222动物细胞融合和单克隆抗体-精选文档.ppt
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1、一、动物细胞融合(细胞杂交),将两个或多个细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。 诱导动物细胞融合的方法:聚乙二醇、灭火的病毒(仙台病毒)、电激 意义:突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交称为可能。,用灭活病毒诱导动物细胞融合过程的示意图,二、单克隆抗体,(单个细胞增殖而形成的细胞克隆只产生完全均一的单一特异性抗体) 化学性质单一、特异性强的抗体 每个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 1975年,英国 米尔斯坦 和 德国 柯勒,骨髓瘤细胞,免疫小鼠,杂交细胞,PEG 灭活的仙台病毒,选择性培养基 杂交瘤细胞增殖 未融合细胞死亡,1.单克
2、隆抗体的制备,将不同种杂交细胞分开,并克隆专一抗体,检测阳性细胞,选择性培养基 杂交瘤细胞增殖 未融合细胞死亡,PEG 灭活的仙台病毒,筛选产生特异抗体的细胞群,如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?,融合后的细胞经选择性培养基培养后,能存活的细胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞,通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释,用多孔细胞培养板培养,使每孔细胞不超过一个,通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体(常用酶联免疫吸附试验法),那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞,挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀
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