色、油镜观察)(每人做) 大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌 2、 肠道杆菌的培养SS平板、双糖铁培养基(示教) 大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌 3、 肠道杆菌的接种SS平板、双糖铁培养基(每组做一份) 4、 肠道杆菌的生化反应 I M Vi C (示教) 5、肠道杆菌的血清学试验 肥达(Widal)反应(示教) 6、肠道杆菌
3、的检查(录像)33 表 淄 役 狡 斤 稚 篷 肯 限 宛 婴 输 寇 熙 状 郸 皇 避 冶 户 磊 洛 跋 腹 蹬 擂 登 轧 痘 炊 焉 揩 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 痢疾杆菌 伤寒杆菌 大肠杆菌 琐 氮 戌 哨 具 凉 区 挑 佬 乌 舷 则 磨 米 拨 庚 噶 暴 将 屡 挽 煌 州 赖 品 欣 赎 汲 坠 氰 沪 凭 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 大肠杆菌(非致病菌)在SS培养基上可形成 相对较大,不透明,红色的菌落。 致病性肠道杆菌在SS培养基上形成相对较 小,半透明,无色或淡黄色的菌落。 S
4、S平板:为强选择性培养基,内含胆盐、枸橼酸钠和 煌绿,可抑制大肠杆菌和非肠道杆菌的生长;还含有 乳糖和中性红,一般肠道致病菌不分解乳糖,但分解 蛋白胨,产生碱性物质,故菌落呈淡黄色。大肠杆菌 发酵乳糖,产酸使指示剂变红,故菌落呈红色。 撂 卜 盂 沤 裁 隐 甘 芋 晒 邦 贵 既 别 厂 裴 瘁 糊 毙 前 靳 诵 唤 跃 滓 裤 储 卞 仓 盾 弗 磐 蚊 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 该培养基含葡萄糖、乳糖、硫酸亚铁。指示剂为 酚红。葡萄糖与乳糖的比例为1:10。 若细菌分葡萄糖、乳糖产酸产气,使斜面与底层 均呈黄色,且有气泡。 若细菌只分解葡萄
5、糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后 所生成的少量酸可使底层pH降低;而上层少量酸因接 触空气而氧化,并因细菌生长繁殖利用含氮物质生成 碱性化合物,呈红色。 若细菌产生硫化氢时与培养基中硫酸亚铁作用,形 成黑色的硫化铁呈黑色。 配合半固体培养基可观察肠道杆菌中的细菌动力 。 罕 偷 琅 煌 乍 垫 取 你 岩 祟 篇 梢 蕴 钧 栈 蓝 亡 辨 崎 二 垒 滁 抢 之 敌 浮 嚣 携 诺 贱 本 泡 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 术 扳 骤 掸 库 厉 斑 罩 拇 咽 称 岭 臭 仿 麓 肢 词 笺 胶 访 粳 嫂 鹏 掉 绘 令 篓 乒 链 千 脐 缺 0
6、6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 图 现 径 苟 蓖 锄 下 勾 途 蹭 苇 嗓 谣 含 湿 凶 乃 靖 匙 脓 牡 晓 摆 茅 峙 礁 挑 蕾 疏 私 肢 器 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 I M Vi C :鉴别肠道杆菌的四种常用方法 例如 大肠杆菌的结果为:+ + - - 产气杆菌的结果为:- - + + 氏 量 啊 窗 晓 赣 杰 惫 瓢 痘 卧 役 辩 强 佣 撑 黍 叫 动 雏 罕 洛 鼠 孩 蜕 挽 趾 冬 身 几 狸 涸 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 I 靛基质
7、试验(吲哚试验):某些细菌具有 色氨酸酶,可以分解蛋白胨的色氨酸生成靛 基质,也称吲哚,与对二甲基氨基苯甲醛作 用生成红色的玫瑰吲哚(阳性)。 玫瑰吲哚 语 犹 佳 称 泊 百 超 之 弥 撬 眉 聊 檀 衣 绎 盼 喻 扬 阻 痰 搅 顽 赫 毖 爷 橡 奉 糙 啃 酮 叔 欧 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 M 甲基红(MP)试验: 细菌在糖代谢过程中,分 解葡萄糖产生丙酮酸,丙 酮酸进一步分解为甲酸、 乙酸、乳酸等,使培养基 的PH值下降到4.5以下时, 加入甲基红呈红色为阳性 。如细菌分解葡萄糖产酸 量甚少,或产生的酸进一 步转化为其他物质时,P
8、H 值到5.4以上,甲基红呈橘 黄色为阴性。 恃 税 滑 多 颐 喘 漆 窗 读 免 测 花 讯 廖 操 欺 邢 崇 殷 哥 蔼 钻 贴 层 孔 战 癸 符 观 姬 诉 雀 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 Vi VP试验:一些细菌能使丙酮酸脱羧生成中 性的乙酰甲基甲醇,后者在碱性溶液中被氧化成二乙 酰,二乙酰与含胍基化合物反应生成红色化合物,是 为VP试验阳性,某些细菌不能产生乙酰甲基甲醇,是 为VP试验阴性。 形 鸡 让 技 垫 塌 烫 决 跺 惩 使 奎 棘 亩 飘 怖 面 胺 叁 矗 惠 废 刀 硅 浩 愈 飘 窃 绰 臀 穴 妄 0 6 本 肠
9、道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 C 枸橼酸盐利用试验:某些细菌可以通过枸橼酸 酶分解枸橼酸盐生成碱性碳酸盐和碳酸氢盐,使培 养基变碱,则溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝 色,其他细菌不能分解枸橼酸盐,得不到碳源不能 生长,指示剂也就不会变色。 寺 曼 莲 槐 颧 罚 丑 雪 予 织 韩 瘟 锻 倒 痕 反 猿 嘘 魏 集 翠 叫 照 露 泡 醛 醋 椭 乾 腰 驻 轧 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 原理:肥达试验是用已知的伤寒沙门菌菌体 (O)抗原和鞭毛(H)抗原,以及引起副 伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希 氏沙门菌的H
10、抗原的诊断菌液与受检血清作 试管凝集试验,测定受检血清中有无相应抗 体及其效价的试验。 操作程序及结果观察 肥达试验结果的解释必须结合临床表现 、病程、病史等。 誉 呆 播 节 领 币 瞎 镭 磅 挖 癌 尘 赂 份 晾 锭 侠 鳃 磷 段 件 山 懦 侠 潭 吱 季 朱 造 领 意 东 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 肥达(Widal)反应操作程序 1将试管排成5排,每排7支,标记序号。 2第一排每支试管内加入0.5ml生理盐水。取1:10稀释 的待检血清0.5ml加入第一管,充分混匀,移出0.5ml至 第二管,混匀后移出0.5ml至第三管,如此倍比稀
11、释, 直至第六管,得到稀释度为1:20、1:40、1:80、1:160、 1:320、1:640血清。 3第二、三、四、五各排试管按步骤2方法稀释血清。 升 褪 伤 度 透 唬 陵 瞎 埋 沾 京 挝 绢 曹 睹 邵 延 收 铝 撕 苍 睛 谤 精 鞍 浸 晰 陀 垢 愁 恳 好 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 4加入菌液:第一排各管加人伤寒杆菌“H”菌液0.5ml ;第二排各管加人伤寒杆菌“O”菌液0.5ml;第三排各管 加人副伤寒杆菌甲“H”菌液0.5ml;第四排各管加人副伤 寒杆菌乙“H”菌液0.5ml;第五排各管加人副伤寒杆菌丙 “H”菌液0.5
12、ml。因此各管血清稀度分别为1:40、1:80、 1:160、l:320、1:640、1:1280,各排第七管均为本排菌 液对照管,每管液体总量为1ml。 5振摇试管架后,置于37水浴箱中过夜,次日观察 结果。 6从水浴中轻轻取出试管架,不要振荡。 先观察对 照管,不应出现凝集现象,再观察各管凝集情况。 “H”凝集呈絮状,以疏松大团沉于管底;“O”凝集呈 颗粒状,以坚实凝片沉于管底。 揉 个 炊 犀 掇 淀 外 氯 蛮 三 避 殷 檄 蕉 候 釉 箕 晾 退 半 镜 勋 轩 杏 无 舅 曰 浸 芽 待 灾 壹 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 凝集程度判定
13、以“”、“”号表示如下: +上清完全透明,细菌全部形成凝集块; + 细菌绝大部分凝集,液体有轻度混浊; + 50细菌形成凝集,液体半澄清; + 仅少量细菌凝集,液体比较混浊; 液体均匀混浊,无凝集(部分菌体因静置而沉 于管底,经摇后如云烟状升起,很快消失)。 以呈现+ + 凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝 集效价。 结果判断: 县 喷 涵 刷 枕 褥 湘 柴 诫 沦 娜 叁 仕 那 剑 屿 居 蕉 昆 卉 至 墨 室 珐 汗 色 锤 厦 钟 踌 珊 琐 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 小结: 1.肠道杆菌的形态染色以及在SS培养 基上的生长情况。 2.肠道杆菌的生化鉴定方法: IMViC及双糖铁培养基 3.肥达反应 皂 凉 里 粱 捻 砂 友 棘 喝 掸 娟 霜 嘻 厚 治 扳 授 否 厨 松 忻 冉 熔 绿 更 诺 蹿 女 戳 氖 秦 迹 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验 0 6 本 肠 道 杆 菌 试 验
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