痰抗酸杆菌的荧光染色法.ppt
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1、抗酸杆菌的荧光染色检查法,抗酸杆菌的荧光染色检查法,主要内容 1.原理 2.操作程序 3.舜宇EX30荧光显微镜的操作使用 4.质量控制,抗酸杆菌荧光染色的原理,抗酸杆菌是无色半透明的有阴电荷和很微弱的固有荧光的微生物,而荧光素金胺O是一种含有自由氨基的金黄色碱性染料,它的离子带有阳电荷,因此金胺O能和带阴电荷的抗酸杆菌结合而使其着荧光色素,当其遇到紫外线或青色线时,即可激发出桔黄色荧光。,抗酸杆菌荧光染色检查操作程序,(一)涂片 取经95%乙醇擦拭脱脂过的干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻片,于玻片磨砂端用铅笔在背面左端1/3标注实验编号和序号; 在生物安全柜内,小心打开标本容器,用折断的竹签
2、(需事先准备好)茬端挑取痰标本的脓样、干酪样部分,于玻片右侧2/3处均匀涂抹成1020mm卵圆形痰膜,待自然干燥。,抗酸杆菌荧光染色检查操作程序,(二)染色 1把痰片放在染色架上,痰片间距应大于10mm,火焰固定(5秒钟火焰在玻片下方通过4次);2.滴加0.1%金胺染液,盖满痰膜,保持染色 15分钟。染色时应始终保持痰膜被染色液覆盖,必要时可续加染色液。,抗酸杆菌荧光染色检查操作程序,(二)染色 3流水自玻片上端轻缓冲洗,洗去染色液后倾斜玻片沥去残余水; 4滴加脱色液(3%盐酸乙醇),脱色3分钟或至痰膜无色; 5.流水自玻片上端轻洗,如果脱色不彻底,重复脱色操作;,抗酸杆菌荧光染色检查操作程序
3、,(二)染色 6沥去残余水; 7滴加0.5%高锰酸钾复染液,保持染色14分钟(根据试剂说明书或经验); 流水自玻片上端轻洗,洗去复染液,沥去残余水,待自然干燥。,抗酸杆菌荧光染色检查操作程序,(三)镜检和报告 使用汞光源灯或LED光源的荧光显微镜,用10目镜,20物镜观察,发现疑似抗酸菌的杆状物,转用40物镜确认。在黑暗背景下,抗酸杆菌呈黄色绿荧光,杆状略弯曲。按下列标准报告结果: 1.抗酸杆菌阴性:连续观察50个视野,未发现抗酸杆菌。,抗酸杆菌荧光染色检查操作程序,(三)镜检和报告 2.抗酸杆菌(19条):19条抗酸杆菌/50个视野(报告抗酸杆菌数)。 3.抗酸杆菌阳性(1):1049条抗酸
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