流式检测上机前细胞处理流程与注意事项.doc
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1、.流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程1. 胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液2. 1000r/min离心5min,收集沉淀。3. 沉淀用PBS洗2次,1000r/min离心5min,收集沉淀。4. 细胞沉淀用4预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4过夜。即可送检。备注:1.每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集),细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。 2.样品可在-20保存一个月 流式检测细胞DNA倍体样品处理流程1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液2.1000r/min离心5min,收集沉淀。3. 沉淀用PBS洗2次,加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参,
2、内参与预检测细胞的比例为1:34. 1000r/min离心5min,收集沉淀。5. 细胞沉淀用4预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4过夜。即可送检。备注:1.每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集),细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。 2.样品可在-20保存一个月检测胞内蛋白上机前细胞处理流程1. 收集实验处理好的细胞,用PBS洗2次,2%多聚甲醛固定15min。2. 离心弃掉多聚甲醛,再用70%的冰乙醇固定过夜(4)。3. 离心弃掉乙醇,PBS洗一遍,加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞 15min。4. 直接在0.5%TritonX-10
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