鱼类病原菌荧光假单胞菌的致病机制及宿主抗菌免疫因子的作用研究.docx
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1、鱼类病原菌荧光假单胞菌的致病机制及宿主抗菌免疫因子的作用研究海水养殖鱼类经常被病原微生物所感染, 导致产量下降 , 给水产养殖业带来巨大的经济损失。目前鱼类病害防治仍没有有效的措施, 原因之一是病原的致病机制和宿主的免疫防御机制尚未完全阐明。本文从病原和宿主免疫两方面入手, 研究了鱼类常见病原菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的致病机制和鱼类宿主半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)免疫因子 ( 杀菌 / 通透性增强蛋白 BPI 和 B 型甘露糖结合凝集素BML)的抗细菌感染功能。本文通过蛋白质组学技术, 首先比较了在正常和缺铁培养环境中荧光假单胞
2、菌TSS全菌蛋白的差异表达情况。在蛋白表达谱中发现了22 个具有显著性差异表达的蛋白, 通过查阅文献和结构分析 , 选取了其中四个 , 即 Hem O(血红素加氧酶 ) 、PspB(丝氨酸蛋白酶 ) 、Sod(超氧化物歧化酶 ) 和 TfeR(Ton B 依赖型外膜受体 ), 分别构建了基因突变株 ,即 TSS(35)hemO、TSS(35)pspB、TSS(35)sod 和 TSS(35)tfeR 并进行了功能研究。实验表明 , 与野生株 TSS相比 ,TSS(35)hemO、TSS(35)pspB 和 TSS(35)tfeR 在组织侵染、致死率和抗宿主血清杀伤等方面的能力都显著降低, 表明
3、 pspB、hemO和 tfeR 是参与感染的毒力基因 ; 对宿主的免疫保护实验结果显示 , 当重组的 TfeR和 PspB以亚单位疫苗的形式免疫鱼类宿主后 , 宿主对于 TSS的侵染产生了显著的免疫保护效应 ; 抗体阻断实验表明 , 抗 TfeR 的抗体抑制了荧光假单胞菌 TSS对宿主细胞的侵染。这些结果表明 , 环境中铁的含量会影响荧光假单胞菌大量蛋白的表达发生变化 , 其中包括一些重要的毒力因子。 利用蛋白质组学技术 , 比较了在正常和缺铁培养条件下荧光假单胞菌TSS外分泌蛋白的差异表达情况。在外分泌蛋白表达谱中 , 发现了 15 个具有显著性差异表达的蛋白, 选取了一个差异蛋白丝状血凝
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