流式细胞术实验技巧及数据分析.ppt
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1、,流式细胞术实验技巧及数据分析 上海交通大学医学院 史桂英,一 流式细胞仪的基本原理 *稳定流动 *激发光斑 *荧光补偿 *荧光素选择 二 数据分析及开窗,FCM原理示意图,层流是液体稳定流动的必要条件,管道中层流 的形成要满足雷诺数 dV Re = 2300, 式中、分别为液体的密度和粘滞系数,d和V分别为管道的直径和液体的平均流速。FCM利用层流技术,使细胞流动稳定,并具有自聚焦作用,为细胞分析分选提供技术保证.,层流技术,液流驱动系统(示意图),流速与压力的关系服从Bernoulli方程,即 P=(1/2)V2 (忽略高度的变化)。改变气压,就可获得不同的流速。,低速 高速不同样本速率形
2、成的样本流,激发光源与光束成形系统,.,20um,64um,32um 0 32um,聚焦距离,激光束,聚焦透镜,强度,光束成形与细胞受照方式,这种椭圆形光斑的检测区保证每个细胞分别受到光照且受检时受到一致的光照 FCM的单细胞照明技术,荧光光谱重叠,FITC和PE荧光光谱重叠,Uncompensated vs Compensated,FL1,FL2,利用电子技术或计算机软件等方法将串入相邻荧光通道的信号加以扣除的方法称“荧光补偿”,荧光补偿,荧光补偿,Mean值判断补偿,双或多参数荧光抗体的组合标记,FITC+PE 488 525 、575 绿色、橙色 FITC+T red 488 525 绿
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