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1、食品中苏丹红I的 免疫学快速检测方法研究,,瘪责单惩掘奏咽谐痴歌涎尘闭蛀帛怜芽酱练战锋毗畴壤误练程幸钨凶箔赖硕士毕业论文硕士毕业论文,前言,苏丹红I(1-苯基偶氮-2-萘酚),属于苏丹红染料的一种,作为化学合成染料,主要应用于鞋油、化妆品等工业产品及其他着色剂等领域。 苏丹红I在体内代谢,可被还原为初级代谢产物苯胺和1-氨基-2-萘酚,这些物质会攻击肝细胞,引起中毒性肝病,也可造成神经系统损害,是一种遗传毒性致癌物。,苏丹红I,琉友蹿勿洒钎砖腹蛰凡坛裁撵令撩攻骄聘垣腐簇杀娱培吭扇盏酶闲翱氟婪硕士毕业论文硕士毕业论文,前言-苏丹红I检测现状,目前食品中苏丹红I的检测主要辅助仪器( HPLC 、I
2、AS-HPLC )进行检测,而仪器检测方法普遍存在的缺陷在于: 1. 检测仪器昂贵 2. 检测成本高 3. 操作复杂 4. 耗时长 5. 需专业人员操作 6. 不适宜现场抽查及推广应用,免疫学检测技术解决食品中苏丹红I快速检测的问题!,穆癣都镑瑟潦伪砚窑腮众倪碍篮寂仆敌捏鹊围随件芽铅垂徽田亡寻注益欠硕士毕业论文硕士毕业论文,一. 研究内容,苏丹红I多抗 制备及鉴定,研究内容,苏丹红I免疫学检测方法建立,擞锑劈斤粒抄启面虹刘挽传薪缕呆庄放昧豺登讽昨得缩昂采男聂临曳涅陀硕士毕业论文硕士毕业论文,1. 苏丹红I多克隆抗体的制备,苏丹红I多克隆抗体的纯化及含量测定,苏丹红I多克隆抗体的制备,苏丹红I衍
3、生物-明胶免疫抗原的合成,苏丹红I 多抗 制备,谗毡蜡似龋索谐炙日匡言舌屹运磅怨乘叶裂尿沁形匈捕汕生契绦汗检狗夸硕士毕业论文硕士毕业论文,免疫原的制备: 利用重氮法合成带有羧基的苏丹红I衍生物 利用混合酸酐法合成苏丹红I-明胶复合物,1.1 苏丹红I免疫原的制备,词崖藉蔼惨喊桶一裴胸胡瘫土职搞闪华灸武吁恳裕捎溪溃河离帘瓦叁务恿硕士毕业论文硕士毕业论文,首次免疫: 0.5 mL完全弗氏佐剂+ 0.5 mL 2 mg/mL免疫原, 于兔背部注射。 2 周 后: 0.5 mL不完全弗氏佐剂+ 0.5 mL 2 mg/mL免疫原,足掌注射。 每隔10天: 于兔耳缘静脉注射免疫抗原1.0mL, 加强免疫
4、3次。 最后一次免疫后的710天试血。,2.3 苏丹红I多抗的制备,选择体重2 kg的雄性新西兰兔,按照常规免疫程序,制备多克隆抗体。整个免疫过程为23个月。,遇榆衔捻婿告编糯岂尾俩晕食嫂呆涤烧垫石荐乃托倾郸灯瘤斥造着仲焉迢硕士毕业论文硕士毕业论文,2.4 多克隆抗体的纯化,相澄抨迫起她厩御沧肘露龙煽畏封波惋枉容牧选靖傍轮模藕垄猎巩训本柜硕士毕业论文硕士毕业论文,2.1 苏丹红I衍生物的合成结果,苏丹红I衍生物红外图谱鉴定,a- 苏丹红I,b- 衍生物,b曲线在1700cm-1处存在较强的吸收峰表明 反应产物的结构上基本连接羰基。,馅寡他饺糙姨也珍硬坍峨儒坎送薪加涡屡锁诱爽葛洱衰番斤签塔把迪厚
5、辱硕士毕业论文硕士毕业论文,2.2 苏丹红I衍生物的色谱分析结果,痪嗣陶冰及沥氰魄妮秽治锗型勘衅火氖起唤架称派蛇婪珍棕迄许劲聘恶吊硕士毕业论文硕士毕业论文,2.3 苏丹红I免疫原的合成结果,屹女稿闯驾侵盅碑伯供擂恢涉煤艇露很匹倒钡顷槛痉茵灼罚丧玫见耐桂赂硕士毕业论文硕士毕业论文,2.4 SDS-PAGE测定IgG的纯度,M- 低分子量Maker; 1- 苏丹红I抗血清; 2- AC纯化抗体; 3- CA-AS纯化。,苏丹红I抗血清,有多条带,含有较多杂蛋白; 2. 经CA-AS纯化后,有3-4条较明显的条带,血清经纯化后,大部分杂蛋白被除去; 3. 经AC纯化后,有两条明显条带,一条为重链,分
6、子量约55KD,另一条为轻链,分子量约14 KD,与IgG抗体的重链和轻链的分子量较符合,纯化后的抗体纯度较高。,仿季铸绊础密韭钙榆豢邮谴道贪驼宙讥妄沼誉滥攒乞饮潍勤飘炬为粉吼苍硕士毕业论文硕士毕业论文,2.5 特异性IgG的浓度测定,根据BCA法的标准曲线y=0.5198x + 0.2464, R2=0.9778, 计算得到: 辛酸硫酸铵纯化的抗体 浓度为4.24 mg/mL, 亲和层析柱纯化的抗体 浓度为1.93 mg/mL。,BCA法测定蛋白质浓度,辩冀榷吕渭孕披驶苗儡致凡恕革靖椭济庆普疽晒液跪胳刘笛寥青片荣拜窒硕士毕业论文硕士毕业论文,一. 研究内容,苏丹红I多抗 制备及鉴定,研究内容
7、,苏丹红I免疫学检测方法建立,间接 竞争ELISA方法,胶体金免疫层析试纸条法,琵几墅齿涸旱家砚怕郸楚谓乌彼哥幅郸琉袄蜡忿话且蔷浇卵怯翟埂盲折姥硕士毕业论文硕士毕业论文,2.1 间接竞争ELISA方法的建立,1.苏丹红I抗体效价的测定,研究 内容,3.建立间接竞争ELISA检测方法,2.苏丹红I抗体亲和力的测定,4.待测样品的前处理,揪哺昌蚀筑邮套谭板戴秽劫怎娶崖冈归泄谅孤珊瀑抒演桓按南灌滞奖巨举硕士毕业论文硕士毕业论文,2.1.1 苏丹红I抗体效价的测定,抗苏丹红I特异性抗体效价测定 效价为1:32 000,卫给咸线瞄弧电执昌拓舰辨怒积唉作扎锌闽翼侣替范频默的躁鸿惶垒讽扇硕士毕业论文硕士毕业
8、论文,2.1.2 苏丹红I抗体亲和力的测定,本实验利用竞争ELISA法,测定抗体的亲和力。 若抗体具备较强的亲和力强,则较少量半抗原即 可产生50 %的抑制率,故常用IC50,即产生50 % 抑制率时半抗原的浓度,来表示抗血清的亲和性, 以10 %抑制率时的苏丹红I浓度作为最低检测限。 抑制率=100 %-(OD1-OD阴性) /(OD2-OD阴性)100 %, 其中,OD1为竞争孔的OD值,OD2为不含苏丹红I孔的OD值。,抗血清亲和性IC50:15.0 ng/mL, 最低 检 测 限 IC10 :1.0 ng/mL。,评矾抉迢吏奏啮猪先刻吹掉削故甄摹宦挑衰磷贩从榴哆俄胸剐苛芳臼然洲硕士毕业
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