乳鼠皮层神经元原代培养与观察.pdf
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1、邵b _ 匾 玄ls t 隆 i c l+ f 赌瑙 - 7 卫R 1 0 3 乳鼠皮层神经元原代培养与观察 邵延坤, , 王溪原; , 工越W , 饶明 俐,( 1 . 吉 林大学第一医院神经内 科, 吉林长春1 3 0 0 2 1 ; 2 . 吉林大学第一医院 骨科, 吉林长春1 3 0 0 2 1 乃. 吉林大学基础医学院病理教研室 吉林长春1 3 0 0 2 1 ) ( 摘 要 目 的: 通过原代培养乳鼠 皮层神经元, 为脑血管疾病的研究提供实验模型。 方法: 酶消化法原代培养出 生1 天Wis t a r 乳鼠的皮层神经元, 利用免疫细胞化学和免疫荧光方法进行鉴定。 结果: 培养的细
2、胞贴壁生长, 胞体饱满, 突起较长。 免疫细胞化学 染色显示神经元特异性烯醉化酶阳性细胞达8 5 % 免疫荧光显示胶质细胞酸性蛋白阳性细胞达1 5 % 。 结论: 酶消化法原代培养乳鼠 皮层神经元是一种可靠, 稳定的获得神经元的方法。 关键词 皮层; 神经元; 酶消 化法; 细胞培养 中图分类号: R- 3 2 2文低标识码: A文章编号: 1 0 0 4 - 0 4 1 2 ( 2 0 0 3 ) 0 2 -01 0 3 - 0 2 P r i m a r y c u l t u r e o f c o r t i c a l n e u r o n s o f n e w b o rn r
3、 a t S H A D Y a n - k u n , W A N G X i - y u n i , W A N G Y u e - h u ffs , e t a G ( 1 . D e p a r t m e n t o f N e u r o lo g l , t h e F ir s t H o s p it a l of P i n U n i v e r s i ty , C h a n g c h u n 1 3 0 0 2 1 ; 2 . D e p a r t m e n t o f O rt h o p a e d ic s , t h e F ir s t H o s
4、 p it a l of T i l in U n iv e rs ity , C h a n g c h u n 1 3 0 0 2 1 ; 3 . D e p a rt m e n t o f B a s ic M e d ic a l S c i e n c e C o lle g e , 3 ili n U n iv e r s ity , C h a n g c h u r l 1 3 0 0 2 1 , C h i n a ) A b s t r a c t : O b j e c ti v e T o e s t a b l i s h o f n e w b o rn r a
5、t a n d fi n d a g o o d w a y to t h e fu r t h e r in v e s t ig a e o n o f a n e x p e ri m e n t 习 c e r e b rov a s c u l a r m o d e l o f p r i m a ry c u l t u r e o f c o r t i c a l n e u ro n s d is e a s e s . Me t h o d P r i m a ry c u l t u re o f c o r t i c a l n e u ron s o f n e
6、wb o rn r a t wa s p e r f o r m e d b y th e m e t h o d o f e n z y m e d ig e s ti o n .E v a l u a ti o n o f n e u r o n sw a s m a d e b y i n a r r r u n o c y t o c h e m i c a l a n d i m m u n o l l u o r e s - c e n c e t e c h n i q u e s .R e s tr t t s C u l t u re d n e u ro n s w e r
7、 es t i c k t o t h e wa ll o f t h e c u l t i v a ti o nbothplate w h e n t h e y w e r e g ro w i n g . T h e n e u ron s s a ti e ty a n d w i t h l o n g a p o p h y s is .l m m u n o c y t o c h e r n ic a l s t a i n in g M e a n wh i l e i n u n u n o fl u o r e s c e n c e t e s t i - i i c
8、 a t e d a b o u t 1 5 % GF APshow ed(ghal 8 5 % N S E ( n e u ro - s p e c ifi c e n o l a s e ) p o s it i v e s t a in in g c e ll s fi b r i li a ry a c i d i c p ro t e m ) p o s i ti v e s ta in i n g c e l l s c dt o r e P 而U 门 了 c w i t h h i g h Ke y o f c o r t i c a l n e u r o n so # n e
9、 w b o rn r a t b y t h e m e t h o d o f e n z y m e d i g e s t i o ni s a r e li a b l e w a y t o o b t a i n 宜n n 曰n d n n n e u ron s a n d s ta b i li t y w o r d s ; C o r t e x ; Ne u mn ; E n z y m e d i g e s t i o n m e t h o d ; C e ll c u l t u r e 神经元是一种高度分化的 细胞, 在动物出生后很少分裂; 而且神经元分化程度
10、高, 神经突起发育成熟, 从成熟神经组织 分离神经元, 会使神经元受到更大的普遍损伤, 因此对神经元 进行分离培养的要求较为特殊。 而建立一种稳定、 可靠的获得 神经元的方法, 可为了解神经元的结构与功能, 阐明其在脑血 管疾病、 神经系统疾病中的作用奠定基础。同时建立一个稳定 的神经元培养体系, 也为诱导干细胞向神经元定向分化提供 可能。 本实验通过酶消化法原代培养乳鼠 皮层神经元, 可获得 纯度较高的神经元, 而为脑血管疾病、 神经系统疾病的研究提 供成功的实验模型。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物及主要试剂:出 生1 天的 Wis t a r 乳鼠由吉林大学 实验动物中心提供。胎牛
11、血清购自杭州四季育生物工程材料 研究所。 D M E M( D u lb e c c o “s m o d i fi e d E a g l e s m e d iu m ) 培养基 作者简介: 邵延坤( 1 9 7 0 - ) , 女, 吉林省东丰县人, 主治医师, 吉林 大学第一医院神经内科在读博士研究生, 主要从事肺血管疾病研究。 购自 G i b c o 公司。多聚赖氨酸、胰蛋白酶, T r i m n X - 1 0 0 均购自 S i g m . 公司。兔抗人神经元特异性烯醇化酶 ( n e u ro n a l s p e c ifi c e n o l a s e , N S
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