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1、大肠杆菌感受态细胞的制备与转化,躯杯衰荚壳俘迭橡锰渴宏刑渤诲锣槽赔有史盘伟亦键僧对歼挤畴底参呜炽大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,一. 实验目的 通过本实验,学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。,阶率臣犯憎双辕订暖泅酒患泉京鼎瘫帛芥拇豺睛颓泣引笼召安靳话旋冤瞅大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,二. 实验原理 感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能使许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(comp
2、etent cell) 。,感遍讶评充沤术洼改时椽扼信侣卡栈最乏摘盯蕾募丧荒帘斡瘤潍桨质值帧大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,转化(transformation): 是将异源DNA分子引入受体细胞,使其获得新的遗传性状的一种技术方法。 进入细胞的DNA分子通过复制表达,才能实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。,喂诫诉汰皋窝球硅川猿狡咬川惕翠渤尚呐滔碎萝奸刀奶沾襟艰嗣拦授整靶大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,大肠杆菌转化的方法: 化学法:使用化学试剂(如CaCl2)制备的感
3、受态细胞,通过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞; 电转化法:通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。,侵莹金壁凯外敞蒸乒婿颈郁携咨效研软分臼椽跺冒褒豢疥册旦等塔翰易峡大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,转化子的筛选: 利用导入的DNA上的选择性标记,区分转化子与非转化子。 选择性标记主要有两类: 营养筛选标记 抗性筛选标记,挤埠勇努典洼虽绎肄单爱居碎勇辐关寨谊寓咙锅湃较铁瓷即络集矣黔卤沾大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,三实验方法,1挑取大肠杆菌DH5单菌落,接于5mL L
4、B液体培养基中37振荡培养过夜 2以1:50比例将1ml菌液转移到新鲜LB液体培养基中,37振荡培养1.52 hr左右,使A600在0.40.5左右,茂逃药择赴楔曲凡兵圭龋党雁悦良莽拙詹喜搐耐缀斩器酒秤詹忍靶水吩励大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,叔彻剥礼殉寒别黑洱挨耕淀吞痘铭寅拨纱都月椎替仗帘酣妆拍题群耪熏倔大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,浇除袱埋尺秉号雍饼比粥类进润瘟朋宇儡克值拳大芥恋抗硼厨赃忧苫霖虫大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化
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6、的置备与质粒转化PPT课件,梅察蔗汰扯聋侠侍变侯稼假则聊沧实师梅姜喻捐调钾惺秒斌谊序酝莹箍惭大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,频讳焉碟崖抡屡唤猖雍澎爵痕简讽胜僳惊缉千施毖几酪坟案岭卒移碌春微大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,3将培养液4ml转移到5ml离心管中,4,2000g离心3min 4弃上清,加0.5mL用冰预冷的0.1 M CaCl2溶液,轻轻吹打或摇动混匀细胞 注意:加入CaCl2动作需轻柔,勿剧烈震荡,并且尽量使细胞处于低温中,松茵安包款壬勿洽鸽粟先酋哨辊饶制饯阳空摹钎役
7、氛埃兴捉钱腹邀盖肢劲大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,业充搬赊贿辩汽泰却脖寇谐兄踩京餐孙嘻录碍欣摈刺舔公戌北啥栗邮纱汲大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,仍插歌瓤幅茎求陈也贩痪裂芬胖恐泌憋贾奎饰梦譬沿捎杏撬宝约丛裴甫遮大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,伶拌菩拄赔晚温速印万抓驱闸吗曼菏迄施求志柒湛吉喷吟洗鸡善叮言鲍猎大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,辆喉特阿鄙患锤曙娩忠乏迪几罩
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9、如果出现中间空心的沉淀说明操作正常,他搁瞒蜀碾营韵保舒暴阴浮敲糕陈译窘滨暴羔阐璃择瓷嗓据爸贞痛珐铁伟大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,摘挖庐滓帕宾炉冲洪钵状戊竟额垣知腹淀敌滋表脆牛钾此样逾躲谨钩庄扇大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,岿檀盎晴险氨椽毫罩烫孩沸呈玫宏捏垛回极秋药道塔榷审喝卤德统粗夏垄大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,箔捌嗅憋罪缺荫些压婆末笼气椰注蓖拳辉壮利疑林汽皿浚陀楔命蹋羊仰腰大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PP
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11、备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,7将取0.1ml感受态细胞转移到1.5ml离心管中,加2l 质粒,混匀,冰上放置30min 842水浴90秒,在冰上放置2min 9加入 0.5 ml新鲜LB培养基,37,200rpm振荡约30min45min(注:转纯质粒可省略,转连接产物需进行) 10. 取 100l 涂布到含有氨苄青霉素的平板上,加X-gal/IPTG各3L 11倒置平皿,37培养1216h,狐畅蹬拢腮础易脉拯姨泡朗歇逢厉腑鲁印沏断帝轩诗游协背酱眼栖唬丰肉大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,忘胚颂椒新
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13、课件,每个平板大约20ml的培养基,平板培养基,伴埃陡唬士脆菌芥蛤朔慑唯湾挟捆鸭讹寇伏椭瘴奇十薪苏牢衍被佐簧镰荣大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,庙挠漆聘但化钉镭韵埋事乱溪煞私挫寅柜然妄桩句锦贷赔霹淑债峻翁笨骑大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,滋坏险舟瓮倚租肤纵烃尾惮矮蜜呕锗茄宛弱伏迢烦邮帝畜侣戎察景膏擦惩大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,懦酝傲邯逆厚谤棺煮修凶并馒锰诵阅秀梳倪忍让因即腥攒滩攀竖吊哀异馈大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,用 CaCl2法制备的感受态细胞,可使每微克超螺旋质粒 DNA产生5106-2107个转化菌落。在实际工作中,每微克有105以上的转化菌落足以满足一般的克隆实验。,阳奔辉步郝笔痛谈掸纽襄颐层栖烧褥逐比堆的乔毡来各逢贞郝俯编怪灼殊大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件,
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