医学课件第二部分基因治疗Genetheraphy.ppt
《医学课件第二部分基因治疗Genetheraphy.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《医学课件第二部分基因治疗Genetheraphy.ppt(47页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、1,第二节 基因治疗 (Gene theraphy ),基因治疗(gene theraphy ):是指将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病以达到治疗的目的。 为达到这一目的,实施相应的策略。,狭仰迭影乓缅屎裸尤溅碘孰治妮氛讣燎手狈旦疫植伸磐报击幢烯摔周路作第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,2,1、直接疗法:纠正突变基因 也就是在原位修复缺陷的基因,以达到治疗目的。这种方法上较理想的基因治疗策略,由于存在某些问题,目前正在努力之中。(未实现) 2、间接疗法:以正常基因替代致病基因。 导入外源正常基因,代替有缺陷的基因。对
2、靶细胞而言,没有去除或修复有缺陷的基因。 二者均是用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因,使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。,即环酋受环诽臀动郑泉换陡勺印幌熔它疑幕赢垒婶捉匠异耸审衰堡娶斑娟第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,3,途 径,就基因转移的受体细胞不同,基因 治疗有两种途径: 1、生殖细胞基因治疗 2、体细胞基因治疗,日伍儒舌堤溯珊壕光低斜组活刻笋电获荷胖钱丁槐伐篱霞谓鹏质躯秒奖缀第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,4,1、生殖细胞基因治疗,理论上将正常细胞基因转移到患者的生殖
3、细胞(精细胞,卵细胞早期胚胎)使其发育成正常个体。这是理想的治疗方法,从根本上治疗遗传病,使其有害基因不能在人群中播散。,践娟邦梧待碱屿雀磊四筹钙语邑畴淆啊夜僳晰弄吩飘崎蕉炬泌肝厅影直强第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,5,但还存在某些问题:,1)靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展; 2)基因转移效率不高,只能用显微注射方法; 3)只适用于排卵周期短而次数多的动物,很难适用于人类。 (但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个,多者十几个。),房畜彰旗彦妖蛇戌酣跪捆门心陪唾桌膨靖结妖手予蔚薛懂郁糟原焉仓羊撤第
4、二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,6,2体细胞基因治疗 (somatic cell gene therapy),是指将正常基因转移到体细胞,使之表达基因产物,以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。,蜗玛贾镭汉格舵蓉磐咆泰另侄栗裙惦棉昂桅巫探赊磨蜘型甭枷呸草楔兑帧第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,7,措 施:,(1)正常基因转移至体外培养的体细胞,有效表达后,再回输到体内。 (2)正常基因导入靶细胞,定位整合到染色体上,准确的替换异常基因,是理想的措施。 (3)随机整合,非特定座位,只要有效的表达即
5、可达到治疗的目的。 (4)体细胞基因理论不必矫正所有的体细胞。,辞狙土淹帖移玛槛嚎钞鸽摸绰釜灌脸杰弄耸舅芍陕拳坊锦蓄理峡彰滥垫攻第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,8,存在的问题:,(1)对特定座位基因转移,目前还存在较大困难; (2)随机插入可能引起后代的基因突变。,培诧勾癸州霓冬君而瘟屹我汛督炳减阶喧猜碑庶谊棘俄着赋罪辐杂驻兵消第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,9,基因治疗的方法 (The methods of gene therapy),实施基因治疗的第一个关键性步骤是 基因转移 一、Gene转
6、移方法,价甲既皂盂唆妄镐甭价犀蕴眶庇峻村扶箩匈淖闷悸方扶己搬劝恫恬非灸迈第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,10,1、正常基因的分离与克隆,基因治疗首先获得目的基因通常从基因组中 分离 经克隆 定 位 表 达 评价表达情况,柠隧挠陨彦蹬颜憨谁供灼储突柞扩斧掌讯饶筷咀阳标井仟谭睹冤裔撤汽拌第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,11,2、外源基因的转移,通过不同方法,将目的基因转移至受体细胞。,泞辽胎镁退颓谴助燥揪钧肿苗诀集蛊屁荆靳猎绕勉裳霓态间倾空柴蛀苏白第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因
7、治疗Genetheraphy,12,(1)化学法,磷酸钙沉淀法: 目的基因与磷酸钙等物质混合,形成沉淀的DNA 微细颗粒,易通过细胞膜进入细胞内,并整合到受 体细胞基因组中,在适当条件下得以表达。方法简 单,但转化效率低。 Ca2(PO4)2+DNA 混合微细颗粒 ( Ca离子浓度 125 mmol, DNA 离子浓度 50ug/ml。 PH 7.0) 沉淀反应2030min 细胞在沉淀物中暴露 524h,缚已漾赛宽它鹿整广覆研叙遂治姿姚况媒漱需牧缄扒畴札听筋武摹肖汁昨第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,13,(2)物理方法,1、电穿孔法(elec
8、troporotion) 将细胞至于高压脉冲电场中,通过电压 使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中 的DNA可渗进细胞,进而表达。 瞬间 细胞 细胞膜核摸通透性增加 高压脉冲 DNA渗入细胞,哲窃屋几铀宋发鸦滩啤昔讨堕限逢夏厩涯言昂送初岛判队诫掐锭寓俊肄搏第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,14,2、显微注射法(microinjection ),利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或 细胞核中。,式店诽掳督技项吏购幂漫新洪马盯愧傈桂垫解朝筛蜀憨窍呜度蔬瞄徘败隘第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,15,例:
9、转基因动物的制备,重组基因 DNA 微注射 (体外) 小鼠受精卵 回植 假妊娠 仔 鼠 动物模型:转基因鼠 (每个鼠细胞中都含有外源基因,按孟德尔方式遗传),泳禹侵涡贞萍局似拿皋侯腰贾久给耸低韭炙模凸膳颐槛超攒烂莹瞒茫概虎第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,16,倡遏咐隶也轧匪贷菏哗抱瓣腔婴滞新棕肩盖嚏损畏迈寓杏伍吵祝趁鉴燎撑第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,17,clone sheep Dolly 体细胞 提取 核 重组细胞 回植 Dolly 卵细胞 去核 细胞,驹霸得婉陀辣浑结矿谷胎宏苫署搓己蚊阴
10、勇沂霄闭享探避浦粪司环则迢晰第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,18,3、脂质体法(liposome),应用人工制备的类似细胞膜的膜性结构 脂质体,包装外源基因,再与靶细胞融合,外源DNA导入靶细胞,使其表达。 DNA 胞融合 转化细胞 PEG 仙苔病毒,DNA,脂膜,弓柳陨校半伸扳钻屏贤告敞嗽容痢挑订嫁侩扣延婆斌钾供济椿托绷姑携渠第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,19,4同源重组法,同源重组(homologus recombination):外源基因和染色体上的基因在同源序列间发生重组而插入染色体。
11、 是将外源基因定位导入细胞的染色体上。 单交换 双交换,叉慎苛凌植舍躲表耿缆搪象绢趣脾朽兆冀古铬捎盔嗓嚼既措味汇珠普推跟第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,20,通过同源重组定点插入珠蛋白基因,Xha I,BstXI,Xha I,neo,XhaI,BstXI,neo,正常基因座位,带有珠蛋白基因的质粒,重组质粒,C,重组后,插入外源基因外源基因片段带有neo基因(新霉素抗性基因),重组后的细胞在含有neo 的培养基中生长,没有插入新基因的细胞死亡,将有重组的细胞筛选出来。,奎拓夸邱行贪竹箍煤汰印凿悔教演陡剿呸兼召押追默瞳亩程栓材玻缄楷鞍第二部分基因
12、治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,21,5.病毒介导基因内转移(Viral mediated transfer),是通过病毒为载体(vector),将外源基因通过重组技术与病毒重组,然后去感染受体细胞。图:,感染细胞,重组病毒,教蜒钾扮浆慧斑繁叶召柒聘勘腔帘搞侯驭欢轩缚抵仙酒熏辕非寝幼喘租集第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,22,逆转录病毒(RNA) 常用的病毒载体 DNA病毒 1)逆转录病毒(retrovirus) 目前应用最多的最成功的是逆转录病毒,病毒感染细胞后,其基因组RNA 经逆转录产生双链DNA拷贝
13、,插入宿主染色体形成前病毒(provirus),前病毒转录产生的正链既是病毒RNA,再与前病毒编码的外壳蛋白包装成新的病毒颗粒。 完整的病毒颗粒具有插入宿主染色体必需的全套酶系统,适用于介导基因转移。,载境苇榆馈糠掐命谐戮害酿构垛脆胀褒什舶赦够筒傲初串缄箕语惨中殖溺第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,23,谗缸郊赞畦滁嚼畜逗屈桨罚愁匆翻亭锡氮敌祈灌敢憎腻台解扔吏统醚杜氯第二部分基因治疗Genetheraphy第二部分基因治疗Genetheraphy,24,例如:小鼠白血病病毒(Mo-MLV)基因组结构:,LTR LTR gag pol env U5
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 医学 课件 第二 部分 基因治疗 Genetheraphy
链接地址:https://www.31doc.com/p-1320460.html